一、毛细管电泳法分离检测三种鹿茸样品中天然性激素的研究（论文文献综述）
王泽帅[1]（2021）在《鹿茸中三类常见外源污染物的分布及安全性评价》文中认为鹿茸中外源污染物主要来源于鹿茸生长过程中梅花鹿对所接触的土壤、大气、饲料、水等环境中吸附和积蓄,以及在养殖过程中的药物残留。因此,建立和优化鹿茸中残留的外源污染物的检测方法以及对含有外源污染物的鹿茸进行安全性评价显得尤为重要。本文以鹿茸中的重金属、赛拉嗪和醋酸氯地孕酮为研究对象,对不同污染物建立了相应的检测方法,并分别进行安全性评价。本论文研究内容主要分为三个部分:一、相同饲养管理模式下梅花鹿5只,将采收的5副鹿茸按蜡片、粉片、纱片、骨片粉碎。采用湿法消解前处理及ICP-OES（电感耦合等离子体发射光谱仪）对鹿茸中5种重金属Pb、Cd、As、Hg、Cu的含量进行测定。结果发现鹿茸中As、Hg含量超出《NYT 1162-2006鹿茸片》要求限量,且元素Cu含量蜡片>粉片>纱片>骨片。利用基于THQ（目标危险系数,target hazard quotients,THQ）方法和PTWI（Provisional tolerable weekly intake,暂定每周允许摄入量）方法对含重金属鹿茸进行安全性评价,结果发现重金属的总危险系数（TTHQ）结果为0.2198,重金属最高EWI占PTWI为2.2%。二、相同饲养管理模式下梅花鹿15只,于注射盐酸赛拉嗪10、20、30、40、50 min后锯鹿茸,每个时间点各取3副,鹿茸按蜡片、粉片、纱片、骨片粉碎。应用ICP-MS/MS法对鹿茸中赛拉嗪及代谢产物2,6-二甲基苯胺（DMA）含量进行测定。结果发现鹿茸中均检出赛拉嗪及DMA,赛拉嗪含量为蜡片>粉片>纱片>骨片;鹿茸中赛拉嗪与DMA含量随麻醉剂注射时间先升高后降低,在30min时达到最高。通过小鼠经口急性毒性试验和28d喂养试验开展了含赛拉嗪鹿茸粉的毒理学评价,实验结果显示:以6g/kg·BW的样品给小鼠灌胃,未见明显中毒症状,也未见死亡现象。28d喂养试验各剂量组大鼠在体重、脏器重、血液学指标以及组织病理切片均未有明显差异。三、相同饲养管理模式下梅花鹿5只,锯头茬茸时在鹿颈背部注射增茸素,主要成分为醋酸氯地孕酮。待再生茸长成后收取,鹿茸按蜡片、粉片、纱片、骨片粉碎。应用Qu ECHERS前处理技术及ICP-MS/MS法对鹿茸中醋酸氯地孕酮等激素含量进行测定,结果表明检测出醋酸氯地孕酮,含量自蜡片至骨片依次降低。通过小鼠经口急性毒性试验和28d喂养试验开展了含外源激素鹿茸粉的毒理学评价,实验结果显示:以9.9g/kg·BW的样品给小鼠灌胃,未见明显中毒症状,也未见死亡现象。28d喂养试验各剂量组大鼠在体重、脏器重、血液学指标以及组织病理切片均未有明显差异。
梁秋霞[2]（2020）在《基于化学衍生的羧基类化合物的色谱分析研究》文中指出羧基化合物是一类以羧基为官能团,以碳链为基本骨架的有机物。常见的羧基化合物以盐、酯或游离酸的形式在生命体内广泛存在。其不仅是脂类、碳水化合物和氨基酸等细胞构成物的中间代谢物,也是生理活动中生化反应的底物或产物。它们在生命体内浓度的高低与生物体生长发育,衰老和某些疾病（糖尿病、炎症）息息相关。此外,随着人们对自然改造而滥用羧基化合物,羧基化合物也成为常见的环境污染物之一。因此,建立快速,灵敏度高,准确度高的羧基化合物分析方法具有极其重要的意义。本论文分别采用高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）,超高效液相色谱-质谱/质谱（UPLC-MS/MS）和毛细管电泳-激光诱导荧光检测法（CE-LIF）,并结合化学衍生、固相萃取和液相萃取等技术,分析测定植物、动物组织和人血样品中的羧基化合物。研究内容主要有以下四个部分组成:（1）本实验建立了以4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼-3a,4a-二吡咯甲烷-3-丙酰基乙二胺（BODIPY?FL EDA,BODIPY类荧光染料）为柱前衍生试剂,采用HPLC-FLD法分离测定赤霉素A3（GA3）,吲哚乙酸（IAA）,脱落酸（ABA）,吲哚丁酸（IBA）,萘乙酸（NAA）,2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）六种羧基类植物激素的分析方法。详细探讨了色谱分离条件和衍生反应条件。在20℃下,衍生反应20 min内完成。在λex/λem=490 nm/510 nm的波长下,六种羧基类植物激素在17 min达到基线分离。GA3,IAA,ABA,IBA,NAA,2,4-D的检出限分别为0.75、2.00、0.55、3.00、0.05、0.50 nmol/L,衍生物的迁移时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）分别在1.80-3.73%和3.46-5.01%之间。该方法已成功应用于5种蔬菜水果中植物激素的残留检测,加标回收率在94.12-106.75%范围内。（2）建立了分离检测赤霉素A3,吲哚乙酸,脱落酸,吲哚丁酸,萘乙酸,2,4-二氯苯氧乙酸六种羧基类植物激素的液液萃取（Liquid–liquid extraction,LLE）-CE-LIF的方法。以BODIPY?FL EDA为荧光标记试剂,以28 mmol/L,p H=9.0的H3BO3-Na2B4O7缓冲溶液（含5 mmol/L SDS,4%异丙醇）为背景电解质,当分离电压为10.5 k V时,在λex=490 nm的波长下,六种羧基类植物激素在10 min内达到基线分离。这六种分析物的检出限分别为0.05、0.05、0.05、0.075、0.0125和0.05 nmol/L,日内和日间精度分别小于5.68和6.96%,相对标准偏差（RSD）（n=5）的范围分别为0.03%-1.23%（迁移时间）和1.14%-5.23%（峰面积）。该方法已成功应用于拟南芥花中多种内源性植物激素含量的测定,是研究植物激素功能和调节网络的有力辅助工具。且该方法也成功应用于5种蔬菜水果中植物激素的残留检测,可作为食品中植物激素残留一种分析方法。（3）建立了分离检测12-POHSA,12-PAHSA,12-OAHSA和12-SAHSA四种支链脂肪酸酯（Fatty acid esters of hydroxy fatty acids,FAHFAs）的UPLC-MS/MS双衍生化方法。在建立的方法中,使用固相萃取（Solid-phase extraction,SPE）从生物样品中选择性富集和纯化FAHFAs。在该方法中,采取了一种双衍生试剂的方法,即以（2-氨基乙基）三甲基铵（Cholamine）作为柱前衍生试剂,2-二甲基氨基乙胺（2-dimethylaminoethylamine,DMED）衍生的FAHFAs标准品作为内标,作为同位素标志（Stable isotopically labeled,SIL）的替代品。衍生反应在室温下1 min内完成。结果表明,在Cholamine标记后,FAHFAs的LOD和LOQ分别为0.02-0.07 pg/m L和0.06-0.12 pg/m L,检测灵敏度分别提高了50-126倍。此外,在UPLC系统中,在色谱柱上15 min内可以很好地分离FAHFAs,并具有尖锐的峰形。使用该方法,我们成功测定了人血清样品,大鼠白脂肪,肺,肾,肝和心脏组织中FAHFAs的含量。结果显示在大鼠的不同组织中观察到3种FAHFAs（12-PAHSA,12-SAHSA和12-OAHSA）。另外,我们在人血清样品中成功检测出上述3种FAHFAs。（4）开发了UPLC-MS/MS测定13-PAHSA,12-PAHSA,10-PAHSA,9-PAHSA和5-PAHSA五种PAHSAs同分异构体双衍生化方法。采用上一章节的衍生条件下,五种同分异构体成功与Cholamine和DMED发生衍生反应,DMED衍生的PAHSAs作为内标,作为SIL的替代品。详细探究了MRM模式的参数和五种同分异构体在UPLC系统中分离条件,在最优分离条件下五种同分异构体在20 min内成功分离。5种PAHSAs的LOD和LOQ分别为0.04-0.07 pg/m L和0.10-0.20 pg/m L。检测的灵敏度增加了73-105倍,将这种快速、高灵敏、准确定量的分析方法应用于分离和定量测定人体血液和小鼠组织的PAHSAs的含量。结果显示在大鼠的不同组织中观察到5种PAHSAs同分异构体。并且,我们在人血清样品中成功检测出上述5种PAHSAs同分异构体。
