一、雌激素减轻大鼠血管钙化的实验研究（论文文献综述）
王宝剑[1]（2021）在《基于“阳化气，阴成形”理论研究TGF-β1/Smads影响黄韧带肥厚的机制及模型的建立》文中进行了进一步梳理黄韧带肥厚（Ligamentum flavum hypertrophy,LFH）是退行性腰椎管狭窄症（Degenerative Lumbar Spinal Stenosis,DLSS）的主要病理表现之一。黄韧带（ligamentum flavum,LF）位于上、下椎板之间,从颈椎延伸至骶椎,起到保护和稳定脊柱的作用。黄韧带在纤维化过程中一方面是其自身体积发生增厚的改变,另一方面是其自身弹性的下降在脊柱后伸时出现皱褶、折叠,使椎管容积减小,导致马尾神经、神经根的受压和缺血缺氧。与此同时,肥厚黄韧带中增多的炎性介质会透过硬脊膜而扩撒至神经根,易造成神经根的炎症及水肿。另外,炎性介质还可以激活多种纤维化因子的表达而加速纤维化的进程。因此黄韧带炎症与纤维化的病理改变共同参与、相互影响而导致了 DLSS腰腿痛、间歇性跛行的症状。在退行性脊柱疾病的促炎细胞因子中,IL-1β、TNF-α是最主要的参与者,其在肥厚黄韧带中的高表达已得到初步证实,另外TGF-β 1/Smads被认为是引起纤维化的最重要的信号传导通路,它在各种组织与器官的纤维化和瘢痕组织纤维性修复过程中有着核心的推动作用。但目前关于黄韧带炎性或纤维化信号通路的研究较少。至于Smads通路是否可以介导TGF-β1致使细胞外基质沉积而导致黄韧带的肥厚,以及IL-1β、TNF-α和TGF-β 1/Smads通路中的相关原件与黄韧带厚度、纤维化程度的具体相关性尚未见报道。而在中医机制方面,“阳化气,阴成形”理论对黄韧带肥厚的病机阐明具有重要指导作用,该理论与现代医学“炎症-纤维化”的病理机制相契合。但目前尚无从该角度探讨黄韧带肥厚的报道。黄韧带肥厚动物模型的建立是研究退行性脊柱疾病的基础,也是探索黄韧带增厚机制、发现药物潜在治疗靶点的前提。但极少数研究涉及腰椎黄韧带肥厚动物模型的制作,对于该动物模型目前仍存在争议。实验一基于“阳化气,阴成形”理论研究IL-1β、TNF-α和TGF-β1/Smads在LFH中的表达及相关性目的:通过对比增厚黄韧带与未增厚黄韧带的纤维化程度以及IL-1β、TNF-α和TGF-β 1/Smads通路相关原件的表达水平,探索黄韧带厚度与纤维化程度和以上原件表达的具体相关性,初步证实Smads通路可以介导TGF-β1致使细胞外基质沉积而导致黄韧带肥厚。从“阳化气,阴成形”理论角度阐述黄韧带肥厚的中医病机,以期为中医药干预黄韧带“炎症-纤维化”病理过程提供理论支持。方法:（1）在取得医学伦理批准和患者知情同意的前提下,在临床手术中收集废弃的DLSS组增厚黄韧带和腰椎间盘突出症（Lumbar disc herniation,LDH）组未增厚黄韧带,各25例。（2）通过MRI测量两组黄韧带的厚度并对比其差异。（3）对两组标本组织进行HE染色组织学观察。（4）进行Masson三色法染色后,通过纤维化分级标准以及弹性纤维-胶原纤维比值来对比两组黄韧带总体与各层（腹侧层、中间层、背侧层）纤维化程度的差异。（5）免疫组化法检测两组黄韧带IL-1β、TNF-α、TGF-β 1/Smads（TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7）、collagen Ⅰ（Col 1）、collagen Ⅲ（Col 3）的定位、半定量表达。（6）Real-Time PCR 法检测两组黄韧带 IL-1β、TNF-α、TGF-β1/Smads（TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7）、Col1 和 Col 3 mRNA 的定量表达。（7）相关性研究:通过pearson相关与线性回归分析明确DLSS组黄韧带的厚度与其各层纤维化程度、mRNA表达的具体相关性。结果:（1）DLSS 组的黄韧带厚度为 5.13±0.80mm,大于 LDH 组 3.52±0.67mm（p<0.01）。（2）HE染色下,LDH组的未增厚黄韧带弹性纤维呈直线状,排列紧密且整齐,表面光滑连续,以弹性纤维为主,含有少量胶原纤维,细胞数目较少。DLSS组增厚的黄韧带纤维呈波浪状,排列紊乱、疏松,弹性纤维减少,胶原纤维含量增加,成纤维细胞增多。（3）DLSS组的总体纤维化分级为2.44±0.31级,高于LDH组的1.62±0.22级（p<0.05）;DLSS组腹侧层、中间层、背侧层的纤维化分级均高于LDH组（p<0.05或p<0.01或p<0.001）;DLSS组腹侧层、中间层、背侧层的纤维化分级是逐渐递增的,即腹侧层<中间层<背侧层（p<0.05或p<0.01）;DLSS组的弹性纤维-胶原纤维面积比值为1.85±0.54,低于LDH组的2.92±0.37（p<0.01）;DLSS组腹侧层、中间层、背侧层的弹性-胶原纤维比值均低于LDH组（p<0.05或p<0.01）;DLSS组腹侧层、中间层、背侧层的弹性-胶原纤维比值是逐渐递减的,即腹侧层>中间层>背侧层（p<0.05或p<0.01）。（4）免疫组化:DLSS 组的 IL-1 β、TNF-α、TGF-β 1、p-Smad2/3、Col 1和Col 3的蛋白表达均高于LDH组（p<0.05或p<0.01或p<0.001）。DLSS组的Smad7的蛋白表达低于LDH组（p<0.01）。（5）Real-Time PCR:DLSS 组 IL-1β、TNF-α、TGF-β1、Smad2、Smad3、Col 1 和 Col 3 的 mRNA 表达高于 LDH 组（p<0.05 或 p<0.01 或 p<0.001）。DLSS 组 Smad7 的 mRNA 表达低于 LDH 组（p<0.05）;DLSS 组的 IL-1β、TGF-β1、Smad2、Smad3、Col 1和Col 3的mRNA表达在背侧层最高,腹侧层最低,有从背侧层向腹侧层逐渐递减的趋势。Smad7的mRNA表达在背侧层最低,腹侧层最高,有从背侧层向腹侧层逐渐递增的趋势。（6）在DLSS组中,黄韧带腹侧层、中间层以及背侧层的纤维化分级随着黄韧带的厚度的增加而升高。