一、大黄对急性肝内胆汁淤积大鼠治疗效应的实验研究（论文文献综述）
张景媛[1]（2021）在《基于生物信息学的茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制肝脏炎癌转化机制研究》文中指出研究背景病毒性肝炎的慢性感染可能会进一步导致肝硬化、肝癌的发生。在临床疾病的诊疗过程中,慢性乙（丙）型肝炎——肝硬化——肝细胞癌是常见的疾病发展转化规律。这种疾病发展转化规律可视为典型的“炎癌转化”过程。茵陈蒿汤出自东汉张仲景所着的《伤寒论》,由茵陈、栀子、大黄组成,是中医治疗湿热黄疸的主方。茵栀黄颗粒是以茵陈蒿汤为基础方,经组方加减制成的现代药物剂型。该组方由茵陈、栀子、黄芩和金银花4味中药提取物所组成,具有清热解毒、利湿退黄的功效。现代药理学研究结果表明茵陈蒿汤对肝胆具有显着的保护作用,还具有抑制肝纤维化和抗肿瘤的作用。由于中药组方成分复杂,茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒具体的作用机制难以阐释清楚。从网络的角度分析茵陈蒿汤作用的多成分、多靶点、多通路的协同作用,有助于为进一步开展茵陈蒿汤的基础实验研究以及对茵栀黄颗粒应用范围拓展提供合理的参考和借鉴。由此可见,应用整合生物信息学方法研究乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化关键基因和作用机制,以及茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化机制具有重要学术意义及临床价值。研究目的本研究应用生物信息学分析方法,旨在分析乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化关键基因和作用机制。从网络的角度全面地分析茵陈蒿汤抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化多成分、多靶点、多通路的协同作用,希冀为进一步开展茵陈蒿汤的基础实验研究提供参考和借鉴。此外,本研究基于生物信息学的方法,希冀为茵栀黄颗粒抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化作用机制进行预测,为进一步拓展药物的应用范围提供参考和借鉴。研究方法1.生物信息学分析在GEO数据库中获取符合筛选要求的基因芯片数据集,使用limma包对筛选的基因芯片数据集进行差异表达分析,得到差异表达基因相关数据。使用STRING数据库对差异表达基因进行蛋白互作分析,得到相关联的蛋白信息,在Cytoscape软件中构建蛋白互作网络。Cytoscape软件中的MCODE插件可以在庞大的基因网络中进行聚类构建功能模块。对关键的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析,获取差异基因在多个层面中的功能注释。此外,使用KM plotter、GEPIA等数据网站对分析得到的关键差异表达基因进行生存分析、表达水平分析、关联性分析等。2.网络药理学和分子对接分析通过检索数据库收集有关茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒相关化学成分的研究文献,将茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒的化学成分导入PubChem数据库,获得中药化学成分简化分子线性输入规范信息（SMILES）,将其导入SuperPred、SwissTargetPrediction等数据库中获取化合物的已知或预测靶点。将以上数据在Cytoscape中进行Merge合并,获得茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化潜在靶点。将潜在靶点在STRING数据库中进一步分析,获取潜在靶点的蛋白质相互作用关系,构建蛋白质相互作用网络。MCODE、CytoHubba等插件可以用于对潜在靶点的蛋白互作网络进行模块分析。此外,使用DAVID数据库对关键的潜在靶点进行GO和KEGG富集分析。使用Autodock软件对关键的潜在靶点进行分子对接验证。从PubChem数据库下载小分子药物的化学结构,转变为mo12格式文件,添加电荷后,保存为pdbqt文件。在PDB数据库中进行蛋白构象筛选并下载pdb格式的文件,删除水分子,分离原配体小分子等,并进行加氢、加电荷等操作。之后确定活性口袋的位置。PDB数据库里包括实验确定的生物大分子（蛋白质,DNA,RNA）的原子级三维结构。Autodock Vina被应用于对配体和受体进行对接运算。根据在Autodock软件操作中确定的Grid Box坐标与盒子大小进行分析运算,根据结合自由能对成分进行筛选排序。最后,在Pymol软件中对对接得到的受体——配体复合物进行可视化分析。研究结果1.生物信息学分析结果在乙型肝炎炎癌转化作用机制的研究中,通过基因表达谱GEO数据集和TCGA数据的综合分析,筛选得到了乙型肝炎炎癌转化的22个重叠差异表达基因。对22个重叠的差异基因进行GO和KEGG富集分析。GO条目显示重叠差异基因富集在细胞分裂、有丝分裂姐妹染色单体分离和细胞核条目上。KEGG通路富集结果显示,重叠的差异基因主要富集在卵母细胞减数分裂通路和细胞周期通路。该研究鉴定了 5个关键基因（CDK1,MAD2L1,CCNA2,PTTG1,NEK2）。此外,构建了由 PTTG1、MAD2L1、RRM2、TPX2、CDK1、NEK2、DEPDC1和ZWINT组成的预后基因标记,它们在预测总生存期方面表现良好。在丙型肝炎炎癌转化作用机制的研究中,通过基因表达谱GEO数据集筛选出1个丙型肝炎相关肝硬化和丙型肝炎相关肝细胞癌基因表达谱芯片数据集。整合分析发现6个与肝细胞癌发病机制及预后密切相关的关键基因:CCNA2、CCNB1、CCNB2、CDC20、CDK1、TOP2A。6个关键基因与肝细胞癌患者生存时间呈负相关,核心基因之间的表达水平呈正相关。关键模块中差异基因的GO条目显示,在生物过程中主要富集在染色体分离等条目上,在分子功能中主要富集在细胞周期蛋白依赖性激酶活性等条目上,在细胞成分上主要富集在纺锤体等条目上。KEGG通路结果显示,差异基因主要富集在细胞周期、孕酮介导的卵母细胞成熟、卵母细胞减数分裂、细胞衰老等通路上。2.网络药理学和分子对接分析结果在茵陈蒿汤抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化机制研究中,通过TCMSP检索得到茵陈蒿汤中44个有效成分。将有效成分对应的SMILES值导入Superpred和SwissTargetPrediction数据库中预测得到510个靶点。使用Cytoscape进行网络构建,结果发现茵陈蒿汤在抑制乙型肝炎和丙型肝炎的过程中,存在共同靶点MMP2。茵陈蒿汤在干预乙型肝炎及其炎癌转化过程中,CDK1和TOP2A可能发挥了重要的作用。在茵陈蒿汤抑制乙型肝炎炎癌转化和丙型肝炎肝硬化转化至肝细胞癌的过程中,AURKA、CCNB2、CCNB1、CDK1、TOP2A可能都发挥了重要的作用。KEGG通路富集显示,模块1、2和4关键基因主要富集在了孕酮介导的卵母细胞成熟通路、卵母细胞减数分裂通路、p53信号通路等上。而模块3的关键基因富集在JAK-STAT信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗性通路、丙型肝炎通路等上。这可能与模块3的数据来源为疾病数据库有关,说明我们的研究在数据来源上还存在一定的局限性。在茵栀黄颗粒治疗乙型肝炎机制研究中,茵栀黄颗粒的化合物从中国知网和PubMed数据库中获得,通过搜索Superpred、SwissTargetPrediction数据库预测化合物对应的靶点。乙型肝炎病毒的靶点数据来自TTD、PharmGKB和DisGeNET数据库。对上述数据使用Cytoscape 3.7.1进行可视化分析。生物网络确定了 13个潜在靶点。分子对接验证结果表明,CDK6、CDK2、TP53和BRCA1可能与乙肝治疗密切相关。