刘雪莹[3]（2019）在《不同规格鹿茸饮片质量分析研究》文中提出目的:建立不同规格梅花鹿茸饮片质量评价方法。方法:通过市场购买和企业提供两种渠道获得不同规格的梅花鹿茸饮片,按照《中国药典》2015版进行鉴别;对鹿茸饮片中水分、灰分、浸出物含量进行测定;采用HPLC法测定鹿茸饮片中次黄嘌呤的含量并对方法进行考察;HPLC法研究不同规格鹿茸饮片核苷类成分的特征图谱并进行方法学考察及主成分分析;采用顺铂致HEK293细胞损伤模型,用MTT法测定鹿茸提取物对HEK293细胞存活率的影响,用MTT法和LDH法测定顺铂诱导的HEK293细胞死亡率的变化,用MDA和GSH试剂盒分别检测鹿茸提取物对CDDP诱导的HEK293细胞损伤的影响;MTT法测定不同规格鹿茸饮片提取物对顺铂所致HEK293细胞死亡率的变化。结果:1.收集到不同规格的梅花鹿茸饮片共80批,其中蜡片、粉片、纱片、骨片各20批;2.采用TCL法对鹿茸饮片中甘氨酸进行鉴别,结果显阳性;显色法鉴别相关结果符合中国药典中关于鹿茸饮片的规定;3.鹿茸饮片中水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量:蜡片>粉片>纱片>骨片,总灰分、酸不溶性灰分含量:骨片>纱片>粉片>蜡片;4.建立了次黄嘌呤HPLC测定方法,次黄嘌呤含量从蜡片到骨片成降低趋势;5.建立测定梅花鹿鹿茸中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、鸟苷、肌苷5种核苷类成分含量的方法采用高效液相色谱法为Aglient Eclipse Plus C18,流动相为甲醇-0.07%冰醋酸溶液（4:96）,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254 nm,柱温为28℃,进样量为5μL。6.特征图谱共确定了6个共有峰,主成分分析结果显示从蜡片到骨片特征性成分含量逐渐降低;7.建立了顺铂诱导HEK293细胞损伤模型;鹿茸提取物浓度在0.25mg·mL-11.0mg·mL-1对HEK293细胞生长有促进作用;鹿茸提取物对顺铂所致细胞毒性具有保护作用,其浓度在0.25mg·mL-1时保护作用最强,加入鹿茸提取物预保护后,使细胞内MDA含量降低,GSH含量升高;不同规格鹿茸饮片对顺铂所致HEK293细胞具有保护作用但效果不明显。结论:不同规格鹿茸饮片化学成分差异较大,从蜡片到骨片呈过继变化趋势。
王斐娴[4]（2019）在《鹿角药材的质量研究》文中认为目的:通过对鹿角药材两个用药部位鹿角与鹿角脱盘的定性鉴别与化学成分分析,分析两者的区别与共性;并以同为鹿骨化部分的鹿骨作为对照,为鹿角药材的鉴定及其质量控制提供依据。材料与方法:材料:样品为鹿角药材5批,鹿角脱盘药材4批,鹿骨1批。方法:1鹿角药材定性鉴别1.1显微鉴别研究分别观察鹿角、鹿角脱盘及鹿骨的显微结构并对其特征（骨碎片中的骨陷窝数量及形状、面积）进行测量;并采用组间T检验法,以鹿骨为对照,比较鹿角、鹿角脱盘显微结构的差异。1.2氨基酸类成分指纹图谱研究采用柱前衍生化高效液相色谱法,以天冬氨酸等18种氨基酸对照,对鹿角药材的氨基酸类成分的指纹图谱进行分析。2主要化学成分分析2.1多糖类成分分析2.1.1总多糖含量测定分别采用苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法显色,以D-无水葡萄糖为对照,分光光度法,对样品中总多糖含量进行测定。2.1.2单糖种类与含量测定以甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、核糖、葡萄糖醛酸、盐酸氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖为对照,柱前衍生化-HPLC法,测定单糖的种类及含量。2.2磷脂类成分分析2.2.1总磷脂含量测定采用钼蓝显色剂显色,以磷酸二氢钾为对照,分光光度法测定样品中总磷脂的含量。2.2.2磷脂酰胆碱含量测定以磷脂酰胆碱为对照,HPLC法,测定样品中磷脂酰胆碱的含量。2.3水溶性蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝G-250显色,以牛血清白蛋白为对照,分光光度法,测定样品中水溶性蛋白质的含量。2.4氨基酸类成分种类与含量测定以天冬氨酸等18种氨基酸对照,采用柱前衍生化高效液相色谱法,对样品中18种氨基酸的含量进行测定。2.5核苷类成分种类与含量测定以尿苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶为对照,HPLC法,测定样品中四种核苷类成分的含量。2.6腐胺含量测定采用阳离子交换树脂柱层析分离,苯甲酰氯柱前衍生化,HPLC法,测定样品中腐胺成分的含量。3数据处理与统计学分析3.1聚类分析以测得的骨馅窝占骨碎片面积比及各化学成分含量为数据来源,应用SPSS 19.0统计软件,对样品进行系统聚类分析。3.2判别分析以测得的骨馅窝占骨碎片面积比及各化学成分含量为数据来源,应用SPSS 19.0统计软件,对样品进行判别分析。结果:1鹿角药材定性鉴别结果1.1显微鉴别研究结果鹿角脱盘中骨馅窝面积占骨碎片面积比为35.5%44.2%;鹿角粉末骨馅窝面积占骨碎片面积比为46.9%56.3%;鹿骨中骨馅窝面积占骨碎片面积比为71.9%。故骨馅窝面积占比由小到大依次为鹿角脱盘,鹿角,鹿骨。鹿角脱盘中骨馅窝长短经比例为2.04:12.38:1;鹿角中骨馅窝长短经比例为1.69:12.00:1;鹿骨中骨馅窝长短经比例为1.54:1。故骨馅窝长短径由大到小依次为鹿角脱盘,鹿角,鹿骨。鹿角与鹿角脱盘骨馅窝面积占骨碎片面积比及骨馅窝长短径比均具有显着性差异。1.2氨基酸类成分指纹图谱研究结果分析鹿角药材氨基酸类成分指纹图谱,共有21个峰,包含2个溶剂峰,18个已知峰和1个未知峰（3号为未知峰）。对其共有峰进行相似度计算,结果显示相似度均大于0.9。2主要化学成分分析结果2.1总多糖含量测定结果蒽酮-硫酸法测定结果,鹿角脱盘总多糖含量为0.53%1.6%,鹿角总多糖含量为0.37%0.42%,鹿骨总多糖含量为0.35%;苯酚-硫酸法测定结果,鹿角脱盘总多糖为0.34%0.96%,鹿角总多糖含量为0.060%0.098%,鹿骨总多糖含量为0.020%。两种多糖测定方法中,总多糖含量由高到低依次为:鹿角脱盘,鹿角,鹿骨。鹿角脱盘与鹿角两种方法测定的总多糖含量均具有显着性差异。蒽酮-硫酸法总多糖测定结果均高于苯酚-硫酸法测定结果。2.2单糖种类与含量测定结果鹿角多糖主要由甘露糖、盐酸氨基葡萄糖、核糖、葡萄糖醛酸、盐酸氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖7种单糖组成,未检出D-半乳糖醛酸,其中葡萄糖含量最高,甘露糖其次,而核糖则含量较少。鹿角脱盘中七种单糖总含量为0.65mg·g-10.96 mg·g-1,单糖构成比为4.02:2.58:1:3.73:4.24:28.71:5.15;鹿角中七种单糖总含量为0.31 mg·g-10.40 mg·g-1,单糖构成比为4.41:4.1:1:3.51:3.56:6.21:4.56;鹿骨中七种单糖含量为0.14 mg·g-1,单糖构成比为4.82:2.65:1:3.73:2.05:5.25:3.43。七种单糖含量由高到低依次为:鹿角脱盘、鹿角、鹿骨,鹿角脱盘与鹿角测得的总单糖含量具有显着性差异,与总多糖含量测定结果一致。鹿角与鹿角脱盘中葡萄糖含量构成比最大且具有显着性差异,故可用葡萄糖含量标识总单糖及总多糖含量。2.3总磷脂含量测定结果鹿角中总磷脂含量为9.99 mg·g-121.6 mg·g-1,鹿角脱盘中总磷脂的含量为2.21 mg·g-17.47 mg·g-1,鹿骨中总磷脂含量为32.1 mg·g-1,总磷脂含量由高到低依次为:鹿骨,鹿角,鹿角脱盘。