各层的相关系数r分别为0.54,0.73,0.84,说明黄韧带的厚度与背侧层纤维化分级的相关程度最高。黄韧带腹侧层、中间层以及背侧层的弹性纤维-胶原纤维比随着黄韧带的厚度的增加而降低。各层的相关系数r分别为-0.62,-0.72,-0.81,说明黄韧带的厚度与背侧层弹性-胶原纤维比值的相关程度最高。（7）在DLSS组中,黄韧带厚度与背侧层TGF-β 1 mRNA表达的相关程度最高,其次依次为IL-1 β、Col 1等;黄韧带厚度与中间层IL-1 β mRNA表达的相关程度最高,其次依次为Smad7、TGF-β 1等;黄韧带厚度与腹侧层TGF-β 1 mRNA表达的相关程度最高,其次依次为为IL-1 β、Col 3等。结论:（1）相较于未增厚黄韧带,肥厚黄韧带中TGF-β1、Smad2、Smad3（或p-Smad2/3）、Col 1和Col3的mRNA和蛋白均呈高表达,Smad7的mRNA和蛋白呈低表达。初步证实Smads通路可以介导TGF-β1致使细胞外基质沉积而导致黄韧带肥厚。（2）在肥厚黄韧带中,背侧层的纤维化程度大于中间层和腹侧层。其厚度也与各层的纤维化程度呈正线性相关,且以背侧层相关性最高,中间层次之,最后是腹侧层。在肥厚黄韧带中,IL-1β、TNF-α、TGF-β1、Smad2、Smad3、Col 1和Col 3 mRNA表达均高于中间层和腹侧层,Smad7 mRNA表达低于中间层和腹侧层。其厚度也与各层的mRNA表达呈正线性（或负线性）相关,且以背侧层相关性最高,中间层次之,最后是腹侧层。说明黄韧带炎症与纤维化的严重程度由背侧向腹侧逐渐递减,其病理改变可由背侧向腹侧逐渐发展。（3）结合“阳化气,阴成形”理论认为,黄韧带在增龄、急性创伤、慢性劳损等因素作用下易出现微损伤,并诱导了局部炎症反应,当机体处于“阴平阳秘”的生理状态时,这种损伤尚能引发适度的炎症反应,以及正常的纤维化修复和瘢痕的形成,而当机体处于阴阳失衡、阳不化气状态时,持续的炎症反应使细胞因子、趋化因子等代谢产物长期聚集于黄韧带局部,形成了炎症微环境,从而诱发了过度的纤维化修复和瘢痕的形成。该中医理论与现代医学中炎症反应诱发过度的纤维化修复和瘢痕形成的理论相类似。实验二基于三种造模方法诱导大鼠黄韧带肥厚动物模型的建立与评价目的:建立一种新的黄韧带肥厚大鼠模型,并将其与人肥厚黄韧带组织进行比较、评估。同时,探讨腰椎活动范围的增加所诱发黄韧带增厚的机制。方法:（1）将72只大鼠分为A假手术组（切开皮肤等组织后缝合）、B肌肉切除组（切除L5-L6椎旁肌肉）、C骨关节切除组（切除L5-L6棘突和棘上韧带,磨除L5/6双侧关节突关节的一半,关节囊不做缝合处理）以及D肌肉+骨关节切除组（B+C混合）共4组,于造模后的4w、8w、12w共3个时间点取材。（2）通过对黄韧带的HE染色和Masson染色,测量L5/6节段黄韧带总体和背侧层的厚度以及弹性纤维-胶原纤维的比值。（3）通过X线片测量屈曲和背伸位时L5/6节段的活动范围和椎间隙高度。（4）通过免疫组化、免疫印迹、Real-Time PCR法检测黄韧带中炎性因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β1/Smads通路相关原件和Col 1、Col 3的表达。（5）将大鼠黄韧带与人肥厚黄韧带的退变程度进行比较、评估。结果:（1）HE染色与黄韧带厚度的测量:三种造模方法均可以引起黄韧带厚度的增加,其中以肌肉+骨关节切除法最明显,其次为骨关节切除法,最后为肌肉切除法。12w时肌肉+骨关节切除组黄韧带的整体厚度是假手术组的1.35倍,骨关节切除组是假手术组的1.14倍,肌肉切除组是假手术组的1.06倍。但三种造模方法均不能引起黄韧带宽度的额外增加。12w时肌肉+骨关节切除组黄韧带背侧层厚度是假手术组的2.09倍,骨关节切除组是假手术组的1.26倍,肌肉切除组是假手术组的0.96倍。三种造模方法中只有骨关节切除法和肌肉+骨关节切除法可以引起黄韧带背侧层厚度及其所占比例的增加,其中以肌肉+骨关节切除法最为明显,其次为骨关节切除法。（2）Masson染色与纤维化程度:三种造模方法均可以引起黄韧带的弹性-胶原纤维比值的下降,其中以肌肉+骨关节切除法最为明显,其次为骨关节切除法,最后为肌肉切除法。12w时肌肉+骨关节切除组黄韧带的弹性-胶原纤维比是假手术组的0.43倍,骨关节切除组是假手术组的0.66倍,肌肉切除组是假手术组的0.95倍。（3）影像学测量:三种造模方法均可以造成屈曲位椎间隙后方高度和活动范围的增加,其中以肌肉+骨关节切除法最明显,骨关节切除法次之,最后是肌肉切除法。（4）免疫组化、免疫印迹、Real-Time PCR:①免疫组化结果显示,肌肉+骨关节切除组所产生的 IL-1 β、TNF-α、TGF-β 1、p-smad2/3、Col 1 和 Col 3的蛋白表达量最多,Smad7的表达量最少,其次为骨关节切除法,最后为肌肉切除法;②免疫印迹结果显示,肌肉+骨关节切除组所产生的IL-1 β、TNF-α、TGF-β1和Col 1的蛋白表达量最多,其次为骨关节切除法,最后为肌肉切除法;③Real-Time PCR结果显示,肌肉+骨关节切除组所产生的IL-1 β、TNF-α、TGF-β1、Smad2、Smad3、Col1和Col 3的mRNA表达量最多,其次为骨关节切除法,最后为肌肉切除法。（5）造模术后12w时假手术组的弹性-胶原纤维的比值为2.79,将其与实验一中数据比较,其退变程度类似于人未增厚的黄韧带（2.92）;肌肉切除组的弹性-胶原纤维的比值为2.65,退变程度仍接近人未增厚的黄韧带（2.92）;骨关节切除组的弹性-胶原纤维的比值为1.84,退变程度接近人轻度肥厚的黄韧带（1.66-2.23）;肌肉+骨关节切除组的弹性-胶原纤维的比值为1.19,退变程度与人中度肥厚的黄韧带相近（1.08-1.66）。结论:（1）建立了一种新的黄韧带肥厚大鼠模型,其退变程度可能类似于人类中度肥厚的黄韧带。（2）三种造模方法均能引起黄韧带退变与增厚,其程度依次为肌肉+骨关节切除法>骨关节切除法>肌肉切除法。（3）在大鼠模型中,黄韧带背侧层的增厚占比例最高,这可能是由于背侧层在屈曲位受到更大的应力导致的。说明机械应力可能是诱发或加速黄韧带增厚的重要因素。（4）腰椎屈曲范围的增加所引发的机械应力可导致黄韧带中炎性因子TNF-α、IL-1 β的高表达,并诱导TGF-β 1/Smads通路致使细胞外基质沉积而导致黄韧带肥厚。