此外,GO和KEGG分析表明,茵栀黄颗粒治疗乙型肝炎可能与转录的正调节、基因表达的正调节、乙型肝炎通路和病毒致癌通路有关。在茵栀黄颗粒抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化机制研究中,首先在中国知网和PubMed中搜索茵栀黄颗粒的成分,然后通过搜索Superpred、SwissTargetPrediction数据库预测化合物及其对应的靶点。乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化的差异基因从TTD、PharmGKB及GEO数据库中获得。使用Cytoscape构建化合物——预测靶点网路和关键模块网络。研究结果发现茵栀黄颗粒在治疗乙型肝炎和丙型肝炎中存在共同的靶点MMP2;茵栀黄颗粒抑制乙型肝炎及其炎癌转化以及丙型肝炎肝硬化转化至肝细胞癌过程中,CDK1和TOP2A可能发挥了重要的作用。KEGG通路富集显示,模块1、2和4关键基因主要富集在了孕酮介导的卵母细胞成熟通路和卵母细胞减数分裂通路上。研究结论本研究综合运用网络药理学和生物信息学方法,在系统层面揭示了茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化的化学成分、作用靶点和信号通路。初步阐释了茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制乙（丙）型肝炎导致的肝脏炎癌转化作用机制可能与协同调控多个关键靶点和通路有关。本研究可为中药治疗肝脏炎癌转化的作用机制研究提供线索和思路,为进一步开展茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制肝脏炎癌转化基础实验研究以及促进茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒在临床的合理应用提供参考和借鉴。
周怡驰[2]（2021）在《柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究》文中进行了进一步梳理中国是肝病大国,多种肝病高发,肝纤维化作为肝病研究和治疗的重要领域,越来越受到重视。肝纤维化是肝脏修复肝损伤引起的异常结缔组织增生和细胞外基质过度沉积的病理改变。肝纤维化存在于大多数慢性肝病中,是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,甚至可持续进展为肝硬化、肝癌,给患者生命健康带来严重威胁。研究肝纤维化的病因及发病机制、寻找有效的治疗靶点,对于阻止肝病的发展、维护患者的生命健康有很大的意义。近年来,肝纤维化的病理分子生物学机制、临床诊疗技术等取得了长足发展。但目前西医对于抗纤维化疗效尚不确切,缺乏有效的治疗手段。中医药治疗肝纤维化具有确切的优势,已有多种注册适应证为肝纤维化的中成药上市。柴芪益肝方由导师胡世平教授所创,是治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的经验方,前期临床和实验研究发现对肝纤维化有较好疗效,但其作用机制尚不清楚。胡教授现任北京中医药大学深圳医院党委书记,广东省名中医,全国基层名老中医师承项目指导老师,深圳市地方级领军人才,获评“南粤最美中医”,从事中医药防治慢性肝病的临床与科研工作30多年,擅长中医、中西医结合治疗肝脏疾病,形成了独特的学术思想体系。目的结合临床回顾性研究、网络药理学预测和动物实验探讨柴芪益肝方治疗肝纤维化的疗效与作用机制,为该方的进一步开发应用提供依据,并分析总结导师胡世平教授“推陈致新”的学术思想及其在柴芪益肝方组方思路中的应用。方法1、临床研究:通过回顾性研究方法,收集2018年1月1日至2021年2月3日期间在北京中医药大学深圳医院肝病科门诊及住院部诊断为慢性乙型肝炎患者的病例资料,并筛选出符合本研究标准的慢性乙型肝炎肝纤维化肝郁脾虚型患者。根据患者所服药物分为常规治疗组和CQYG组,收集所有患者治疗12个月前后的指标,包括主要指标:肝脏硬度值（LSM）、纤维化-4指数（FIB-4）、天门冬氨酸氨基转移酶和血小板比率指数（APRI）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量;次要指标:谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,总胆红素（TBiL）,谷氨酰转酞酶（GGT）,白蛋白（ALB）,将所有检测指标进行治疗前后的组内与组间比较。2、网络药理学:检索 TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction、OMIM、Gene Cards等数据库,筛选CQYG治疗肝纤维化的活性成分和潜在作用靶点。借助Cytoscape软件和String数据库,分别构建“药物-成分-靶点-疾病”网络和蛋白互作PPI网络,并进行拓扑学分析,筛选关键药效分子和核心靶点。运用Autodock vina软件进行分子对接,并基于R语言对作用靶点进行GO和KEGG富集分析。3、动物实验:选取50只6周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机抽取10只分别纳入空白对照组（CTL）、肝纤维化模型组（Model）、柴芪益肝方低剂量组（CQYG-L）、柴芪益肝方高剂量组（CQYG-H）和水飞蓟素治疗组（Silymarin）,共5组。四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）腹腔注射建立小鼠肝纤维化模型:除空白对照组外,其余各组小鼠腹腔注射含15%CCl4的橄榄油5ml·kg-1,每周2次,连续注射8周。从造模第1天起,柴芪益肝方低、高剂量组小鼠分别灌胃给予0.37 g·kg-1·d-1、0.74 g·kg-1·d-1的柴芪益肝方,水飞蓟素组给予100 mg·kg-1·d-1灌胃。实验结束,摘取所有小鼠肝脏、收集血清,对各组小鼠肝组织进行HE、天狼星红、Masson染色;用自动生化分析仪检测血清AST和ALT的含量;ELISA法检测肝组织中MDA、SOD、GSH-Px和Hyp水平;免疫组化法检测肝组织中α-SMA、Collagen I、Vimentin的表达;免疫荧光法检测肝组织中Ki67+和Lgr5+细胞;提取各组肝组织RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot分别检测肝纤维化小鼠肝组织中NF-κB、TGF-β/Smad、Wnt/β-Catenin信号通路相关靶标mRNA和蛋白表达。结果1、临床研究:共纳入符合标准的患者203人,其中,常规治疗组纳入101人,年龄最大者76岁,最小22岁,平均年龄（41.34±0.90）岁;CQYG组纳入102人,年龄最大者67岁,最小27岁,平均年龄（43.13±0.78）岁,两组年龄无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。（1）无创肝纤维化指标（LSM、FIB-4、APRI）在两组患者自身治疗前后比较,以及治疗后的组间比较,均无显着性差异（P>0.05）,但两组治疗后LSM均较治疗前有降低趋势。（2）两组患者自身前后比较,乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量和乙肝病毒表面抗原（HBsAg）治疗前和后均无显着性差异（P>0.05）;CQYG组较常规治疗组治疗后HBsAg显着性降低（P<0.05）,CQYG组治疗后HBV-DNA定量和HBsAg较治疗前均有下降趋势。（3）两组患者自身治疗前后血清肝功能指标（ALT、AST、GGT、TBiL、ALB）均在正常范围内,治疗后组间比较肝功能均无显着性差异（P>0.05）。2、网络药理学预测:共获得121种CQYG治疗肝纤维化的潜在活性成分和257个对应的作用靶点,并筛选出14种关键药效分子及28个核心靶点。点度中心性值前10的核心靶点和关键药效分子具有较好的结合活性。