鹿角与鹿角脱盘的总磷脂含量存在显着性差异。2.4磷脂酰胆碱含量测定结果鹿角中磷脂酰胆碱含量为1.04 mg·g-12.15 mg·g-1,鹿角脱盘中磷脂酰胆碱的含量为0.18 mg·g-11.13 mg·g-1,鹿骨中磷脂酰胆碱含量为3.33mg·g-1。磷脂酰胆碱含量由高到低依次为:鹿骨,鹿角,鹿角脱盘,鹿角与鹿角脱盘磷脂酰胆碱含量存在显着性差异,测定结果与样品药材总磷脂含量测定结果一致,故可用磷脂酰胆碱含量测定结果标识总磷脂含量。2.5水溶性蛋白质含量测定结果鹿角水溶性蛋白质含量测定结果为0.20%0.30%,鹿角脱盘中水溶性蛋白质含量测定结果为0.27%0.43%,鹿骨中水溶性蛋白质的含量测定结果为0.22%。鹿角与鹿角脱盘中水溶性蛋白质含量没有明显差异。2.6氨基酸类成分种类与含量测定结果鹿角、鹿角脱盘和鹿骨中均检出10种游离氨基酸,鹿角游离氨基酸含量测定结果为0.62%0.86%,鹿角脱盘游离氨基酸含量测定结果为0.73%0.88%,鹿骨中游离氨基酸含量测定结果为0.8%。必需氨基酸仅检出一种,为赖氨酸,含量均超过0.1%。鹿角、鹿角脱盘和鹿骨中均检出水解氨基酸18种,鹿角水解氨基酸含量测定结果为26%30.84%,鹿角脱盘水解氨基酸含量测定结果为29.33%30.81%,鹿骨水解氨基酸含量测定结果为52.04%。其中Gly甘氨酸含量最高,均超过4.5%。必需氨基酸检测出8种,赖氨酸含量最高。鹿角与鹿角脱盘中氨基酸的种类与含量没有明显差异,与水溶性蛋白质含量测定结果一致。2.7核苷类成分种类与含量测定结果将鹿角与鹿角脱盘中的核苷类成分含量进行比较,鹿角四种核苷成分总含量为20.71μg·g-1117.1μg·g-1,鹿角脱盘四种核苷总含量为31.33μg·g-1137.9μg·g-1,鹿角四种核苷总含量为36.93μg·g-1。其中核苷类成分含量最高的为黄嘌呤与次黄嘌呤,尿苷含量最低。鹿角中的核苷类含量测定结果与鹿角脱盘无明显差异。2.8腐胺含量测定结果鹿角腐胺含量为7 mg·g-147.9 mg·g-1,鹿角脱盘腐胺含量为31.2 mg·g-151.9 mg·g-1,鹿骨腐胺含量为28.4 mg·g-1。将两者腐胺含量测定结果使用SPSS进行数据处理,无显着性差异,鹿角及鹿角脱盘腐胺含量无显着性差异。3数据处理与统计学分析结果3.1聚类分析结果以样品药材骨馅窝占骨碎片面积比以及八种化学成分（18种水解氨基酸含量,水溶性蛋白含量,总多糖含量,腐胺的含量,总磷脂含量,总单糖含量、核苷类成分含量及磷脂酰胆碱的含量）为数据来源,进行聚类分析,可将鹿角药材聚为一类,鹿角脱盘药材（除8#样品）聚为一类,鹿骨单独聚类。3.2判别分析结果样品药材骨馅窝占骨碎片面积比以及八种化学成分（18种水解氨基酸含量,水溶性蛋白含量,总多糖含量,腐胺的含量,总磷脂含量,总单糖含量、核苷类成分含量及磷脂酰胆碱的含量）典型判别函数为0.001,具有统计学意义。经逐步判别分析,取得了骨馅窝占骨碎片面积比;总水解氨基酸;水溶性蛋白质;总多糖;总单糖组份;腐胺;总磷脂;核苷类为典型判别式函数系数,以典型判别函数值进行计算,骨馅窝占骨碎片面积比及总水解氨基酸等六种化学成分特征值为:Y=0.004 X1+4.257 X2+186.871 X3+71.232 X4-179.25 X5+173.873 X6+3182.981 X7-183.713（Y>0,判为1类,Y<0,判为2类）。在九个样品中,总氨基酸等七种主成分的判别分析取得的判别模型可以将鹿角及鹿角脱盘样本完全区分开,该方法对初始分组样品中所有的样品进行了正确分类,判别分类效果较好。结论:1定性鉴别中,从显微鉴定角度分析,鹿角与鹿角脱盘具有显着性差异,骨馅窝占骨碎片面积比在35%45%范围内为鹿角脱盘,在45%60%范围内为鹿角,大于60%为鹿骨。以鹿骨为对照,骨化后骨馅窝占骨碎片面积比增大,鹿角较鹿角脱盘骨化程度大。测量骨馅窝占骨碎片面积比可为辨识鹿角及鹿角脱盘的重要依据,二者可通过显微测量进行鉴别。鹿角与鹿角脱盘的氨基酸指纹图谱上没有差异。2含量分析中,鹿角及鹿角脱盘在多糖类及磷脂类角度具有显着性差异:鹿角脱盘中总多糖含量高于鹿角中总多糖含量（可以葡萄糖含量来标识总多糖含量）;鹿角中总磷脂含量高于鹿角脱盘（可以磷脂酰胆碱含量来标识总磷脂含量）,可以此为鉴定依据对鹿角与鹿角脱盘进行区分。以鹿骨为对照,随着骨化程度的增大,总多糖含量减少、总磷脂含量增加。在水溶性蛋白质、氨基酸类、核苷类及腐胺角度不具显着性差异。3通过聚类分析和判别分析,取得了典型判别函数,可显着性的区分鹿角、鹿角脱盘和鹿骨,聚类判别效果很好。4临床应用时,以滋补作用用于临床时,鹿角与鹿角脱盘可以联合使用。以活血化瘀作用用于临床,治疗乳痈时,鹿角与鹿角脱盘需区分使用。
郭晓晗[5]（2018）在《中药鹿茸的真伪鉴定及鹿茸饮片的质量等级评价方法研究》文中指出鹿茸为鹿科动物鹿属梅花鹿（Cervus nippon Temminck）或马鹿（C.elaphus Linnaeus）的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角;前者习称“花鹿茸”,后者习称“马鹿茸”。作为传统的名贵中药,鹿茸以其丰富的药理作用,已经被广泛使用了2000多年。据国家药品监督管理局网统计,含鹿茸的中成药有13种,含鹿茸的保健品有65种,鹿茸资源供不应求,价格昂贵。四川、甘肃地方药材标准中还按照当地鹿茸的用药习惯规定白唇鹿、水鹿也可作为鹿茸药用,导致了鹿茸基原的混乱;市场上还存在驯鹿茸、驼鹿茸等作为鹿茸销售,其中以驯鹿茸居多;此外,鹿茸饮片等级混乱,质量参差不齐,鹿茸饮片商品规格包括蜡片、粉片、血片、骨片,市场上出现以骨片冒出血片的现象时有发生;因此需要对鹿茸药材的真伪及鹿茸饮片的质量进行整体质量控制和评价。本论文主要包括以下四个部分:第一部分鹿茸化学成分及质量控制方法研究进展。主要从鹿茸化学成分、标准现状、分析方法及质量控制存在的问题进行概述。综述了鹿茸含有20多种氨基酸、18种甾体化合物、26种矿物质元素等化学成分;比较历版药典、香港药材标准及地方药材标准发现鹿茸标准的不统一;最后综述了鹿茸的质量控制方法,主要以紫外分光光度法、红外光谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用、指纹图谱、气相色谱法、气相色谱-质谱联用及分子生物学为技术支撑,对鹿茸药材及饮片进行质量评价。第二部分建立鹿茸药材酶解多肽的特征图谱。分别在选择离子模式以及子离子模式下对4个酶解多肽候选离子进行传输电压与碰撞能量的优化,从而分别选出两个子离子,构建了八组离子对,在多反应监测模式下,通过数据采集,从而建立了鹿茸药材酶解多肽的特征图谱。第三部分建立正品鹿茸混入伪品（驯鹿茸）的真伪鉴别方法。采集66批样品,其中:花鹿茸40批,马鹿茸15批,驯鹿茸11批,首先以水为提取溶剂,在120℃下提取鹿茸药材的蛋白,使用胰蛋白酶对三种鹿茸药材水提液进行酶解;利用UPLC-QTOF/MS技术建立鹿茸药材的酶解肽图;然后,结合Progenesis QI软件釆用主成分分析法（PCA）,将鹿茸进行种属区分,进一步釆用偏最小二乘法（OPLS-DA）进行因子分析,找出具有鉴别意义的两个驯鹿茸特征肽;然后,在子离子模式下优化条件,分别寻找响应较高的两个子离子,组成四组特征离子对,运用多反应监测模式（MRM）对基原准确的样品和未知样品进行验证;最后,根据特征肽的二级质谱（MS/MS）碎片信息,运用Masslynx Biolynx软件,解析出两个驯鹿茸特征肽的序列,并进行化学合成,验证特征序列的正确性。第四部分不同规格鹿茸饮片的多指标质量等级评价研究。首先结合不同规格鹿茸饮片中氨基酸含量随生长时期,而呈现较为规律的变化的现状,建立了异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生化-高效液相色谱法,分别对鹿茸蜡片、粉片、血片、骨片50批鹿茸饮片中15种氨基酸含量进行同时测定,并进行了方法学的验证,以氨基酸含量为分析指标,对鹿茸饮片的质量进行评价。其次,利用Chem Pattern软件建立不同规格鹿茸饮片的指纹图谱并进行化学计量学分析。包括相似度分析、聚类分析及主成分分析,为不同规格鹿茸饮片的质量等级评价提供了一定参考。然后,根据2015年版《中国药典》定氮仪法测定不同规格鹿茸饮片总氮含量,并进行了方法学的验证,从而对不同规格的鹿茸进行质量等级评价。最后,根据鹿茸饮片的传统饮用习惯,采用2015年版《中国药典》醇溶性浸出物测定法（通则2201）,以稀乙醇为提取溶剂,分别在热浸与冷浸试验条件下进行浸出物的含量测定。结果均表明,氨基酸、总氮、浸出物在这四种规格鹿茸饮片中的含量均为蜡片含量最高,骨片含量最低,差异较为明显;但是血片和粉片的氨基酸含量有所交叉,较为接近,同时,结合鹿茸饮片指纹图谱的化学计量学分析结果,可将不同规格的鹿茸饮片进行质量等级的划分,将鹿茸蜡片定为一等品,鹿茸粉片与鹿茸血片归为二等品,鹿茸骨片定为三等品;由此可在一定程度上对鹿茸饮片进行质量等级评价,规范鹿茸饮片等级混乱、以次充好的的现象。