林泉[2]（2021）在《西洋参丹参配伍调控PI3K/Akt/NF-κB通路稳定动脉粥样硬化易损斑块的作用机制研究》文中研究表明动脉粥样硬化（AS）是心血管疾病的重要病理学基础,易损斑块破裂和继发性血栓形成是急性心血管事件发生的主要原因。易损斑块具有泡沫细胞聚集、脂质核心增大和纤维帽变薄等特点,这些特征与炎症反应、氧化应激和内皮损伤密切相关。近年来大量研究表明,PI3K/Akt/NF-κB信号通路与AS病理生理过程密切相关,参与炎症反应、氧化应激和内皮功能的调节,调控PI3K/Akt/NF-κB通路有望成为稳定AS易损斑块的新策略。益气活血养阴法是防治动脉粥样硬化性心血管病的基本治则之一,既往研究发现益气活血养阴方药可通过抑制血管炎症反应、氧化应激和保护内皮功能而发挥抗AS的作用;西洋参丹参配伍是常用的益气活血养阴药对,其能否抑制动脉粥样硬化病变进展、稳定AS易损斑块,还有待进一步深入研究。本课题通过开展系统评价、网络药理学、体内实验和体外实验研究探索西洋参丹参配伍对AS易损斑块的干预效应,探讨干预效应和PI3K/Akt/NF-κB通路之间的关系,旨在从循证医学、生物网络、物质基础、整体动物和细胞分子水平阐明西洋参丹参配伍稳定AS易损斑块的效应特点与作用机制。本课题研究分为两部分文献综述和实验研究。1文献综述:综述一西洋参丹参治疗动脉粥样硬化研究进展综述二PI3K/Akt/NF-κB信号通路在动脉粥样硬化中的研究进展2实验研究:包括以下五部分。研究一益气活血养阴方药治疗冠心病心绞痛的系统评价研究目的:应用meta分析方法,探讨益气活血养阴方药治疗冠心病心绞痛的疗效和安全性。方法:计算机检索 PubMed、EMbase、The Cochrane Library、CNKI、SinoMed、VIP和WanFang Data数据库,纳入益气活血养阴方药联合常规西药治疗冠心病心绞痛的相关RCT,检索时限为2010年1月1日至2021年1月31日,采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果:最终纳入15个Jadad评分≥4分的RCT,共1388例冠心病心绞痛患者。Meta分析结果显示,联合用药组的心绞痛疗效[RR=1.22,95%CI（1.15,1.29）,P<0.00001]、中医证候疗效[RR=1.16,95%C（1.08,1.25）,P=0.0001]、心电图疗效[RR=1.27,95%CI（1.16,1.39）,P<0.00001]、HDL-C[MD=0.52,95%CI（0.26,0.78）,P<0.0001]显着高于单纯常规西药治疗组,hs-CRP[SMD=-1.57,95%CI（-1.99,-1.14）,P<0.00001]、TC[MD=-1.05,95%CI（-1.57,-0.52）,P<0.0001]、TG[MD=-0.44,95%CI（-0.59,-0.29）,P<0.00001]、LDL-C[MD=-0.54,95%CI（-0.83,-0.24）,P=0.0004]、血浆粘度[MD=-0.38,95%CI（-0.57,-0.20）,P<0.0001]和纤维蛋白原含量[MD=-0.66,95%CI（-0.97,-0.36）,P<0.0001]显着低于单纯常规西药治疗组;在安全性方面,两组的不良反应发生率[RR=1.57,95%CI（0.63,3.91）,P=0.33]无统计学差异。结论:当前证据显示,与单纯常规西药治疗相比,益气活血养阴方药联合常规西药治疗能有效降低心绞痛患者的炎症、血脂和血液流变学指标水平,减轻心肌缺血,缓解临床症状,且具有较好的安全性。研究二基于网络药理学探讨西洋参丹参配伍治疗冠心病的作用机制目的:通过网络药理学方法,分析西洋参丹参配伍治疗冠心病的药理机制。方法:通过TCMSP数据库检索西洋参、丹参的活性成分及其靶点,并在Uniport数据库标准化靶点信息;通过Gencards、OMIM、TTD、DRUGBANK数据库获取冠心病相关靶点基因,使用R语言筛选药物和疾病交集靶点;通过String平台进行蛋白质相互作用分析,筛选关键靶点基因;采用DAVID数据库对交集靶点进行GO和KEGG通路富集分析。结果:西洋参丹参配伍治疗冠心病的关键靶点为STAT3、AKT1、TP53、TNF、MAPK1等,生物学通路主要作用于HIF-1信号通路、PI3K/Akt信号通路、TNF信号通路等。结论:本研究初步揭示了西洋参丹参配伍多成分、多靶点、多通路治疗冠心病的作用机制,为进一步开展基础和临床研究提供理论支持和研究方向。研究三西洋参丹参药物有效部位的制备及高效液相色谱法成分含量测定目的:在前期研究基础上制备西洋参丹参有效部位,并采用HPLC法测定有效部位中关键成分的含量。方法:本部分研究采用加热回流法提取、减压浓缩、大孔树脂层析分离纯化和真空干燥冷冻法制备西洋参皂苷、丹参酮和丹参酚酸三个有效部位,通过HPLC法测定各有效部位中主要成分含量。结果:西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量分别为0.13%、0.98%、2.4%,共计为3.51%;丹参中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA含量分别为0.05%、0.11%、0.14%,共计0.30%,丹参中丹酚酸B含量为3.08%,均符合国家药典标准。西洋参皂苷有效部位中主要成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量分别为1.24%、12.82%、42.49%,共计56.55%;丹参酮有效部位中主要成分隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量分别为14.51%、4.72%、17.5%,共计36.73%;丹参酚酸有效部位中主要成分丹酚酸B含量为40.67%。结论:本研究按生药量1:3比例将西洋参、丹参分别进行提取纯化,得到西洋参皂苷、丹参酮和丹参酚酸三个有效部位,进而将西洋参、丹参有效部位混合均匀,制成益气活血养阴配伍有效部位,用于动脉粥样硬化药理实验研究。