GO和KEGG结果主要涉及炎症反应、氧化应激、成纤维细胞增殖、内皮细胞增殖、调节脂质代谢活动、血管生成、肝再生等生物学过程及TNF信号通路、Th17细胞分化信号通路、IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、Wnt信号通路、NF-κB信号通路等。3、动物实验研究:与模型组相比,CQYG各组和水飞蓟素组小鼠肝组织形态和胶原沉积较模型组改善,水飞蓟素组和CQYG-H小鼠血清ALT、AST水平均显着降低（P<0.01）;CQYG高剂量组肝组织MDA和Hyp的含量显着低于模型组（P<0.05）,SOD和GSH-Px含量显着高于模型组（P<0.05）;免疫组化结果显示,CQYG组和水飞蓟素组α-SMA、CollagenI、Vimentin阳性表达区域较模型组少;免疫荧光结果显示,柴芪益肝方组Ki67阳性细胞和Lgr5阳性细胞数量均较模型组有增多趋势;CQYG组肝组织中p-NF-κBp65、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达水平较模型组显着降低（P<0.05）;与模型组相比,CQYG-H 肝组织 CollagenI、TGF-β、TNF-α、IL-1βmRNA 的表达水平以及 Collagen I、α-SMA、TIMP-1、TGF-β、磷酸化 Smad2/3、Smad2/3、Smad4、Wnt3a、β-Catenin 蛋白表达均较模型组有不同程度降低,而MMP-9、Smad7蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。结论1、临床研究:柴芪益肝方加减联合常规治疗有降低慢乙肝肝纤维化患者肝脏硬度值、HBV-DNA和HBsAg含量的趋势,且在降低HBsAg定量上优于单纯常规治疗。2、网络药理学:柴芪益肝方可能通过槲皮素、白藜芦醇、山奈酚等活性成分作用于丝裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白Jun等靶点,以及TNF信号通路、Th17细胞分化信号通路、IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、Rap1信号通路、Wnt信号通路、NF-κB信号通路等,调节肝脏炎症反应、氧化应激、细胞增殖、肝再生等生物学过程发挥治疗肝纤维化的作用。3、动物实验研究:柴芪益肝方能显着减轻四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化,其作用机制可能减轻氧化应激反应、抑制NF-κB介导的炎症信号通路,下调炎症细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的释放,减轻肝脏炎症,并通过调节TGF-β/Smad、Wnt3a/β-catenin信号通路,抑制肝星状细胞的活化,调节MMP-9和TIMP-1活性平衡,减少细胞外基质α-SMA、Collagen I、Hyp的合成,促进ECM降解相关。4、“推陈致新”学术思想:导师胡世平教授“推陈致新”的学术思想核心在于顺应人体本身的正气祛邪之势和气血津液各自的新陈代谢过程,协助人体自然排邪,促进疾病向愈。在肝纤维化治疗上,通过“推陈致新”,加强气化动力、调节气机升降,使病理产物消除的同时,人体气血津液正常化生。
张领领[3]（2021）在《婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤早期生物标志物的表达及利胆合剂作用的研究》文中提出研究目的:从理论、临床及实验研究三方面探讨血清谷氨酸脱氢酶（GLDH）、精氨琥珀酸合酶（ASS）、羧酸酯酶-1（CES-1）作为婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤早期生物标志物的可行性,研究中药利胆合剂对婴儿胆汁淤积性肝病患儿及幼龄胆汁淤积性肝损伤模型大鼠早期血清GLDH、ASS、CES-1水平的影响,观察大鼠肝脏组织病理变化,探讨早期给予利胆合剂对婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤预防治疗作用机制,以便有针对性的指导临床用药。研究方法1.理论研究方面从现代医学及祖国医学对婴儿胆汁淤积性肝病的认识,肝损伤传统血清标志物及新型血清标志物的研究进展等方面,逐步探讨早期干预婴儿胆汁淤积性肝损伤的必要性,并提出具体的临床研究及实验研究内容的设想。2.临床研究:（1）收集门诊体检健康婴儿60例、新生儿科住院的新生儿高间接胆红素血症患儿60例、中西医结合科住院治疗诊断婴儿胆汁淤积性肝病患儿60例,收集相关血清指标,比较健康婴儿、新生儿高间接胆红素血症患儿、婴儿胆汁淤积性肝病患儿,在肝功能全套检查显示ALT在正常参考值范围时,血清GLDH、ASS、CES-1的变化。（2）将中西医结合科住院治疗的婴儿胆汁淤积性肝病患儿随机分为利胆合剂治疗组、熊去氧胆酸治疗组。将治疗前后血清TBIL、DBIL、ALT、AST、GLDH、ASS、CES-1水平进行分析比较;对肝损伤新型血清标志物与传统血清标志物出现时间,表达敏感性进行进一步的比较研究,分析利胆合剂对婴儿胆汁淤积性肝病早期肝损伤的干预效果。3.实验研究:（1）建立幼龄SD大鼠胆汁淤积肝损伤模型,分别观察给药后6小时、12小时、24小时、48小时、72小时肝功能全套指标及GLDH、ASS、CES-1血清值变化,比较血清GLDH、ASS、CES-1与ALT的差异。（2）在预实验的基础上,选择对应的时间点给予利胆合剂和熊去氧胆酸干预治疗,观察利胆合剂对幼龄胆汁淤积大鼠肝损伤血清标志物GLDH、ASS、CES-1的作用。研究结果:1.理论研究:最新研究提示目前血清ALT、AST作为评估婴儿胆汁淤积性肝损伤存在着不足,急需探索新的能够更早期反映婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤的血清标志物。治疗方面,利胆合剂是否能起到早期预防治疗婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤尚待进一步的临床及实验研究证实。2.临床研究:（1）血清GLDH、ASS、CES-1指标在新生儿高间接胆红素血症、婴儿胆汁淤积性肝病中均可较血清ALT更早的反映肝细胞的损伤。血清GLDH、ASS、CES-1或可作为早期胆汁淤积性肝损伤的标志。（2）利胆合剂及熊去氧胆酸均对婴儿胆汁淤积性肝病肝细胞损伤有积极的治疗作用。中药利胆合剂对婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤患儿的血清GLDH、ASS、CES-1有积极的早期干预保护作用,较熊去氧胆酸疗效更佳。3.实验研究:（1）血清GLDH、ASS、CES-1可作为胆汁淤积性肝损伤的早期生物标志物。在整个病程中,血清GLDH、ASS、CES-1与ALT、AST可作为肝细胞损伤标志物互补存在。（2）利胆合剂能早期干预胆汁淤积性肝损伤,对胆汁淤积性肝损伤有较好的保护作用。研究结论:1.血清GLDH、ASS、CES-1可作为较血清ALT更早期反映胆汁淤积性肝损伤的生物标志物。2.利胆合剂对早期干预治疗婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤的效果较熊去氧胆酸更佳。3.利胆合剂早期预防婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤的可能机制是通过中药多靶点的作用有效减轻炎性细胞对肝脏组织的浸润,降低肝细胞的损伤。