郭晓晗,程显隆,李明华,张文娟,魏锋,马双成[6]（2018）在《鹿茸的化学成分及质量控制方法研究进展》文中进行了进一步梳理鹿茸作为传统名贵中药材,化学成分复杂,质量控制方法多样。通过大量查阅国内外相关文献,相互比较、分析,对其进行归纳与综述,为完善鹿茸的质量评价体系提供参考与依据。鹿茸中化学成分随生长周期的变化而呈较为规律的变化,其中蛋白质、多肽、氨基酸和甾体化合物等为主要活性物质;其质量控制方法涉及传统的性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别及现代光谱法、色谱法及分子生物学等多种技术。其质量控制方法虽多,但并不完善,面对掺伪造假、等级评价等问题,建立一套灵敏度高及专属性强的鹿茸质量评价体系显得尤为重要。
李锋涛,段金廒,钱大玮,蒋情,刘睿,彭蕴茹,丁玉华,任义军[7]（2016）在《我国麋鹿药用资源的发展与研究现状及其资源产业化的思考》文中研究表明麋鹿为我国珍贵的药用生物资源,其茸、角、骨、肉、血等入药已逾千年,均为我国传统名贵中药。由于麋鹿在我国的灭绝而无药可用。随着麋鹿种群重引入并快速扩大,围绕麋鹿生物资源的保护与利用开展了广泛的现代研究。系统分析了麋鹿药用资源的保护现状,提出了应明确麋鹿作为我国特种经济动物的战略地位,积极开展麋鹿野化驯养与人工规范化养殖相结合的资源发展模式,通过开展以麋鹿药用资源科学合理利用为目的的应用性基础研究,并研究开发独具特色的麋鹿系列产品,促进麋鹿生物资源在中药农业、工业、商业、保健品业、食品业、化妆品业以及加工设备技术等产业化的构想,以期引导和推动麋鹿生物资源综合利用与保护的健康可持续发展。
姚林[8]（2016）在《毛细管电泳和混合模式色谱在药物分析中的应用》文中提出毛细管电泳（capillary electrophoresis,CE）技术的快速发展给分析工作者带来了新的机遇和挑战。CE具有快速、经济、分离效率高等优点,广泛应用于分离有机小分子、无机离子、多肽和蛋白质等物质的分离。此外,作为高效液相色谱指纹图谱的补充,中药CE指纹图谱的建立有利于中药质量的控制和真伪优劣的鉴别。通过在线富集（场放大样品堆积、大体积样品堆积、吹扫法等）,CE的灵敏度可以得到较大的提高,更好地应用于痕量相关物质的检测。混合模式色谱（mixed-mode chromatography,MMC）选择性好、载样量高,可为分析物的保留提供多重机理,在复杂样品的分离分析中表现出较大的潜力。其固定相的研究是色谱领域的热点之一。本论文着手于药学研究中复杂样品的分析,分别对CE和MMC这两种分离方法进行了一定的研究。主要包括以下四部分内容:1.建立了水蛭的CE指纹图谱。系统考察了水蛭的提取条件及缓冲体系种类、浓度和p H值等因素对水蛭CE指纹图谱的影响。最优的提取条件是以生理盐水为提取溶剂,搅拌3 h;最优的电泳条件为:以含有0.5 m M十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）的100 m M（p H=10.0）磷酸盐为缓冲溶液,分离电压-15 k V,重力进样40 s（12 cm高度）。在最优条件下,以日本医蛭为对象,进行了日内和日间精密度试验、重复性试验及稳定性试验,所有共有指纹峰的相对保留时间和相对保留峰面积的RSD≤5%,同时稳定性试验表明日本医蛭样品溶液在72 h内稳定。以上方法学考察表明,该方法快速、简便、重现性好、灵敏度高、可靠、日内和日间精密度良好,适合于水蛭CE指纹图谱的研究。该方法可用于日本医蛭、宽体金线蛭、尖细金线蛭及菲牛蛭CE指纹图谱的建立,还可用于水蛭产地及种类的鉴别。2.采用场放大-大体积进样CE法检测甲磺酸伊马替尼及相关化合物。系统优化了添加剂的种类和浓度、缓冲液的p H值、有机添加剂的比例、进样方式、进样电压和时间等因素,得到最优的电泳条件如下:10 m M Na H2PO4（p H=2.0）缓冲液;5 m M 2-羟丙基-β-环糊精为添加剂;检测波长为267 nm;分离电压为20 k V。在20 min内完成甲磺酸伊马替尼和代谢物N-去甲伊马替尼以及相关杂质的分离。在此基础上,采用场放大-大体积进样技术提高灵敏度,以甲醇:0.5 M HCl（6:4,v:v）作为样品溶液的稀释溶剂,电动进样（15 k V×60 s）。该方法线性范围较宽、日内和日间精密度均较好,并且简便、有效、经济,可用于甲磺酸伊马替尼的质量控制及代谢研究,该方法也为甲磺酸伊马替尼类似物的分离分析提供了一种新方法。3.制备了一种新型的MMC两性离子固定相,并进行了系统的色谱评价及应用研究。在亲水模式下,静电吸附力/排斥力、分配和氢键作用力为主要作用力,可分离一系列极性和离子型分析物。相比于反相液相色谱（reversed-phase liquid chromatography,RPLC）,黄柏提取液在该色谱柱上能够得到更好的分离。结果表明,该色谱柱在复杂样品的分离中具有良好的分离性能。4.综述了CE在动物源性药物分析领域中的应用。
李锋涛,段金廒,钱大玮,蒋情,刘睿,彭蕴茹,丁玉华,任义军[9]（2015）在《我国麋鹿药用资源的发展与研究现状及其资源产业化的思考》文中指出麋鹿为我国珍贵的药用生物资源,其茸、角、骨、肉、血等入药已逾千年,均为我国传统名贵中药。由于麋鹿在我国的灭绝而无药可用。随着麋鹿种群重引入并快速扩大,围绕麋鹿生物资源的保护与利用开展了广泛的现代研究。系统分析了麋鹿药用资源的保护现状,提出了应明确麋鹿作为我国特种经济动物的战略地位,积极开展麋鹿野化驯养与人工规范化养殖相结合的资源发展模式,通过开展以麋鹿药用资源科学合理利用为目的的应用性基础研究,并研究开发独具特色的麋鹿系列产品,促进麋鹿生物资源在中药农业、工业、商业、保健品业、食品业、化妆品业以及加工设备技术等产业化的构想,以期引导和推动麋鹿生物资源综合利用与保护的健康可持续发展。
李锋涛[10]（2014）在《麋鹿角功效物质基础研究》文中研究说明本论文共分七章内容。一、文献研究本部分是在对相关文献进行整理的基础上,系统综述了我国鹿科药用动物角类药材的研究概况,我国麋鹿生物资源的药用历史考证与现代研究,以及麋鹿生物资源的保护与利用现状,在此基础上提出了本论文的研究思路与实验方案。二、麋鹿角资源化学分析评价研究（一）核苷及碱基类成分资源化学分析评价采用HILIC-UHPLC-TQ-MS/MS技术,测定了麋鹿角及鹿角中17种核苷及碱基类成分。结果显示:（1）总核苷含量因鹿龄和角部位不同差异较大,最高的是2岁龄尖部,达49.7 μg/g,最低为3岁龄尖部,仅为5.97 μg/g。3个部位平均总含量最高的是2岁龄,可达28.6μg/g,与马鹿角接近,其次为5岁龄,6-8岁龄,3岁龄,最低的是4岁龄,仅为9.63μg/g。（2） 2岁、6-8岁龄角部位中核苷及碱基总含量从尖部、中部、基部依次递减,这与鹿茸骨化成角的变化趋势相一致。（3）麋鹿角中主要含有黄嘌呤、次黄嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶、鸟嘌呤及鸟苷（>70%）等,脱氧核苷（2’-脱氧肌苷、2’-脱氧尿苷、胸苷、2’-脱氧鸟苷、2’-脱氧腺苷、2’-脱氧胞苷）、腺嘌呤及腺苷类成分含量较低。