研究四西洋参丹参配伍干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用机制研究目的:观察西洋参丹参配伍对ApoE-/-小鼠 AS易损斑块的影响,从炎症反应、内皮损伤和氧化应激角度探讨其作用机制。方法:90只ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养,造模12周后,随机分为模型组、辛伐他汀组（3.03mg/kg/d）、西洋参丹参有效部位低剂量组（以生药量计,西洋参0.75g/kg/d+丹参2.25g/kg/d）、西洋参丹参有效部位中剂量组（以生药量计,西洋参1.5g/kg/d+丹参4.5g/kg/d）、西洋参丹参有效部位高剂量组（以生药量计,西洋参3g/kg/d+丹参9g/kg/d）和西洋参丹参水煎剂组（以生药量计,西洋参1.5g/kg/d+丹参4.5g/kg/d）,15只C57BL/6J小鼠作为正常对照组;给予相应药物灌胃8周;采用主动脉油红O大体染色、主动脉根部H&E染色评估AS病变程度及斑块稳定性;采用全自动生化分析仪检测血脂指标水平;采用酶联免疫吸附法检测血清IL-1β、TNF-α、ICAM-1和ET-1等指标水平;采用生化法检测血清MDA、SOD和NO等指标水平;采用蛋白质免疫印迹法检测MMP-9、p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB蛋白表达水平。结果:①病理指标:主动脉油红O大体染色显示,模型组小鼠主动脉内膜可见脂质沉积,粥样斑块形成,较正常组明显红染,辛伐他汀组、西洋参丹参有效部位中剂量、高剂量和水煎剂组较模型组红染区域稀疏,脂质沉积明显减少,斑块面积与主动脉内膜面积比值显着降低（P<0.05）;主动脉H&E染色显示,模型组可见斑块突出管腔,管腔变窄,斑块表面纤维帽较薄且不均匀,斑块内可见脂质核心面积增大,大量的泡沫细胞聚集。各药物干预组较模型组斑块狭窄减轻,泡沫细胞数量降低,脂质核心面积减少。②血脂指标:与模型组相比,辛伐他汀和西洋参丹参高剂量组显着降低TG、TC水平（P<0.05）,西洋参丹参中剂量组显着升高HDL-C水平（P<0.05）。③炎症因子指标:与模型组比较,各药物干预组IL-1β、TNF-α水平均显着降低（P<0.05）,西洋参丹参中、高剂量组ICAM-1水平显着降低（P<0.05）。④内皮损伤指标:与模型组比较,辛伐他汀、西洋参丹参中、高剂量和水煎剂组NO含量均显着升高（P<0.05）,辛伐他汀、西洋参丹参中、高剂量和水煎剂组ET-1含量均显着降低（P<0.05）。⑤氧化应激指标:与模型组比较,各药物干预组SOD含量显着升高（P<0.05）,MDA含量显着降低（P<0.05）。⑥MMP-9:与模型组比较,各药物干预组MMP-9蛋白表达量均显着降低（P<0.05）;西洋参丹参有效部位中剂量组和水煎组相比,MMP-9表达无统计学差异（P>0.05）。⑦通路相关指标:与模型组比较,辛伐他汀组、西洋参丹参低、高剂量组p-PI3K蛋白表达量显着降低（P<0.05）;各药物干预组p-Akt蛋白表达量显着降低（P<0.05）;辛伐他汀、西洋参丹参中剂量、高剂量和水煎剂组p-NF-κB蛋白表达量显着降低（P<0.05）;西洋参丹参有效部位中剂量组和水煎组相比,p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB表达均无统计学差异（P>0.05）。结论:西洋参丹参配伍能够通过抑制炎症反应、改善氧化应激、减轻内皮损伤和降低主动脉MMP-9蛋白表达,减少脂质沉积和斑块面积,抑制斑块进展,稳定动脉粥样硬化易损斑块,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活有关。研究五西洋参丹参配伍干预ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究目的:观察西洋参丹参配伍对内皮细胞损伤的影响,探讨其作用机制。方法:根据实验三获得有效部位中人参皂苷Rb1和丹酚酸B的配比,称量相应质量的单体,混合均匀,作为干预药物。建立ox-LDL诱导的内皮细胞损伤模型,分为正常对照组、模型组（ox-LDL 75μg/mL）、西洋参丹参低剂量组（ox-LDL 75μg/mL+中药单体5μg/mL）、西洋参丹参高剂量组（ox-LDL75μg/mL+中药单体25μg/mL）、西洋参丹参高剂量组+740YP组（ox-LDL 75μg/mL+中药单体25μg/mL+740YP25μg/mL）,给予相应药物干预24h;采用CTG检测细胞活性;采用ELISA法检测ICAM-1和MMP-9含量;采用生化法检测MDA和SOD水平;采用蛋白质免疫印迹法检测p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB蛋白表达水平。结果:①CTG指标:与模型组相比,西洋参丹参低、高剂量组细胞活性明显增加（P<0.05）;740YP组与高剂量组相比,细胞活性明显减低（P<0.05）。②炎症因子指标:与模型组相比,西洋参丹参低、高剂量组ICAM-1、MMP-9明显降低（P<0.05）;740YP组与高剂量组相比,ICAM-1、MMP-9明显升高（P<0.05）。③氧化应激指标:与模型组相比,西洋参丹参高剂量组SOD明显增加,MDA明显降低（P<0.05）;740YP组与高剂量组相比,SOD明显减低,MDA明显升高（P<0.05）。④通路相关指标:与模型组相比,西洋参丹参低、高剂量组p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB明显降低（P<0.05）;740YP组与高剂量组相比,p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB明显升高（P<0.05）。结论:西洋参丹参配伍能够通过抑制PI3K/Akt/NF-κB通路提高细胞活性、改善氧化应激和抑制炎症反应,减轻内皮细胞损伤,保护内皮细胞。