丘燕燕[4]（2021）在《基于代谢组学探讨重证婴儿胆汁淤积性肝病生物标志物及利胆合剂相关研究》文中指出目的通过对重证婴儿胆汁淤积性肝病（ICH）患儿血液和尿液代谢物的检测,建立该疾病基于差异性代谢物的寒湿阻滞证和瘀积发黄证潜在的代谢生物标志物特征谱库,为重证ICH证本质研究提供一定的客观依据。同时开展动物实验研究,探讨胆汁淤积幼龄大鼠的潜在血液代谢生物标志物,并观察利胆合剂对相关潜在血液代谢生物标志物的影响,推测利胆合剂改善胆汁淤积的作用途径,为研究利胆合剂作用机制提供思路。方法1.理论研究:通过查阅中医古籍和检索10年来“知网”、“万方”和“Pub Med”中胆汁淤积性肝病的临床研究和实验研究文献,系统性地回顾和总结现代医学及中医学对ICH的病名、病因、病机及治疗方法的认识,阐述中医药治疗ICH的优势,提出“重证ICH”的概念;同时,还回顾了代谢组学在疾病中病证客观化中的运用,总结代谢组学技术能为中医辨证提供客观化指标,由此为重证ICH潜在的代谢生物标志物提供理论依据,也为利胆合剂改善ICH可能的作用机制提供研究思路。2.临床实验研究:血液、尿液样本均来源于华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院。分别采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术及气相色谱质谱联用（GC-MS）技术进行血液和尿液样本的代谢物检测。在本研究中,详细列出了每一例纳入患儿的一般情况、主要症状、次要症状、体征、实验室指标及辨证分型等。根据纳入标准和排除标准进行分组:寒湿阻滞证组共62例,血液样本62例,尿液样本57例;瘀积发黄证组共48例,血液样本48例,尿液样本45例;和同时期正常对照组50例,血液样本50例,尿液样本48例。分别收集、统计和分析各组患儿的一般资料、实验室检查、代谢物结果等,重点对正常组、寒湿阻滞证组和瘀积发黄证组患儿血液和尿液代谢物结果进行统计学分析后筛选出该疾病寒湿阻滞证、瘀积发黄证的潜在血液和尿液代谢生物标志物。3.动物实验研究:血液样本来源于SD幼龄大鼠,采用LC-MS/MS进行血液样本的代谢物检测。建立胆汁淤积幼龄大鼠动物模型,同时设立正常对照组和利胆合剂组大鼠。采集三组大鼠的血液、肝脏组织标本,检测分析血生化指标,观察肝脏组织病理学改变。另外检测血液样本的代谢物,根据代谢物与相应内标丰度之间的比值代入标准曲线中,运用Chemo View2.0.2软件自动计算出所测样本中的氨基酸和肉碱的浓度。通过SPSS 25.0统计软件对数据进行统计学分析筛选出胆汁淤积幼龄大鼠潜在的血液代谢生物标志物,与临床重证ICH潜在的代谢血液生物代谢物比较,进一步筛选出更能反映胆汁淤积性肝病特征的代谢生物标志物,同时观察利胆合剂对这些代谢生物标志物的作用,推测利胆合剂改善胆汁淤积的作用途径。结果1.临床实验中重证ICH两种不同证型的客观性指标结果本研究第二部分发现重证ICH两个证型中,在性别、出生情况、出生方式、喂养方式、年龄、体重等一般资料上相互比较差异无统计学意义（P>0.05）。瘀积发黄证在病程上较寒湿阻滞证长（P<0.05）。在实验室指标上,瘀积发黄证组患儿的TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA、GGT及ALP水平均高于寒湿阻滞证组（P<0.05）。另外,寒湿阻滞证组患儿、瘀积发黄证组患儿和正常对照组婴儿在血代谢物和尿有机酸代谢物层面上存在的差异有统计学意义（P<0.05）。血液样本中,与正常对照组相比,重证ICH（寒湿阻滞证和瘀积发黄证）组与正常组具有统计学差异的血液代谢物有27种（7种氨基酸和20种肉碱）,分别为甲硫氨酸、酪氨酸、缬氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱等;在以上差异性代谢物中,与寒湿阻滞证组相比,瘀积发黄证组与其具有统计学差异的血液代谢物有4种（1种氨基酸和3种肉碱）,分别为鸟氨酸、乙酰肉碱、丙酰肉碱、3-羟基十八碳酰肉碱。尿液样本中,与正常对照组相比,重证ICH（寒湿阻滞证和瘀积发黄证）与正常组具有统计学差异的尿液代谢物有11种（有机酸）,分别为2-羟基异丁酸-2、3-甲基戊烯二酸-2、3-羟基-3-甲基戊二酸-3等;在以上差异性代谢物中,与寒湿阻滞证组相比,未发现瘀积发黄证组与其具有统计学差异的尿液代谢物。2.动物实验中利胆合剂改善胆汁淤积幼龄大鼠的客观性指标结果本研究第三部分发现,与正常对照组大鼠相比,ANIT建立的胆汁淤积幼龄大鼠模型的TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT及ALP水平明显升高（P<0.01）,且肝脏组织出现异常的病理学变化;与模型组大鼠相比,利胆合剂组大鼠TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT及ALP水平较低（P<0.01）,且肝脏病理有改善。另外,模型组、利胆合剂组和正常对照组大鼠在血代谢物层面上存在的差异有统计学意义（P<0.05）。与正常对照组相比,模型组与正常组大鼠具有统计学差异的血液代谢物有30种（4种氨基酸和26种肉碱）,分别为丙氨酸、精氨酸、鸟氨酸、苏氨酸、游离肉碱、丙二酰肉碱、3-羟基丁酰肉碱等;在以上差异性代谢物中,与模型组大鼠相比,利胆合剂组大鼠与其具有统计学差异的血液代谢物有17种（1种氨基酸和16种肉碱）,分别为鸟氨酸、游离肉碱、丙二酰肉碱、3-羟基丁酰肉碱等。通过模型组大鼠差异性血液代谢物与临床重证ICH婴儿差异性血液代谢物对比,筛选出13种普适性差异性血液代谢物（2种氨基酸和11种肉碱）,分别为鸟氨酸、苏氨酸、游离肉碱、3-羟基丁酰肉碱、3-羟基异戊酰肉碱等。以上差异性血液代谢物中,利胆合剂组大鼠与模型组大鼠之间比较有统计学差异的为10种代谢物（1种氨基酸和9种肉碱）,分别为鸟氨酸、游离肉碱、丙二酰肉碱、3-羟基丁酰肉碱等。结论1.本研究采用代谢组学技术在临床上有助于中医辨证本质的阐述,在实验中有助于药物作用机制的探索。2.本研究第二部分以婴儿为对象,性别、出生情况、出生方式、喂养方式、年龄、体重等一般资料不会影响重证ICH两种证型（寒湿阻滞证和瘀积发黄证）后续的代谢组学分析;从病程长短及TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA、GGT及ALP水平来看,瘀积发黄证患儿较寒湿阻滞证患儿的病程长,且胆汁淤积和肝损伤程度较严重。采用LC-MS/MS和GC-MS技术筛选的27种重证ICH血液差异性代谢物（7种氨基酸和20种肉碱）和11种重证ICH尿液差异性代谢物（11种有机酸）可能是其客观生物标志物,其中4种血液代谢物（1种氨基酸和3种肉碱:鸟氨酸、乙酰肉碱、丙酰肉碱、3-羟基十八碳酰肉碱）是寒湿阻滞证和瘀积发黄证区分的客观指标。以上发现的差异性代谢物有利于区分和阐述重证ICH（寒湿阻滞证和瘀积发黄证）与正常对照组不同的血液代谢物和尿液代谢物谱征。差异性血尿代谢物提示了重证ICH疾病的发生和发展与氨基酸降解、脂肪酸氧化和有机酸代谢途径相关。而脂肪酸氧化代谢紊乱可能为重证ICH中医证型（寒湿阻滞证和瘀积发黄证）区分的主要方向。3.本研究第三部分以幼龄大鼠为对象,根据肝脏病理改变及TBIL、DBIL、ALT、AST、TBA、GGT及ALP水平来看,ANIT诱导的肝内胆汁淤积幼龄大鼠出现严重的肝功能损伤,胆汁淤积,说明造模成功;利胆合剂组大鼠的肝脏病理有所改善、胆汁淤积和肝功能损伤程度也明显减轻,说明利胆合剂能够改善胆汁淤积及肝损伤程度。采用LC-MS/MS技术验证胆汁淤积幼龄大鼠与正常幼龄大鼠血液代谢物存在差异,利胆合剂能够逆转胆汁淤积幼龄大鼠体内17种差异性代谢物水平（1种氨基酸和16种肉碱）,改善胆汁淤积,其作用机制可能主要为调节脂肪酸氧化代谢。