（二）氨基酸类成分资源化学分析评价采用HILIC-UPLC-TQ-MS/MS技术,建立了快速、灵敏,且不经衍生化直接发现并测定24种游离氨基酸类成分的分析方法,测定了样品中游离氨基酸类成分,包括8种必需氨基酸与5种非蛋白氨基酸。结果显示:（1）游离氨基酸含量因鹿龄及角部位不同存在较大差异。最高的为6-8岁龄尖部,达1.68mg/g,最低为3岁龄尖部,仅为0.305mg/g。3个部位平均总含量最高者为6-8岁龄,含量可达1.18mg/g,与2岁龄接近（1.12mg/g）;其次是5岁龄（0.880mg/g）, 3岁和4岁龄含量最低,分别为0.671mg/g和0.644mg/g。（2） 3、4岁龄麋鹿角及新疆马鹿角中总氨基酸含量从基部到尖部依次递减,呈下降趋势。（3）麋鹿角中主要含有苯丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸及赖氨酸（>89%）等,色氨酸、甲硫氨酸、γ-氨基丁酸、羟脯氨酸及谷氨酰胺等含量较低。（4）除19种组成蛋白质氨基酸外,在样品中还检测到非蛋白氨基酸:γ-氨基丁酸、羟脯氨酸、瓜氨酸、牛磺酸及鸟氨酸。（三）无机元素资源化学分析评价采用微波消解制样,ICP-AES法测定了包括Se、Mo、Zn、Ni、Fe、Si、Mn、Cr、Cu、Sr等10种人体必需微量元素,Ca、P、K、Na、Mg等5种人体必需宏量元素在内的共29种无机元素。结果显示:（1）所有样品中均检测到 Ca、K、Na、P、Se、Sr、Pb、Si、Mo、Zn、Sb、Bi、Cd、Ni、Ba、Fe、Mn、Cr、Mg、Cu及A1共21种元素,包括Pb、Sb、Cd等对人体有害元素;未检测到Sn、As、Co、B、Hg、V、Ti及Zr8种元素。（2）5种宏量元素的含量均与马鹿角接近,其中以Ca、P的含量为最高,分别达24.36%和10.85%;必需微量元素中Zn、Fe、Si、Sr含量较高。除Fe、Si、Mn、A1外,麋鹿角不同部位其它元素含量差异不明显。（3）元素相关性分析显示,麋鹿角中共有36对元素呈显着正相关,表明这些元素间具有相互协同、促进吸收的关系。（四）多糖类成分资源化学分析评价分别采用Elson-Morgan法、硫酸咔唑法及苯酚硫酸法,以氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸和葡萄糖为对照品,测定了样品中的氨基己糖、酸性多糖及中性多糖。结果显示:（1） 3种多糖含量因鹿龄和角部位存在较大差异。3种多糖总含量以2岁龄麋鹿角为最高,可达3004 μg/g;其次为5岁龄,为2006 μg/g,与6-8岁龄含量接近;3、4岁龄相对较低,分别为1252 μg/g和1120μg/g。（2） 3种多糖在3个角部位的平均含量均以2岁龄麋鹿角为最高,其中氨基己糖和中性多糖含量与宁夏马鹿角接近,酸性多糖低于宁夏马鹿角。（3）不同鹿龄麋鹿角中均以中性多糖含量为最高,平均含量可达1044 μg/g,其次是氨基己糖,含量为452.9μg/g,酸性多糖含量相对较低,为339.7μg/g。三、麋鹿角补阴功效生物活性评价研究（一）麋鹿角对甲状腺素并利血平致小鼠肾阴虚模型作用研究采用甲状腺素并利血平致小鼠肾阴虚模型,以麋鹿角不同样品给药,测定体质量变化,脾脏、肾脏和胸腺指数,以及肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平,血浆中白细胞介素-2 （IL-2）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平,研究麋鹿角补阴作用。结果显示,麋鹿角粉和水提药渣均能显着升高模型小鼠脾脏指数,降低肾脏指数,升高肝脏组织中SOD和GSH-Px活性并降低MDA水平,降低血浆中TNF-α水平;水提取物也能降低肾脏指数,升高肝脏中SOD和GSH-Px活性,同时降低MDA水平。麋鹿角粉、水提取物及水提药渣均能在一定程度上改善小鼠阴虚症状,其补阴功效与调节机体抗氧化能力、内分泌和免疫系统等功能状态密切相关。（二）麋鹿角对甲状腺素并利血平致大鼠肾阴虚模型作用研究采用甲状腺素并利血平致大鼠肾阴虚模型,以麋鹿角水提取物和水提药渣给药,测定脾和胸腺指数,以及血浆中皮质醇（Cort）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、促肾上腺皮质激素（ATCH）、促甲状腺激素（TSH）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、免疫球蛋白G （IgG）和免疫球蛋白M （IgM）水平,研究麋鹿角补阴作用机理。结果显示,麋鹿角水提取物及水提药渣均能显着升高大鼠脾脏指数,显着降低异常升高的E2水平和cAMP/cGMP比值（P<0.05）,并显着升高异常降低的cGMP和IgG水平（P<0.05或<0.01）;麋鹿角水提取物还能显着升高T和ACTH水平。麋鹿角补阴作用与调节机体内分泌-免疫网络功能密切相关。四、麋鹿角益精血功效生物活性评价研究采用环磷酰胺并乙酰苯肼致小鼠化学损伤性血虚模型,以麋鹿角不同样品给药,测定小鼠体质量变化、外周血常规、骨髓细胞周期以及脾脏病理检查等,研究其益精血作用。结果显示,麋鹿角粉及麋鹿角水提药渣低、中剂量组均对降低的WBC有恢复作用,麋鹿角水提取物对RBC也有改善的趋势。麋鹿角水提取物及其药渣均能促进骨髓细胞由G0/G1期向S期转化,促进骨髓细胞DNA的合成,促进造血祖细胞的增殖。麋鹿角水提取物具有改善模型小鼠脾脏病变的作用。麋鹿角对化学损伤性血虚模型小鼠有一定的保护作用。五、麋鹿角抗衰老作用生物活性评价研究（一）麋鹿角对D-半乳糖诱导小鼠亚急性衰老模型作用研究采用D-半乳糖诱导的小鼠亚急性衰老模型,以麋鹿角不同样品给药,检测血浆中白细胞介素-2 （IL-2）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）水平,肝、肾和脑中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量,脑中单胺氧化酶（MAO）活性,小鼠背部皮肤羟脯氨酸（Hyp）含量,以及胸腺和脾脏指数,研究麋鹿角抗衰老作用。结果显示,麋鹿角粉和水提取物均能显着提高衰老小鼠肝脏、肾脏以及脑组织内过低的SOD活性,提高肾脏和脑组织内过低的GSH-Px活性;同时降低肝脏和脑组织内过高的MDA水平,抑制脑组织中过高的MAO活性,显着升高过低的脾脏和胸腺指数;显着升高小鼠背部皮肤中降低的Hyp含量。水提取药渣也能显着提高肾脏中SOD和GSH-Px活性,抑制脑组织内MDA水平和MAO活性,升高背部皮肤中Hyp含量和胸腺指数。结果表明麋鹿角粉、麋鹿角水提取物以及水提药渣均有较好的抗衰老作用,麋鹿角可通过提高机体抗氧化酶系活性,抑制脑组织中MAO活性,提高免疫功能,延缓皮肤衰老而发挥抗衰老作用。（二）麋鹿角对果蝇寿命的影响采用黑腹果蝇模式生物,以麋鹿角水提取物给药,以果蝇的半数死亡时间、平均寿命和平均最高寿命为指标,评价麋鹿角对果蝇寿命的影响。结果显示,麋鹿角水提取物能明显增加果蝇的半数死亡时间、平均寿命和平均最高寿命,显示出麋鹿角具有较好的延缓衰老作用。六、麋鹿角强筋骨功效生物活性评价研究（一）麋鹿角对摘除卵巢致大鼠骨质疏松模型作用研究采用切除卵巢致雌性大鼠骨质疏松模型,以麋鹿角不同样品给药,测定大鼠体质量变化,子宫脏器指数,血清钙（Ca）、磷（P）、镁（Mg）及碱性磷酸酶（AKP）水平,股骨骨密度（BMD）和骨矿物质含量（BMC）等,研究其强筋骨作用。结果显示,麋鹿角粉、水提取物及药渣均能显着提高大鼠血清中P水平;麋鹿角粉低剂量和药渣高剂量能显着提高BMD和BMC,升高血清AKP水平;水提取物高、低剂量均能升高血清AKP水平,高剂量组也能提高BMD。综合作用来看,麋鹿角粉低剂量的作用强于高剂量,而水提取物和药渣高剂量的作用强于低剂量。麋鹿角粉、水提取物和水提药渣均具有一定的抗骨质疏松作用。水溶性成分和药渣中的雌激素类成分可能是麋鹿角抗骨质疏松作用的活性成分。