廖源[3]（2021）在《电针对骨质疏松骨关节炎共病大鼠膝关节影响的机制研究》文中研究表明背景:随着老龄化的加剧,越来越多的人同时患有2-3种,甚至多种疾病,这一现象被命名为“共病”。有研究报道,共病的发病率自1988年开始攀升,2013-2014年美国人口 60%有两种以上疾病共病,将近40%有三种或以上疾病共病,23%有四种或以上疾病共病,且发病率随着年龄的增长而增长。骨质疏松与骨关节炎共病就是常见的躯体疾病共病中的一类。骨质疏松（Osteoporosis,OP）是以骨量减少、骨组织显微结构退化以及骨的脆性增加,极易发生骨折的一种全身性的骨骼疾病。骨关节炎（Osteoarthritis,OA）亦是一种临床常见的骨关节疾病,病理改变以关节软骨的变性、破坏,骨质的增生及硬化为特点。骨质疏松和骨关节炎在老年人群中最常见,尤其是老年女性,其中最重要的病理因素就是随着年龄增加,体内雌激素分泌减少。基于课题组前期对骨质疏松、骨关节炎的研究经验,为进一步了解电针对骨质疏松与骨关节炎共病大鼠的膝关节的影响,而开展本研究。本研究采用3月龄雌性大鼠去卵巢的方式造模,模拟骨质疏松与骨关节炎共病的病理状态,并观察电针干预对骨质疏松与骨关节炎共病模型大鼠膝关节的影响。目的:观察电针对去卵巢方法造模的骨质疏松与骨关节炎共病大鼠膝关节的软骨下骨和软骨的影响,以及对RANKL/OPG信号通路的影响。方法:将90只3月龄雌性清洁级Sprague-Dawley大鼠依据随机数字表法分为三组,分别为假手术组、去卵巢组以及电针干预组,每组大鼠30只。去卵巢组和电针干预组的大鼠,在无菌环境下实施双侧卵巢切除术,假手术组大鼠,只切除与卵巢旁与卵巢同等大小的脂肪组织。电针干预组大鼠给予电针治疗,取穴:双侧肾俞（BL23）、太溪（KI3）,血海（SP10）、足三里（ST36）、阳陵泉（SP9）,同侧肾俞与阳陵泉连接,同侧血海、太溪连接,双侧足三里连接,采用疏密波（疏波频率3Hz、密波频率15Hz）,强度以大鼠局部肌肉轻微收缩为度(0.7-1.0mA;每天1次,每次30分钟,每周5天;假手术组和去卵巢组不予干预。分别在术后第4、8、12周,各组随机处死10只大鼠。实验一 组织病理学检测:通过番红固绿染色观察关节软骨的形态并进行Mankin评分,以评估电针对大鼠膝关节软骨的影响。实验二 影像学检测:通过Micro-CT检测软骨下骨相关指标:骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁分离度（Tb.Sp）,以评估电针对大鼠膝关节软骨下骨的影响。实验三 生化检测:通过酶联免疫法（ELISA法）检测尿Ⅰ型胶原C端肽（Urinary C-terminal cross-linking telopeptide of type I collagen,UCTX-I）、尿 II 型胶原 C 端肽（Urinary C-terminal cross-linking telopeptide of type II collagen,UCTX-II）及血清雌二醇（serum 17 β-oestradiol,E2）,以评估电针对大鼠膝关节软骨下骨骨吸收,软骨降解及雌激素的作用。实验四 分子生物学检测:通过RT-PCR 了解基质金属蛋白酶13（Matrix Metallo Proteinase 13,MMP13）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子-KB 受体活化因子配体（receptor activator of NF-KB ligand,RANKL）mRNA 的表达水平。通过 Western-blot检测了解MMP13、OPG、RANKL的蛋白表达水平。结果:实验一 组织病理学结果提示电针抑制大鼠膝关节软骨退变。Mankin评分在术后第4、8、12周,去卵巢组均较假手术组升高（P<0.05）,差异有统计学意义;在术后第4、8周,电针干预组较去卵巢组无明显变化（P>0.05）,差异无统计学意义;而在术后第12周,电针干预组较去卵巢组降低（P<0.05）,差异有统计学意义。实验二 影像学结果提示电针抑制软骨下骨骨质疏松。BV/TV和Tb.Th在术后第4、8、12周,去卵巢组较假手术组均降低（P<0.05）,电针干预组较去卵巢组均升高（P<0.05）,差异均有统计学意义。Tb.N在术后第4、8、12周,去卵巢组均低于假手术组（P<0.05）,差异有统计学意义;电针干预组均高于去卵巢组,在术后第4周（P>0.05）,差异无统计学意义,但在术后第8、12周（P<0.05）,差异均有统计学意义。Tb.Sp在术后第4、8、12周,去卵巢组均较假手术组升高（P<0.05）;电针干预组均较去卵巢组降低（P<0.05）,差异均有统计学意义。实验三 生化结果提示电针抑制软骨下骨骨吸收、软骨变性及雌激素的下降。UCTX-Ⅰ在术后的第4、8、12周,去卵巢组均高于假手术组（P<0.05）,电针干预组均低于去卵巢组（P<0.05）,差异均有统计学差异。UCTX-Ⅱ在术后第4周,去卵巢组高于假手术组（P>0.05）,电针干预组低于去卵巢组（P>0.05）,差异均无统计学意义;但在术后第8、12周,去卵巢组均高于假手术组（P<0.05）,电针干预组均低于去卵巢组（P<0.05）,差异均有统计学意义。E2在术后的第4、8、12周,去卵巢组均较假手术组降低（P<0.05）,电针干预组均较去卵巢组高（P<0.05）,差异均有统计学意义。实验四 分子生物学结果提示电针抑制大鼠膝关节软骨退变及软骨下骨骨质疏松。在术后第4周,MMP13 mRNA表达三组间无统计学差异（P>0.05）;在术后第8周,MMP13 mRNA表达去卵巢组高于假手术组,电针干预组低于去卵巢组,但差异无统计学意义（P>0.05）;在术后第12周,MMP13 mRNA表达去卵巢组高于假手术组（P<0.05）,电针干预组低于去卵巢组（P<0.05）,差异均有统计学意义。在术后第4、8、12周,去卵巢组的OPG mRNA表达均低于假手术组（P<0.05）,差异有统计学意义,电针干预组均高于去卵巢组（P<0.05）,差异均有统计学意义。RANKL mRNA的表达在术后第4、12周,去卵巢组高于假手术组（P<0.05）,电针干预组低于卵巢组（P<0.05）,差异均具有统计学意义;在术后第8周,去卵巢组高于假手术组（P<0.05）,电针干预组低于卵巢组（P<0.05）,差异均具有统计学意义。在术后12周,MMP13蛋白的表达去卵巢组较假手术组升高（P<0.05）,差异有统计学意义,电针干预组较去卵巢组降低（P>0.05）,差异无统计学意义;OPG蛋白的表达去卵巢组较假手术组降低（P<0.05）,电针干预组较去卵巢组升高（P<0.05）,差异均有统计学意义;RANKL蛋白的表达去卵巢组较假手术组升高（P<0.05）,电针干预组较去卵巢组降低（P<0.05）,差异均有统计学意义。结论:本研究发现电针可以改善骨质疏松与骨关节炎共病大鼠膝关节软骨下骨骨质疏松,抑制膝关节软骨退变,这可能是通过调控RANKL/OPG信号通路调控实现的。