李晨冰[5]（2021）在《中药复方汤剂治疗淤胆型肝炎的荟萃分析及临床用药规律探讨》文中提出目的:用荟萃分析方法,系统评价中药复方汤剂治疗淤胆型肝炎的疗效与安全性,为治疗淤胆型肝炎提供循证医学依据,并分析纳入文献中复方汤剂的组方用药规律,探讨中医治疗淤胆型肝炎的理法方药之秘,为临床遣方用药提供参考依据。方法:按照制定的检索策略分别在中国生物医学期刊引文数据库（CBM）、中国期刊全文数据库（CNKI）、维普资讯中文科技期刊数据库（VIP）、万方医学网数据库检索涉及中药复方汤剂治疗淤胆型肝炎的随机对照试验文献,检索年限为2001年1月至2021年1月。使用Cochrane风险偏倚评估工具对纳入的文献进行偏倚性风险评估,提取结局指标,应用Rev Man5.3软件进行荟萃分析,通过异质性检验选择合适的效应模型合并效应量,并制作森林图及漏斗图进行描述分析。提取中药复方的处方信息,使用Excel表格汇总记录,对组成的药物及其性、味、归经、功效进行频次分析;使用SPSS软件进行关联规则分析与聚类分析,探索药物的常用组合及组方规律。结果:1.检索到文献1214篇,根据纳排标准进行严格筛选,本次荟萃分析最终纳入23篇随机对照试验文献。总有效率:OR=4.49,95%CI:[3.42,5.89];TBIL:MD=-46.49,95%CI[-60.51,-32.47];DBIL:MD=-45.49,95%CI[-59.12,-31.16];ALP:MD=-54.79,95%CI[-78.51,-31.07];GGT:MD=-28.07,95%CI[-35.55,-20.59];ALT:MD=-33.75,95%CI[-43.01,-24.5];AST:MD=-42.27,95%CI[-58.20,-26.35];中医证候积分:MD=-3.26,95%CI[-4.30,-2.21];以上8项结局指标的合并效应量均具有统计学意义。安全性评价:5篇文献描述用药不良反应,对照组与治疗组的不良反应率分别为5.6%与1.5%,治疗组不良反应率低于对照组。2.临床用药规律:筛选23首处方,涉及中药66味,使用频率较高的药物为茵陈、赤芍、大黄、丹参、茯苓、甘草、郁金、白术、虎杖。其中以利水渗湿药、清热药、活血化瘀药为主,其次为补虚药、解表药、泻下药;四气五味中苦味、寒性的比例最大;药物主要归肝经,但也有分别入脾经、胃经、心经、肺经、肾经的药物。关联规则得出常用的药物组合有赤芍配伍茵陈、赤芍配伍大黄、茵陈配伍大黄、赤芍配伍丹参、茵陈配伍丹参、赤芍配伍郁金、茵陈配伍郁金、赤芍配伍甘草,聚类分析获取5类中药组方。结论:1.相比于单纯西医治疗,中药复方汤剂治疗淤胆型肝炎在提高临床疗效总有效率、改善血清TBIL、DBIL、ALP、GGT、TBA、ALT、AST水平及中医证候积分上有更好疗效,安全性更好。2.淤胆型肝炎病因以湿、热、瘀为主,清热利湿活血为其治疗大法,同时解表发汗开腠理、泻下通腑利二便以予邪出路,立足于肝脾论治,兼顾调和脏腑,根据湿热瘀的偏重、部位和兼证随证施治。常用药物组合配伍可增强疗效,结合系统聚类衍生的新组方可供因证选方。
王晶,欧阳冰琛[6]（2021）在《茵陈蒿汤防治肝脏疾病的药理作用及药动学研究进展》文中认为茵陈蒿汤源自《伤寒论》,为治疗湿热黄疸的经典方剂。药理研究发现其对多种类型肝损伤具有保护作用,可用于胆汁淤积、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、肝纤维化、肝硬化的治疗,肝保护机制为调节胆红素胆汁酸代谢、降脂降糖、抗氧化、抑制肝星状细胞增殖和活化、抑制肝细胞凋亡、抗炎、调节肠道菌群。对茵陈蒿汤的药动学研究日渐增多,肝损伤对其药动学行为产生一定影响。综述茵陈蒿汤在肝脏疾病防治中的药理作用和药动学特征,为该方剂的开发应用和临床合理使用提供依据。
张晟铭[7]（2021）在《十二味疏肝利胆颗粒肝外胆管结石术后应用研究》文中研究说明目的:观察肝外胆管结石术后患者术后应用十二味疏肝利胆颗粒对患者血常规、肝功能,胆汁引流量及术后T管拔出时间的影响,并通过随访出院患者对比两组患者肝外胆管结石术后复发情况,之后,在此基础上分析引起患者术后肝外胆管结石复发的独立风险因素,评估十二味疏肝利胆颗粒能否有效降低这些风险指标以达到远期防治肝外胆管结石复发的临床疗效。方法:（1）回顾性分析2015年9月-2020年9月安徽中医药大学第一附属医院收治的确诊为肝外胆管结石的237例胆总管结石手术病例资料。按照术后是否应用十二味疏肝利胆颗粒,将病例分为对照组与观察组。（2）两组病例均行手术治疗:传统开腹手术、腹腔镜手术取石并放置T管。观察组在术后常规行止血,抗感染,保肝等处理的基础上,于术后第2天应用十二味疏肝利胆颗粒口服,1包/次,每日3次;对照组只予术后常规处理。（3）分别观察两组术前和术后第1d、3d、7d、14d的血常规、肝功能指标的变化;观察并记录患者术后第1d、3d、5d、7d T管胆汁引流量的变化,并记录患者最终T管拔出时间;所有患者随访24个月,嘱患者入我院门诊行彩色多普勒超声与MRCP检查（术后3个月每月1次,后每6月1次）,对比两组患者结石复发情况。（4）汇总数据并应用SPSS 21.0进行统计分析,计量资料且符合正态分布的以x±s表示;不符合正态分布使用秩和检验;两组间均数比较采用t检验;计数资料以频数或率表示;率的比较采用χ2检验;风险因素评估采用Logic回归分析,结果以OR及95%置信区间（CI）表示,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:（1）两组患者在性别、年龄、手术方式、手术次数及患者结石大小、数量及胆总管内径上,经统计学检验,差异无显着性（P>0.05）;（2）两组患者治疗前,WBC,NEU计数水平无统计学差异（P>0.05）;两组患者治疗后,观察组术后7d,14d WBC,NEU计数水平均低于治疗前水平（与治疗前比较,P<0.05）;（3）两组治疗前,ALT、AST、ALB、PA、DBIL、IBIL水平无统计学差异（P>0.05）;两组患者治疗后,术后第7d,14d ALT、AST、DBIL、IBIL水平均有明显降低,PA明显升高,ALB无明显差异;且观察组术后7、14天ALT、AST、DBIL、IBIL水平低于对照组,PA水平高于对照组（P<0.05）,且差异具有统计学差异。ALB无显着变化;（4）两组患者治疗后,术后1d、3d两组患者胆汁引流量差异无统计学意义（P>0.05）,术后第5d、7d观察组胆汁引流量高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;在最终T管拔出时间上,观察组患者拔管时间短于对照组,且差异有统计学意义（P<0.05）。（5）随访结果:两组总随访人数237人,实际随访人数106人;最长随访时间24个月,最短12个月,平均随访时间18个月。对照组复发人数16例（结石复发率14.68%）,最短复发时间2月,最长复发时间18月,平均复发时间10.5月;观察组复发人数10例（结石复发率7.81%）,最短复发时间6月,最长复发时间18月,平均复发时间13.5月,两组结石复发率差异有统计学意义（x2=7.633,P=0.021）;观察组对比对照组同一手术方式结石复发率无明显差异（P>0.05）;多次手术患者对比1次手术患者结石复发率有明显差异,且差异具有统计学意义（x2=9.806,P=0.021;x2=13.855,P=0.003;）同组间中性粒细胞异常升高患者对比白细胞异常升高患者结石复发率无明显差异（x2=2.086,P=0.420;x2=1.335,P=0.821）,观察组对比对照组,术前WBC、NEU异常患者结石复发率有明显差异（P<0.05）;观察组术前ALT、AST、ALB、PA、DBIL、IBIL异常患者对比对照组对应指标患者复发率均有显着差异（P<0.05）;Logic回归模型在调整了手术方式、手术次数,术前炎性指标异常人数,术前肝功能异常人数后,结果显示:多次胆道手术史[OR=2.31（95%CI:1.34-3.97）,P<0.01]、术前WBC异常[OR=1.58（95%CI:0.81-3.10）,P<0.01]、术前NEU异常[OR=3.60（95%CI:1.90-6.82）,P<0.01]、术前ALT异常[OR=3.48（95%CI:1.86-6.40）,P<0.01]、术前AST异常[OR=3.86（95%CI:2.23-4.32）,P<0.01]、术前ALB异常[OR=3.92（95%CI:2.41-4.58）,P<0.01]、术前PA异常[OR=4.01（95%CI:2.56-5.01）,P<0.01]、术前DBIL异常[OR=3.98（95%CI:2.43-4.62）,P<0.01]、术前IBIL异常[OR=3.96（95%CI:2.42-4.60）,P<0.01]是胆道术后结石复发的独立风险因素。结论:术后应用十二味疏肝利胆颗粒能够有效控制胆道感染与胆管炎症,能阻断致石性胆汁的形成,促进患者肝功能迅速改善,调节肝脏的分泌与代谢功能,降低胆管内压力,减少胆汁淤积,促进残石排除,减少患者带管时间,进而逆转胆管结石复发,显着降低患者远期肝外胆管结石复发率,既减轻了患者的身心负担,也提高了医疗资源的利用率,带来了良好的社会效益与经济效益,值得在日常临床实践中加以推广。