（二）麋鹿角对泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松模型的作用研究采用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型,以麋鹿角总水提取物及其不同分子量段MW>100kDa、10kDa<MW<100kDa、3kDa<MW<10kDa、MW<3kDa 和乙醇提取物为试验样品,斑马鱼以茜素红荧光染色,根据数码影像中斑马鱼头部骨骼染色区域面积及累计光密度（IOD）值,应用专业图像分析软件进行定量分析,研究麋鹿角抗骨质疏松作用。结果显示,麋鹿角总水提取物及其不同分子量段均具有一定的增加斑马鱼头部骨骼骨矿化量和骨密度的作用,显示出较好的阻止斑马鱼骨量丢失作用;95%乙醇提取物仅显示出一定的阻止斑马鱼骨量丢失趋势。推测水提取物是麋鹿角抗斑马鱼骨质疏松的活性部位,麋鹿角中含有的蛋白、多肽及多糖等水溶性大分子成分和氨基酸、无机元素、核苷及碱基等水溶性小分子成分可能是主要活性物质。（三）利用MG63-ERE稳转细胞筛选麋鹿角不同提取物拟雌激素样作用研究选择MG63-ERE稳转细胞作为受试细胞,以麋鹿角总水提取物及其不同分子量段MW>100kDa、10kDa<MW<100kDa、3kDa<MW<10kDa、MW<3kDa 和乙醇提取物为试验样品,用雌二醇作为阳性对照,检测Luciferase荧光素酶报告基因的表达水平,筛选麋鹿角不同提取物的拟雌激素样活性作用。结果显示,麋鹿角95%乙醇提取物和水提取物1OkDa <MW <100kDa、3kDa <MW <10kDa 和 MW <3kDa 分子量段均能显着增强 MG63-ERE中荧光素酶表达,具有显着的拟雌激素样作用;其中95%乙醇提取物和3kDa<MW<10kDa分子量段具有明显的量效关系。七、基于COI条形码序列的角类动物药材DNA分子鉴定研究采用DNA条形码技术,对源自鹿科、牛科和犀科的7种角类动物药材共计11个样品进行分子鉴定。利用通用引物LCO1490/HCO2198成功的进行了 PCR扩增,获得了 7种角类动物药材的COI条形码序列。通过多序列比对,分析比较属间、种间及种内变异及遗传距离,建立了系统发育树。通过系统发育树的聚类情况可以看出,各物种基本以科的分类聚在一起,各物种又形成相对独立的支,支持率较高,可以明确地将各物种区分开;其中牛科的藏羚羊与鹿科聚在一起,犀科的广角与牛科的水牛角及牦牛角聚在一起,显示出较近的遗传关系。获得的正品来源COI序列为准确鉴定各角类动物药材奠定了基础,系统发育树中显示的犀角与水牛角更近的遗传关系为水牛角作为犀角替代资源的应用提供了科学依据。
二、毛细管电泳法分离检测三种鹿茸样品中天然性激素的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、毛细管电泳法分离检测三种鹿茸样品中天然性激素的研究（论文提纲范文）
（1）鹿茸中三类常见外源污染物的分布及安全性评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 鹿产品中重金属危害及研究进展 |
| 1.3 鹿产品中抗生素危害及研究进展 |
| 1.5 鹿产品中镇定剂类药物危害及研究进展 |
| 1.6 鹿产品中激素类药物危害及研究进展 |
| 1.7 食源性病原微生物危害及研究进展 |
| 1.8 研究内容与技术路线 |
| 1.8.1 研究内容 |
| 1.8.2 技术路线 |
| 1.9 研究目的与意义 |
| 第二章 鹿茸中重金属元素的分布及毒理学评价 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 样品 |
| 2.1.2 仪器与试剂 |
| 2.1.3 方法 |
| 2.1.4 数据处理 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 方法学考察 |
| 2.2.2 不同部位鹿茸中重金属元素含量分析 |
| 2.3 鹿茸中重金属健康风险评估 |
| 2.3.1 THQ法 |
| 2.3.2 PTWI法 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 鹿茸中盐酸赛拉嗪的分布及毒理学评价 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 仪器与试剂 |
| 3.1.2 实验材料 |
| 3.1.3 方法 |
| 3.1.4 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 方法学考察 |
| 3.2.2 质谱条件的优化 |
| 3.2.3 整支鹿茸中赛拉嗪与DMA含量分析 |
| 3.2.4 不同部位鹿茸中赛拉嗪含量分析 |
| 3.3 含麻醉剂鹿茸毒理学评价 |
| 3.3.1 急性毒性试验 |
| 3.3.2 28D喂养试验 |
| 3.3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 再生茸中外源激素的分布及毒理学评价 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 仪器与试剂 |
| 4.1.2 实验材料 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.1.4 数据处理 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 方法学考察 |
| 4.2.2 不同部位鹿茸中外源激素含量 |
| 4.2.3 质谱条件的优化 |
| 4.3 含增茸素鹿茸毒理学评价 |
| 4.3.1 急性毒性试验 |
| 4.3.2 28D喂养试验 |
| 4.3.3 结果与分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 全文结论 |
| 5.1 全文结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）基于化学衍生的羧基类化合物的色谱分析研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 羧基化合物 |
| 1.3 羧基化合物的分析与检测方法 |
| 1.4 萃取技术 |
| 1.5 羧基化合物的化学衍生试剂 |
| 1.6 本论文的选题思想和设计 |
| 第二章 高效液相色谱-荧光检测法测定食品中的植物激素残留 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定植物中内源性激素和食品植物激素残留 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 双衍生化-超高效液相色谱-质谱法测定支链脂肪酸酯 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.4 结论 |
| 第五章 超高效液相色谱-质谱结合双衍生化法测定PAHSAs同分异构体 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.4 结论 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
（3）不同规格鹿茸饮片质量分析研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 药材收集与鉴别 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 显色法鉴别 |
| 2.3 薄层色谱鉴别 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 性状分析 |
| 3.2 理化鉴别 |
| 3.3 薄层色谱 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 含量分析研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 水分测定 |