陈婧[4]（2021）在《尿毒清对慢性肾衰竭大鼠主动脉钙化的影响》文中研究表明目的观察不同剂量尿毒清颗粒对慢性肾衰竭大鼠主动脉钙化的影响。方法40只SD大鼠随机分为假手术组（S组）、模型组（M组）、尿毒清低剂量组（L组）、尿毒清高剂量组（H组）,每组10只,M、L、H组统称为5/6肾切除组。采用两步法行5/6肾切除建立慢性肾衰竭模型,术后普食喂养4周,尾静脉采血检测血肌酐、尿素氮,并开始给予S组等量0.9%生理盐水灌胃,M组、L组、H组高磷饮食诱导残肾大鼠血管钙化的形成,同时L组按2.6g·kg-1·d-1剂量以尿毒清灌胃,H组按4.2g·kg-1·d-1剂量以尿毒清灌胃。给药10周后,下腔静脉采血检测血钙、血磷、甲状旁腺激素,酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）,HE染色观察大鼠肾脏病理,Von Kossa染色观察血管钙化情况,测定胸主动脉组织钙含量,免疫组化法检测动脉组织核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）和骨保护素（osteoprotegerin,OPG）蛋白的表达,荧光定量PCR法检测动脉组织RANKL和OPG的m RNA表达。结果1大鼠血生化:术后4周,5/6肾切除组血肌酐、尿素氮水平明显高于假手术组（P<0.05）。给药10周后,M组、L组、H组血钙水平均出现不同程度的降低,且明显低于S组（P<0.05）,L组、H组血钙水平较M组升高（P<0.05）,H组血钙水平较L组升高（P<0.05）;M组、L组、H组血磷及甲状旁腺激素水平均出现不同程度的升高,且明显高于S组（P<0.05）,L组、H组血磷及甲状旁腺激素水平较M组降低（P<0.05）,H组血磷及甲状旁腺激素水平较L组降低（P<0.05）。2酶联免疫吸附测定:M组、L组血清IL-6、TNF-α浓度较S组升高（P<0.05）,H组血清TNF-α浓度较S组升高（P<0.05）,H组血清IL-6浓度与S组无明显差异（P>0.05）,L组、H组血清IL-6、TNF-α浓度较M组降低（P<0.05）,H组血清IL-6、TNF-α浓度较L组降低（P<0.05）。3 HE染色:S组肾小球、肾小管及肾间质未见明显异常。M组、L组、H组有不同程度的肾小球硬化,肾小管上皮细胞脱落,肾小管扩张,肾间质有明显炎细胞浸润,肾间质纤维样改变。4 Von Kossa染色:S组未见明显黑色钙盐颗粒沉积。M组可见明显黑色钙盐沉积。L组、H组钙盐沉积数量较M组显着减少,且H组减少程度较为明显。5动脉钙含量检测:M组、L组、H组钙含量较S组升高（P<0.05）,L组、H组钙含量较M组下降（P<0.05）,H组钙含量较L组进一步下降（P<0.05）。6免疫组化染色:M组、L组、H组胸主动脉RANKL的表达较S组上调（P<0.05）,L组、H组RANKL的表达较M组下调（P<0.05）,且H组较L组进一步下调（P<0.05）;M组、L组、H组胸主动脉OPG的表达较S组均下调（P<0.05）,L组、H组OPG的表达较M组上调（P<0.05）,且H组较L组进一步上调（P<0.05）。7荧光定量PCR:M组、L组、H组胸主动脉RANKL m RNA的表达较S组上调（P<0.05）,L组、H组RANKL m RNA的表达较M组下调（P<0.05）,且H组较L组进一步下调（P<0.05）;M组、L组、H组胸主动脉OPG m RNA的表达较S组下调（P<0.05）,L组、H组OPG m RNA的表达较M组上调（P<0.05）,且H组较L组进一步上调（P<0.05）。8相关性分析:PTH与RANKL呈正相关,与OPG呈负相关。TNF-α、IL-6与RANKL呈正相关。结论1尿毒清颗粒可以减轻慢性肾衰竭大鼠主动脉钙化的程度,其作用机制可能与OPG表达上调、RANKL表达下调有关。2随着剂量的增高,尿毒清颗粒对大鼠主动脉钙化的保护作用增强。图3幅;表6个;参111篇。
吴新华,万家溪,刘宏,陈章荣,杨伟,赵秋燕[5]（2021）在《雌激素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导途径对钙诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响》文中研究说明目的研究雌激素对血管平滑肌细胞钙化的影响及机制。方法体外培养大鼠胸大动脉平滑肌细胞（A7r5）,按CaCl2溶液不同时间和浓度梯度进行钙化模型建立。细胞随机分为正常对照组、钙化组、雌激素干预（钙化+雌激素）组、雌激素溶剂对照（钙化+Eth）组、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）信号转导通路拮抗剂干预（钙化+LY294002）组。对不同处理组细胞采用茜素红染色检测钙化结节,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞钙离子浓度及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性;实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测Runx2的m RNA浓度,Western blot检测Runx2及磷酸化（phosphate,p）-Akt的表达水平。结果与正常对照组相比,钙化组A7r5细胞的茜素红染色钙化结节、钙离子浓度、ALP活性、Runx2的mRNA浓度和Runx2、P-Akt蛋白浓度明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）。与钙化组A7r5细胞相比,雌激素干预后明显抑制A7r5细胞钙化（P<0.01）,并降低Runx2、P-Akt蛋白浓度,差异有统计学意义（P<0.05）。结论雌激素可通过抑制A7r5细胞钙化过程中PI3K/Akt信号通路及下游的Runx2表达,从而抑制细胞钙化。