王淑平,李坤寅,邵芷若,关永格,陈宝艳[8]（2020）在《茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠的动物实验研究》文中研究指明目的建立妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）大鼠动物模型,并探究茵陈蒿汤干预对于其血清生化指标及肝组织病理改变的影响。方法将40只SPF级中期妊娠（孕10～14 d）Wistar大鼠,随机分为A组30只、B组10只。对A组30只大鼠颈部皮下连续注射5 d苯甲酸雌二醇注射液及黄体酮注射液,进行模型复制,再将模型复制成功的25只随机分为茵陈蒿汤组12只、模型组13只;同时将上述未作模型复制处理的B组10只大鼠标记为对照组。模型组及对照组大鼠予以生理盐水(2 mL·次-1·d-1),茵陈蒿汤组大鼠予以茵陈蒿汤水煎剂(1.35 g·kg-1·d-1),连续灌服14 d后,对谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）等生化指标进行检测;通过光学显微镜观察大鼠肝脏结构及细胞形态变化,并进行肝脏Knodell组织学活动指数（HAI）评分比较。结果与对照组比较,模型组ALT、AST、TBIL、TBA及肝脏Knodell组织学活动指数（HAI）评分均明显升高（P<0.05）。与模型组比,茵陈蒿汤组血清生化指标ALT、AST、TBIL、TBA及HAI评分均明显低于模型组,且差异有统计学意义（P<0.05）。结论苯甲酸雌二醇及黄体酮可诱导妊娠中期大鼠发生血清生化指标ALT、AST、TBIL、TBA升高以及肝脏组织病理改变,可作为一种稳定、有效的妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠模型复制方法。茵陈蒿汤可有效降低妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠血清ALT、AST、TBIL、TBA水平,同时对肝组织病理及肝功能的改善具有明显的治疗作用。
王国凤,昝斌,马越鸣[9]（2020）在《茵陈术附汤药效学与药动学研究进展》文中研究说明茵陈术附汤出自《医学心悟》,主治阴黄证,现代临床多应用于肝炎、慢性肝衰竭等肝脏疾病,疗效显着。基础研究显示,茵陈术附汤对阴黄证、胆汁淤积模型动物具有保护作用,其机制与逆转胆汁酸紊乱、抑制炎症反应、抗肝细胞凋亡、促进胆红素代谢等有关。药动学研究揭示其效应成分以及体内代谢过程的特点。作为该方君药,茵陈及其有效成分在多种肝损伤模型上显示出保肝效应。对茵陈术附汤的临床应用与疗效、药效学评价及作用机制、药动学等研究进展进行综述,为临床疾病治疗及该方的深度研发提供参考。
陈龙庆[10]（2020）在《MiR-7def CD4+T细胞对小鼠急性肝损伤的作用研究》文中进行了进一步梳理目的:观察MiR-7敲减的CD4+T细胞(MiR-7defCD4+T cells)对刀豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）诱导的小鼠急性肝损伤的作用并初步探讨其相关分子机制。方法:野生型（WT）小鼠腹腔注射30 mg/kg ConA建立ConA诱导的急性肝损伤模型;Realtime PCR法检测肝组织、肝细胞、肝浸润淋巴细胞中MiR-7表达变化,以及脾细胞中CD4+T细胞MiR-7表达变化;野生型（WT）小鼠利用抗CD4抗体腹腔注射,清除CD4+T细胞,7天后小鼠腹腔注射30 mg/kg ConA建立ConA诱导的急性肝损伤模型,观察模型小鼠体重变化;HE染色观察肝脏病理变化,连续监测法检测血清中谷丙转氨酶（ALT）水平变化;免疫磁珠法（MACS）分选获取CD45.2+MiR-7def和CD45.2+WT小鼠的CD4+CD62Lhii T细胞,按1×106个细胞/只经尾部静脉分别过继转输给CD45.1 WT小鼠,12 hrs后,按照30 mg/kg ConA腹腔注射小鼠,构建CD45.2+MiR-7defCD4+CD62Lhii T细胞的过继转输急性肝损伤模型;HE染色观察小鼠肝脏及脾脏组织病理学变化;连续监测法检测血清中ALT水平;流式细胞术（FACS）检测肝脏组织中CD4+T细胞（CD45.1+CD4+T细胞和CD45.2+CD4+T细胞）、CD45.2+CD4+T细胞的比例及其相关的淋巴细胞活化膜分子CD62L和CD69的水平、细胞增殖标志分子Ki67、细胞因子IFN-γ的表达变化;进一步构建MiR-7和MAPK4双敲除转基因小鼠MiR-7defMAPK4-/-小鼠;MACS分选获取MiR-7defMAPK4-/-小鼠的CD4+CD62Lhii T细胞,按1×106个细胞/只经尾部静脉过继转输给Rag1-/-小鼠,12 hrs后,腹腔注射30mg/kg ConA建立MAPK4-/-MiR-7def双转基因急性肝损伤小鼠模型;连续监测法检测血清中ALT水平;FACS检测肝脏组织中CD4+T细胞的比例及其相关的淋巴细胞活化膜分子CD62L和CD69的水平、以及细胞因子IFN-γ的表达变化。结果:与对照组相比,MiR-7的表达水平在急性肝损伤的WT小鼠肝脏组织中明显上升（p<0.05）;在急性肝损伤的WT小鼠的肝细胞中MiR-7的表达水平变化不明显,而在肝脏组织浸润淋巴细胞和脾细胞中MiR-7的相对表达水平显着升高（p<0.05）;ALI模型小鼠脾脏中CD4+T细胞中MiR-7的相对表达水平显着升高（p<0.01）;清除了CD4+T细胞的MiR-7def小鼠的体重降低率明显减低（p<0.05）、血清ALT水平明显降低（p<0.05）,且肝脏组织中炎性细胞浸润明显减少,病理损伤明显减轻;与对照组相比,过继转输了CD45.2+MiR-7def小鼠CD4+CD62Lhii T细胞组的CD45.1+WT ALI模型小鼠体重明显降低（p<0.05）、肝脏病理损伤更加严重、且血清中ALT的水平明显增加（p<0.05）;CD45.2+CD4+T细胞的比例显着增加（p<0.01）、CD45.2+CD4+T细胞增殖标志分子Ki67的表达比例显着增加（p<0.05）、CD45.2+CD4+T细胞中细胞因子IFN-g的表达水平明显增加（p<0.05）及其表达CD62L细胞的比例显着降低（p<0.05）,而表达CD69细胞的比例却显着上调（p<0.01）;同时,脾脏中总的CD4+T细胞（CD45.1+CD4+T细胞和CD45.2+CD4+T细胞）比例亦是明显增加（p<0.01）、CD4+T细胞（CD45.1+CD4+T细胞和CD45.2+CD4+T细胞）中Ki67的表达比例亦是明显上调（p<0.05）、CD4+T细胞（CD45.1+CD4+T细胞和CD45.2+CD4+T细胞）中IFN-g的表达水平亦是明显增加（p<0.05）及其表达CD62L细胞的比例亦是明显降低（p<0.05）,而表达CD69细胞的比例也明显增加（p<0.01）;最后,过继转输MAPK4-/-MiR-7def小鼠CD4+CD62Lhii T细胞组小鼠血清中ALT水平明显降低（p<0.01）、小鼠肝脏组织中CD4+T细胞表达细胞因子IFN-g的水平明显降低（p<0.01）、小鼠肝脏组织中CD4+T细胞表达活化标志CD62L的水平明显增加,而CD69的水平显着降低（p<0.05,p<0.01）。结论:MiR-7敲减可显着增强CD4+T细胞的活化、增殖及细胞因子分泌等生物学功能,并促进急性肝损伤的发生,其机制与MiR-7的靶分子MAPK4有关。
二、大黄对急性肝内胆汁淤积大鼠治疗效应的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大黄对急性肝内胆汁淤积大鼠治疗效应的实验研究（论文提纲范文）