| 2.2 灰分测定 |
| 2.3 浸出物测定 |
| 2.4 单体成分(次黄嘌呤)的含量测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 水分测定结果 |
| 3.2 灰分测定结果 |
| 3.3 浸出物含量测定结果 |
| 3.4 次黄嘌呤测定方法学考察 |
| 3.5 次黄嘌呤含量测定结果 |
| 3.6 不同规格鹿茸饮片水分、灰分、浸出物、次黄嘌呤含量比较分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 特征图谱 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品准备 |
| 2.2 色谱条件的选择 |
| 2.3 方法学考察 |
| 2.4 不同规格鹿茸片特征图谱的比较 |
| 2.5 不同规格鹿茸饮片主成分分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 色谱条件的选择 |
| 3.2 特征图谱方法学考察 |
| 3.3 不同规格鹿茸片HPLC特征图谱的构建 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 鹿茸提取物对肾损伤保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品溶液的制备 |
| 2.2 HEK293细胞的培养 |
| 2.3 鹿茸提取物对HEK293细胞增殖的影响 |
| 2.4 顺铂对HEK293细胞损伤的影响 |
| 2.5 鹿茸提取物对顺铂所致HEK293细胞存活率作用的影响 |
| 2.6 乳酸脱氢酶(LDH)活性测定 |
| 2.7 细胞内MDA和 GSH浓度的测定 |
| 2.8 不同规格鹿茸饮片提取物对顺铂所致HEK293细胞存活率的影响 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 顺铂对HEK293细胞毒性作用 |
| 3.2 鹿茸提取物对HEK293细胞活力的影响 |
| 3.3 鹿茸提取物干预顺铂损伤HEK293细胞 |
| 3.4 不同浓度的鹿茸提取物对顺铂损伤HEK293细胞内LDH含量的影响 |
| 3.5 不同浓度的鹿茸提取物对顺铂损伤HEK293细胞MDA、GSH含量的影响 |
| 3.6 不同规格鹿茸饮片提取物干预顺铂损伤HEK293细胞 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（4）鹿角药材的质量研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 鹿角药材定性鉴别 |
| 第一章 显微鉴别研究 |
| 第二章 氨基酸类成分指纹图谱研究 |
| 第二部分 鹿角药材主要化学成分分析 |
| 第三章 多糖类成分分析 |
| 第四章 磷脂类成分分析 |
| 第五章 水溶性蛋白质含量测定 |
| 第六章 氨基酸类成分分析 |
| 第七章 核苷类成分分析 |
| 第八章 腐胺含量测定 |
| 第三部分 数据处理与统计学分析 |
| 第九章 聚类分析 |
| 第十章 判别分析 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）中药鹿茸的真伪鉴定及鹿茸饮片的质量等级评价方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语一览表 |
| 引言 |
| 第一章 概述 |
| 1 文献研究 |
| 1.1 鹿茸药用资源现状 |
| 1.2 鹿茸化学成分研究现状 |
| 1.3 鹿茸质量标准研究现状 |
| 1.4 鹿茸质量控制方法研究现状 |
| 1.5 小结与讨论 |
| 2 研究目标和技术路线 |
| 2.1 研究目标 |
| 2.2 技术路线 |
| 第二章 鹿茸药材酶解多肽特征图谱的建立 |
| 第一节 鹿茸药材酶解肽图的建立 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 样品信息 |
| 3 方法与结果 |
| 3.1 溶液制备 |
| 3.2 液相色谱条件 |
| 3.3 质谱条件 |
| 3.4 数据采集 |
| 3.5 方法学验证 |
| 3.6 鹿茸药材酶解多肽特征图谱的建立 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三章 鹿茸及其常见混伪品种(驯鹿茸)的专属性鉴别研究 |
| 第一节 结合化学计量学分析寻找驯鹿茸特征离子 |
| 1 采用Progenesis QI软件进行数据转换与分析 |
| 2 花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸的主成分分析(PCA) |
| 3 花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸的因子分析 |
| 第二节 驯鹿茸特征离子对的建立与验证及特征多肽序列的鉴定 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 样品信息 |
| 3 方法与结果 |
| 3.1 溶液制备 |
| 3.2 液相色谱条件 |
| 3.3 质谱条件 |
| 3.4 特征离子对的建立 |
| 3.5 特征离子对的验证 |
| 3.6 特征肽段序列的鉴定 |
| 4 小结与讨论 |
| 第四章 不同规格鹿茸饮片的质量等级评价研究 |
| 第一节 不同规格鹿茸饮片中15种氨基酸含量测定及质量等级评价研究 |
| 1 仪器与试药 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 溶液制备 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 方法学考察 |
| 2.4 样品测定结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 3.1 实验条件的选择与优化 |
| 3.2 样品含量测定结果总结与讨论 |
| 第二节 不同规格鹿茸饮片HPLC指纹图谱的建立及结合化学计量学分析进行质量等级评价研究 |
| 1.仪器与试药 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 鹿茸饮片HPLC指纹图谱的建立 |
| 2.2 指纹图谱化学计量学分析 |
| 3 小结与讨论 |
| 第三节 不同规格鹿茸饮片中总氮含量测定及质量等级评价研究 |
| 1 仪器与试药 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 反应溶液配制方法 |
| 2.2 溶液制备 |
| 2.3 样品测定方法 |
| 2.4 方法学验证 |
| 2.5 样品测定 |
| 3 小结与讨论 |
| 第四节 不同规格鹿茸饮片中(醇)浸出物含量测定及质量等级评价研究 |
| 1 仪器与试剂 |
| 2 样品信息 |
| 3 方法与结果 |
| 3.1 溶液制备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第五章 鹿茸质量标准修订(草案) |
| 第六章 鹿茸混伪品种(驯鹿茸)补充检验方法(草案) |
| 第七章 鹿茸饮片质量标准修订(草案) |
| 第八章 鹿茸饮片质量等级标准修订(草案) |
| 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 硕士期间发表的文章及获奖情况 |
| 致谢 |
（6）鹿茸的化学成分及质量控制方法研究进展（论文提纲范文）
| 1 化学成分 |
| 1.1 氨基酸 |
| 1.2 多肽 |
| 1.3 蛋白质 |
| 1.4 甾体化合物 |
| 1.5 无机元素 |
| 1.6 其他类化合物 |
| 2 质量控制 |