何芳[6]（2021）在《TGF-β1在诱导血管钙化过程中激活Wnt/β-catenin信号通路与COX-2关系的研究》文中研究指明研究背景及目的:慢性肾脏病（Chronic Kidney Disease,CKD）是世界范围内的公共健康问题,给全球带来了严重的经济负担。心血管疾病（Cardiovascular diseases,CVD）是CKD患者最常见的并发症和主要的死因,且随着疾病的进展,心血管事件的发生率和死亡率进一步增加。在CKD中血管钙化极其常见,据报道,血管钙化是CKD患者CVD发生和死亡的独立危险因素,但CKD血管钙化的具体机制还不清楚。研究发现TGF-β1诱导血管钙化的发生发展,我们的前期研究也发现,COX-2参与介导血管钙化这一过程。本研究主要探讨TGF-β1在血管钙化中的作用及其机制,探究COX-2在TGF-β1诱导的血管钙化过程中的作用及其机制,以及评价COX-2抑制剂-美洛昔康对肾衰模型大鼠肾损伤和血管钙化的作用,为临床血管钙化的预防和治疗提供新的靶点,对减少CKD患者心血管事件的发生和死亡以及提高患者生存质量有重要意义。实验方法:1.体外实验（1）原代SD大鼠主动脉VSMCs提取。（2）高磷诱导VSMCs钙化,qPCR和Western Blot检测TGF-β1m RNA和蛋白表达情况以及COX-2和β-catenin、GSK3β、p-GSK3β蛋白水平变化,荧光素酶报告质粒检测高磷对TGF-β1信号的影响。（3）腺病毒TGF-β1处理VSMCs,qPCR和Western Blot检测成骨指标Runx2、OPN以及VSMCs标记α-SMA、SM22αm RNA和蛋白表达情况,同时检测COX-2、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、Sclerostin和c-myc蛋白水平变化;免疫荧光检测β-catenin蛋白表达;茜素红染色检测VSMCs钙化情况;腺病毒TGF-β1处理SD大鼠主动脉环,14d后进行硝酸银染色,检测主动脉环钙化情况。（4）对VSMCs进行如下处理:对照、Ad TGF-β1、NS398（COX2抑制剂）、Ad TGF-β1+NS398,qPCR和Western Blot检测成骨指标Runx2、OPN以及VSMCs标记α-SMA、SM22αm RNA和蛋白表达情况,同时检测β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、Sclerostin蛋白表达情况;对SD大鼠主动脉环做同样处理,14d进行硝酸银染色,检测主动脉环钙化情况。（5）腺病毒TGF-β1处理VSMCs,免疫沉淀（IP）检测p-Smad2/3与p-CREB之间的相互作用;染色质免疫共沉淀（CHIP）检测p-Smad2/3或p-CREB在Sclerostin和β-catenin启动子区域的募集情况。2.体内实验（1）0.75%腺嘌呤饮食诱导SD大鼠肾衰模型;（2）大鼠随机分为6组:对照组（正常饮食6W）,低剂量预防组（0.75%腺嘌呤饮食+1mg/kg美洛昔康6W）,高剂量预防组（0.75%腺嘌呤饮食+6mg/kg美洛昔康6W）,模型组（0.75%腺嘌呤饮食6W）,低剂量治疗组（0.75%腺嘌呤饮食6W后,胃内给药1mg/kg美洛昔康20d）,高剂量治疗组（0.75%腺嘌呤饮食6W后,胃内给药6mg/kg美洛昔康20d）。（3）每个实验终点,处死大鼠,测量体重,收集眼眶静脉血,检测血生化指标:钙（Ca）、磷（Pi）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）,同时ELISA实验检测血清中TGF-β1与COX-2的表达情况;取大鼠肾脏标本做HE染色看肾脏的病理改变情况;取大鼠胸主动脉,Western Blot检测TGF-β1与COX-2蛋白表达情况,硝酸银染色,检测每组大鼠血管的钙化情况。3.临床样本收集（1）收集重庆医科大学附属第一医院肾脏内科CKD患者血液样本,分为2组:CKD非透析患者和CKD透析患者。以下是该研究的纳入和排除标准:纳入标准:KDOQI分期三期及以上即:肾小球路过滤（GFR）≤60ml/（min·1.73m2）;排除标准:（1）有慢性基础疾病;有传染性疾病,如乙型肝炎、梅毒等;（2）长期服用影响骨代谢的药物;（3）严重贫血或有出血性疾病,如:弥漫性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜等;（4）严重心血管疾病;（5）昏迷患者;（6）未经知情同意。特别说明:该研究在进行前均取得各位患者知情同意以及签字后才实施,且已通过重庆医科大学附属第一医院伦理审查委员会审查。（2）清晨空腹安静状态下,透析患者在未透析之前采血;（3）采血前仔细核对病人的姓名、性别、年龄、床号和住院号;（4）采血后在室温下静置2小时,低温（4℃）、3500rmp离心5min,收集血清,并于-80℃保存样本;（5）血生化检测:钙（Ca）、磷（Pi）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）（6）ELISA检测收集血清样本中TGF-β1、COX-2以及Sclerostin的表达情况。（7）本研究开始共计有175里患者参与,经排除标准筛选后共计96例患者入选。结果:1.体外实验结果（1）高磷诱导VSMCs钙化中,TGF-β1的m RNA和蛋白水平上调,以及TGF-β1信号转录活性增强,同时COX2和β-catenin、p-GSK3β蛋白水平上调,GSK3β蛋白水平无改变;（2）TGF-β1能上调VSMCs中Runx2、OPN的m RNA和蛋白水平,下调α-SMA、SM22αm RNA和蛋白水平,TGF-β1能诱导VSMCs和大鼠主动脉环钙化。