（1）基于生物信息学的茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制肝脏炎癌转化机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 茵陈蒿汤溯源与研究进展 |
| 综述二 茵栀黄颗粒溯源与研究进展 |
| 综述三 肝脏炎癌转化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 肝脏炎癌转化的关键基因研究 |
| 第一节 基于生物信息学的乙型肝炎炎癌转化关键基因研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 基于生物信息学的丙型肝炎炎癌转化关键基因研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 茵陈蒿汤茵栀黄颗粒抑制肝脏炎癌转化机制研究 |
| 第一节 基于网络药理学的茵陈蒿汤抑制肝脏炎癌转化机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二节 基于网络药理学的茵栀黄颗粒治疗乙型肝炎机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三节 基于网络药理学的茵栀黄颗粒抑制肝脏炎癌转化机制研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 中西医治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第一节 西医诊断和治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第二节 中医药治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第二章 柴芪益肝方治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎肝纤维化的临床回顾性研究 |
| 前言 |
| 第一节 临床资料 |
| 第二节 分组与治疗 |
| 第三节 结果分析 |
| 第四节 讨论与小结 |
| 第三章 基于网络药理学探讨柴芪益肝方治疗肝纤维化的作用机制 |
| 前言 |
| 第一节 资料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论与小结 |
| 第四章 柴芪益肝方对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的作用及机制研究 |
| 前言 |
| 第一节 材料与研究方法 |
| 第二节 指标检测 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论与小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤早期生物标志物的表达及利胆合剂作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.现代医学对婴儿胆汁淤积性肝损伤的认识 |
| 1.1 婴儿胆汁淤积性肝损伤的发病机制 |
| 1.2 婴儿胆汁淤积性肝损伤的传统血清标志物 |
| 1.3 婴儿胆汁淤积性肝损伤的新型血清标志物 |
| 1.4 婴儿胆汁淤积性肝损伤的治疗 |
| 1.5 小结 |
| 2.祖国医学对婴儿胆汁淤积性肝损伤的认识 |
| 2.1 对病因病机的认识 |
| 2.2 辩证思路 |
| 2.3 治疗的认识 |
| 2.4 小结 |
| 3.利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝损伤的理论依据 |
| 4.研究设想 |
| 4.1 临床研究 |
| 4.2 实验研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1.新型血清标志物在新生儿高间接胆红素血症及婴儿胆汁淤积性肝病中的研究 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 2.利胆合剂对婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤的临床疗效研究 |
| 2.1 临床资料 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 动物实验研究 |
| 1.血清GLDH、ASS、CES-1 在不同时间点与ALT比较(预实验) |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 模型制备及标本取材 |
| 1.3 观察指标及测定方法 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 2.利胆合剂在不同时间点对胆汁淤积肝损伤的作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 模型制备及标本取材 |
| 2.3 观察指标及测定方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 全文总结 |
| 1.结论 |
| 2.创新 |
| 3.问题与措施 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（4）基于代谢组学探讨重证婴儿胆汁淤积性肝病生物标志物及利胆合剂相关研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 婴儿胆汁淤积性肝病中西医诊疗的理论研究 |
| 1.1 现代医学对婴儿胆汁淤积性肝病的认识 |
| 1.2 现代医学治疗婴儿胆汁淤积性肝病的研究进展 |
| 1.3 中医学对婴儿胆汁淤积性肝病的认识 |
| 1.4 中医药治疗婴儿胆汁淤积性肝病的研究进展 |
| 1.5 重证婴儿胆汁淤积性肝病的提出 |
| 2 代谢组学在疾病中病证客观化的理论研究 |
| 2.1 代谢组学的基本内涵 |
| 2.2 代谢组学与病证客观化之间联系 |
| 第二部分 临床实验研究 |
| 1 引言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 病例来源及分组 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 代谢组学检测方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 基于血液代谢物结果的证候研究 |
| 3.2 基于尿液代谢物结果的证候研究 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 动物实验研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物来源 |
| 2.2 实验器材 |
| 2.3 动物造模及分组 |
| 2.4 样本采集及处理 |
| 2.5 主要仪器参数设置 |
| 2.6 样本分析及质量控制 |
| 2.7 数据处理和统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 利胆合剂改善胆汁淤积幼龄大鼠生活状态 |
| 3.2 利胆合剂降低胆汁淤积幼龄大鼠血清生化指标水平 |
| 3.3 利胆合剂减轻胆汁淤积幼龄大鼠肝脏病理程度 |
| 3.4 利胆合剂调节胆汁淤积幼龄大鼠血液代谢物水平 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 本研究创新之处 |
| 3 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 研究病历卡 |
| 2 知情同意书样张 |
| 3 文献综述 基于代谢组学研究重证婴儿胆汁淤积性肝病病证客观化的思路 |
| 参考文献 |