| 2.1紫外分光光度法 |
| 2.2 红外吸收光谱法 |
| 2.3 薄层色谱法 |
| 2.4 高效液相色谱法 |
| 2.5 气相色谱法 |
| 2.6 分子生物学方法 |
| 3 总结 |
（8）毛细管电泳和混合模式色谱在药物分析中的应用（论文提纲范文）
| 缩写词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 水蛭的毛细管电泳指纹图谱研究 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验部分 |
| 1.2.1 仪器和试剂 |
| 1.2.2 水蛭样品的制备 |
| 1.2.3 CE运行缓冲液的配制 |
| 1.3 结果与讨论 |
| 1.3.1 水蛭提取方法的选择 |
| 1.3.2 进样时间的选择 |
| 1.3.3 添加剂的选择 |
| 1.3.4 缓冲溶液的选择 |
| 1.3.5 分离电压的选择 |
| 1.3.6 方法学考察 |
| 1.3.6.1 精密度试验 |
| 1.3.6.2 重复性试验 |
| 1.3.6.3 稳定性试验 |
| 1.3.7 不同来源水蛭指纹图谱的对比 |
| 1.3.8 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 场放大—大体积进样毛细管电泳法检测甲磺酸伊马替尼及相关化合物 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器和试剂 |
| 2.2.2 样品和缓冲溶液的制备 |
| 2.2.3 电泳条件 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 分离条件的优化 |
| 2.3.1.1 添加剂的选择 |
| 2.3.1.2 HP-β-CD浓度的考察 |
| 2.3.1.3 缓冲溶液p H的考察 |
| 2.3.1.4 有机溶剂添加剂的考察 |
| 2.3.2 在线富集 |
| 2.3.2.1 重力进样 |
| 2.3.2.2 电动进样 |
| 2.3.2.2.1 不同稀释溶剂的考察 |
| 2.3.2.2.2 样品稀释溶剂p H值的考察 |
| 2.3.2.2.3 进样电压和进样时间的考察 |
| 2.3.3 重力进样与电动进样的比较 |
| 2.3.4 方法学评估 |
| 2.3.5 过程质量控制中FASS-LVSI的应用 |
| 2.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 一种新型反相/两性离子/亲水作用色谱混合模式固定相的制备、表征及应用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 药品和试剂 |
| 3.2.2 仪器 |
| 3.2.3 固定相的制备、表征和色谱柱的装填 |
| 3.2.4 样品和流动相的制备方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 SIL-PS的制备与表征 |
| 3.3.2 色谱评价 |
| 3.3.2.1 乙腈含量的影响 |
| 3.3.2.2 流动相p H的影响 |
| 3.3.2.3 流动相中缓冲盐浓度的影响 |
| 3.3.2.4 柱温的影响 |
| 3.3.3 保留重复性考察 |
| 3.3.4 SIL-PS的分离应用 |
| 3.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 综述：毛细管电泳在动物源性药物分析中的应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 CE在动物源性药物指纹图谱研究中的应用 |
| 4.3 CE在动物源性药物含量测定中的应用 |
| 4.3.1 CZE在动物源性药物含量测定中的应用 |
| 4.3.2 MEKC在动物源性药物含量测定中的应用 |
| 4.3.3 其他分离模式在动物源性药物含量测定中的应用 |
| 4.4 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一：攻读学位期间发表论文目录 |
（10）麋鹿角功效物质基础研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 鹿科药用动物角类药材研究概述 |
| [主要参考文献] |
| 第二节 麋鹿生物资源药用历史及传统功效考证 |
| [主要参考文献] |
| 第三节 我国麋鹿药用资源发展与研究现状及其资源产业化的思考 |
| [主要参考文献] |
| 附表 |
| [主要参考文献] |
| 第二章 麋鹿角资源化学分析评价研究 |
| 第一节 核苷及碱基类成分资源化学分析评价 |
| [主要参考文献] |
| 第二节 氨基酸类成分资源化学分析评价 |
| [主要参考文献] |
| 第三节 无机元素类成分资源化学分析评价 |
| [主要参考文献] |
| 第四节 多糖类成分资源化学分析评价 |
| [主要参考文献] |
| 第三章 麋鹿角补阴功效生物活性评价研究 |
| 第一节 麋鹿角对甲状腺素并利血平致肾阴虚模型小鼠作用 |
| [主要参考文献] |
| 第二节 麋鹿角对甲状腺素并利血平致肾阴虚模型大鼠作用 |
| [主要参考文献] |
| 第四章 麋鹿角益精血功效生物活性评价研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法与结果 |
| 3 讨论 |
| [主要参考文献] |
| 第五章 麋鹿角抗衰老作用生物活性评价研究 |
| 第一节 麋鹿角对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠作用 |
| [主要参考文献] |
| 第二节 麋鹿角对果蝇寿命的影响 |
| [主要参考文献] |
| 第六章 麋鹿角强筋骨功效生物活性评价研究 |
| 第一节 麋鹿角对切除卵巢致大鼠骨质疏松模型作用 |
| [主要参考文献] |
| 第二节 麋鹿角对泼尼松龙致斑马鱼骨质疏松作用 |
| [主要参考文献] |
| 第三节 利用MG-63-ERE稳转细胞筛选麋鹿角不同提取物拟雌激素样作用 |
| [主要参考文献] |
| 第七章 基于COI条形码序列的角类动物药材DNA分子鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| [主要参考文献] |
| 结语 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、毛细管电泳法分离检测三种鹿茸样品中天然性激素的研究（论文参考文献）
- [1]鹿茸中三类常见外源污染物的分布及安全性评价[D]. 王泽帅. 中国农业科学院, 2021
- [2]基于化学衍生的羧基类化合物的色谱分析研究[D]. 梁秋霞. 暨南大学, 2020(03)
- [3]不同规格鹿茸饮片质量分析研究[D]. 刘雪莹. 长春中医药大学, 2019(02)
- [4]鹿角药材的质量研究[D]. 王斐娴. 辽宁中医药大学, 2019(02)
- [5]中药鹿茸的真伪鉴定及鹿茸饮片的质量等级评价方法研究[D]. 郭晓晗. 中国食品药品检定研究院, 2018(05)
- [6]鹿茸的化学成分及质量控制方法研究进展[J]. 郭晓晗,程显隆,李明华,张文娟,魏锋,马双成. 药物分析杂志, 2018(04)
- [7]我国麋鹿药用资源的发展与研究现状及其资源产业化的思考[A]. 李锋涛,段金廒,钱大玮,蒋情,刘睿,彭蕴茹,丁玉华,任义军. “十二五” 鹿科学研究进展, 2016
- [8]毛细管电泳和混合模式色谱在药物分析中的应用[D]. 姚林. 华中科技大学, 2016(01)
- [9]我国麋鹿药用资源的发展与研究现状及其资源产业化的思考[J]. 李锋涛,段金廒,钱大玮,蒋情,刘睿,彭蕴茹,丁玉华,任义军. 中草药, 2015(08)
- [10]麋鹿角功效物质基础研究[D]. 李锋涛. 南京中医药大学, 2014(01)