| 4 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）中药复方汤剂治疗淤胆型肝炎的荟萃分析及临床用药规律探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献检索 |
| 1.2 文献纳入标准 |
| 1.3 文献排除标准 |
| 1.4 文献筛查与资料提取 |
| 1.5 偏倚风险评估 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献筛选结果 |
| 2.2 纳入研究的特征 |
| 2.3 纳入研究偏倚风险评价 |
| 2.4 结局指标结果 |
| 2.5 处方用药统计结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 病中求证 |
| 3.2 因证施治 |
| 3.3 遣方用药规律 |
| 3.4 研究的客观性评价 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 淤胆型肝炎的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（6）茵陈蒿汤防治肝脏疾病的药理作用及药动学研究进展（论文提纲范文）
| 1 茵陈蒿汤防治肝脏疾病的药理作用 |
| 1.1 促进胆红素的代谢 |
| 1.2 调节胆汁酸平衡 |
| 1.3 调节脂质和降血糖 |
| 1.4 抗氧化 |
| 1.5 抑制肝星状细胞活化 |
| 1.6 抑制肝细胞凋亡 |
| 1.7 抗炎 |
| 1.8 调节肠道菌群 |
| 2 茵陈蒿汤药动学研究 |
| 2.1 健康动物模型的药动学研究 |
| 2.2 肝损伤模型的药动学研究 |
| 3 结语 |
（7）十二味疏肝利胆颗粒肝外胆管结石术后应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1.资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 病例分组 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.4 .纳入和排除标准 |
| 1.5 仪器与试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 治疗方法和两种治疗方案的选择 |
| 2.1.1 治疗方法 |
| 2.1.2 两组治疗方案的选择 |
| 2.1.3 十二味疏肝利胆颗粒方剂的确定 |
| 2.2 .观察指标及方法 |
| 2.2.1 基线资料 |
| 2.2.2 白细胞及中性粒细胞 |
| 2.2.3 肝功能指标 |
| 2.2.4 胆汁引流量及T管拔出时间 |
| 2.2.5 术后随访 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3.结果 |
| 3.1 两组基线资料比较 |
| 3.2 两组血白细胞和中性粒细胞比较 |
| 3.3 两组治疗前后肝功能对比 |
| 3.4 两组胆汁引流量及拔出T管时间 |
| 3.5 两组随访结果及其影响结石复发的相关危险因素分析 |
| 3.5.1 随访结果 |
| 3.5.2 两组手术方式对结石复发的影响 |
| 3.5.3 多次胆道手术史对结石复发的影响 |
| 3.5.4 术前异常血象对结石复发的影响 |
| 3.5.5 两组患者术前肝功能对结石复发的影响 |
| 3.5.6 两组患者与结石复发相关独立风险因素的Logic回归分析 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 中西医结合治疗肝胆管结石研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（8）茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠的动物实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物及试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物及模型建立 |
| 1.4 实验分组及给药方法 |
| 1.5 大鼠血清生化指标的检测 |
| 1.6 大鼠肝脏标本的采集及病理学观察 |
| 1.7 肝脏Knodell组织学活动指数（HAI）的评分 |
| 1.8 统计学处理方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 茵陈蒿汤对妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠血清生化指标的影响 |
| 2.2 茵陈蒿汤对妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠肝脏组织病理学的影响 |
| 2.3 茵陈蒿汤对妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠肝脏Knodell组织学活动指数（HAI）评分的影响 |
| 3 讨论 |
（9）茵陈术附汤药效学与药动学研究进展（论文提纲范文）
| 1 茵陈术附汤药效学研究 |
| 1.1 临床研究 |
| 1.1.1 肝炎 |
| 1.1.2 慢性肝衰竭 |
| 1.1.3 其他疾病 |
| 1.2 基础研究 |
| 1.2.1 药效学评价 |
| 1.2.2 作用机制研究 |
| 1.2.2.1 逆转胆汁酸紊乱 |
| 1.2.2.2 抑制炎症反应 |
| 1.2.2.3 抗肝细胞凋亡 |
| 1.2.2.4 促进胆红素代谢 |
| 1.3 茵陈药效学研究 |
| 2 茵陈术附汤药动学研究 |
| 3 小结与展望 |
（10）MiR-7def CD4+T细胞对小鼠急性肝损伤的作用研究（论文提纲范文）
| 中英缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、大黄对急性肝内胆汁淤积大鼠治疗效应的实验研究（论文参考文献）
- [1]基于生物信息学的茵陈蒿汤和茵栀黄颗粒抑制肝脏炎癌转化机制研究[D]. 张景媛. 北京中医药大学, 2021
- [2]柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究[D]. 周怡驰. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]婴儿胆汁淤积性肝病肝损伤早期生物标志物的表达及利胆合剂作用的研究[D]. 张领领. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [4]基于代谢组学探讨重证婴儿胆汁淤积性肝病生物标志物及利胆合剂相关研究[D]. 丘燕燕. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [5]中药复方汤剂治疗淤胆型肝炎的荟萃分析及临床用药规律探讨[D]. 李晨冰. 湖北中医药大学, 2021(09)
- [6]茵陈蒿汤防治肝脏疾病的药理作用及药动学研究进展[J]. 王晶,欧阳冰琛. 药物评价研究, 2021(03)
- [7]十二味疏肝利胆颗粒肝外胆管结石术后应用研究[D]. 张晟铭. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [8]茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠的动物实验研究[J]. 王淑平,李坤寅,邵芷若,关永格,陈宝艳. 中药新药与临床药理, 2020(12)
- [9]茵陈术附汤药效学与药动学研究进展[J]. 王国凤,昝斌,马越鸣. 上海中医药大学学报, 2020(05)
- [10]MiR-7def CD4+T细胞对小鼠急性肝损伤的作用研究[D]. 陈龙庆. 遵义医科大学, 2020