TGF-β1在诱导VSMCs钙化过程中,上调COX2和β-catenin、p-GSK3β蛋白水平,下调Sclerostion表达,GSK3β蛋白水平无改变;（3）COX-2抑制剂NS398能降低TGFβ对Runx2、OPN表达的上调以及减少TGFβ对α-SMA、SM22αm RNA的下调作用。NS398能减少TGF-β1诱导的VSMCs和大鼠主动脉环钙化。NS398能降低TGFβ上调的β-catenin、p-GSK3βm RNA和蛋白水平,以及增加TGFβ下调的Sclerostion m RNA和蛋白水平。对GSK3β表达水平无改变。（4）IP和CHIP实验结果显示,TGF-β1处理VSMCs后,p-Smad2/3与p-CREB相互作用,p-Smad2/3与p-CREB在Sclerostion或β-catenin的启动子区域募集。2.体内实验结果（1）体重测量结果:与对照组相比,模型组大鼠体重明显下降,而治疗组大鼠体重较模型组有明显改善。（2）血清生化结果:模型组大鼠血清中Ca、Pi、BUN、Scr明显高于对照组,预防组大鼠血清中Ca、Pi、BUN、Scr高于治疗组但都低于模型组。（3）ELISA实验结果显示:模型组大鼠血清中COX-2和TGF-β1蛋白水平高于对照组。（4）HE染色结果显示:对照组大鼠肾脏结构正常,肾小球、肾小管及间质无异常改变;模型组大鼠肾脏病理改变明显:肾小球数量明显减少,肾小管扩张,管内有棕褐色晶体物质沉积,间质区域增宽,间质纤维组织增生,纤维化比较明显;预防组肾脏病理改变较模型组稍微改善一些;而治疗组肾脏病理得到一定程度的改善。（5）大鼠胸主动脉组织检测结果:WB结果显示,与对照组相比,模型组大鼠胸主动脉组织中,COX-2和TGF-β1蛋白水平明显高于对照组;硝酸银染色结果表明,模型组大鼠血管可见明显的钙化,预防组血管钙化改善不明显,治疗组血管钙化得到明显改善。3.临床样本检测结果（1）血清生化的分析结果:所有参与该研究的患者BUN及Scr水平均达到CKD KDOQI 5期,血磷水平明显升高,血钙水平降低。（2）ELISA实验结果:进行血液透析的CKD5期患者血清中COX-2和TGF-β1明显低于非透析CKD5期患者;非透析患者血清中Sclerostin水平明显低于CKD透析患者。结论:1.高磷诱导VSMCs钙化过程中,促进TGF-β1表达并且激活TGF-β1信号。2.TGF-β1可诱导VSMCs成骨分化以及胸主动脉钙化,同时也能促进高磷诱导的VSMCs钙化。3.高磷和TGF-β1在促进VSMCs钙化过程中,激活Wnt/β-catenin信号通路。4.高磷和TGF-β1在促进VSMCs钙化过程中,COX-2表达上调;抑制COX-2后能明显抑制高磷和TGF-β1诱导的VSMCs钙化。5.COX-2参与调节高磷与TGF-β1对Wnt/β-catenin信号通路的激活,抑制COX-2后高磷和TGF-β1激活Wnt/β-catenin信号作用明显减弱。6.在体内大鼠肾衰模型中,COX-2抑制剂-美洛昔康能明显减轻血管钙化,同时肾脏损伤得到一定程度的改善。
连雅君[7]（2021）在《狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究》文中研究表明目的为开发抗骨质疏松症新型药物奠定基础,探索狗骨胶、双膝骨胶宝在治疗骨质疏松症疾病上的作用及相关信号通路,拓宽中医药在动物药材应用上的研究思路和研究方向。研究方法①理论探究:梳理历代中医着作、中医家对骨质疏松症的病机、病因及治疗等方面的文字记载,对中医药治疗骨质疏松症的中医认知及治疗思路做出归纳总结;通过“以形补形、五行生克”及“温肾助阳,活血通经”理论分别探究狗骨胶及双膝骨胶宝二者治疗骨质疏松症中医理论基础,为后续研究提供充分的理论依据。②实验研究:通过超高效的液相色谱质谱联用非靶点代谢组学分析方法对狗骨胶、炒制的狗骨粉进行成分分析及鉴定,比较不同的炮制方法下二者在成分上的差异,对比总结狗骨胶炮制方式的优点及在促吸收和抗骨质疏松症治疗方面的优势;通过比较戊酸雌二醇、狗骨胶、双膝骨胶宝治疗维甲酸骨质疏松症模型雌性大鼠的基础体重,肛温,耳廓局部温度,内脏指数,骨密度,骨矿量,HE染色,MASSON染色的差异进行组间观察,分析狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症药效研究;通过生化分析仪检测血清磷、钙、碱性磷酸酶,尿磷、钙,ELISA法检测血清OC、PN1P、CTX-1,分析狗骨胶、双膝骨胶宝对骨代谢的影响;通过ELISA法检测血清OPG,用WB、PCR法检测RANK、RA NKL、OPG、TRAF6、NF-κB指标在蛋白、mRNA的表达,免疫组化法观察RANKL、OPG的阳性表达,探究狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症在经典机制RANKL/OPG/TR AF6的效果,分析其在经典通路RANK/RANKL/OPG及TRAF6/NF-κB信号通路上的治疗作用,研究狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症内在机制。研究结果①理论研究结果:骨质疏松症疾病是一种符合中医概念骨痿的疾病,病位于肾,牵连肝脾,以阴阳失调为根,古代文献中记载的病机多与肾脏亏损,筋骨萎弱有关,可将肾精亏虚,瘀血阻滞,筋骨萎弱总结为本病的根本病机;骨痿的病因则与外邪风寒湿邪所感、情志失调、先天后天失调等有关。治疗的方法有温补肾阳法、滋补肾阴法、阴阳双补法、脾肾并治滋肾阴化湿痰法,肝肾并治补益肝肾法等。“以骨补骨,五行生克”理论为狗骨胶治疗骨质疏松症疾病的理论基础,双膝骨胶宝的理论基础基于仲景肾气丸加减变化而成,该方应用温肾健脾,活血通经法治疗肾阳虚血瘀类骨质疏松症。②实验研究结果正离子模式下,通过匹配分析筛选差异性成分212种,负离子模式下,筛选并匹配分析出差异性成分125种。正离子模式下,狗骨胶相对表达量偏高的成分有阿普比妥、胆碱、甜菜碱、脯氨酸、L-苯丙氨酸、荆芥内酰胺、新海藻糖、苦参碱、羟脯氨酸等,其中氨基酸6种;负离子模式下,狗骨胶相对表达量偏高的成分有:琥珀酸盐、脯氨酸、腺嘌呤、黄嘌呤、柠檬酸、异丁酮、L-正亮氨酸、肉豆蔻酸、白氨酸、肾上腺酸、次黄嘌呤、硬皮酸、色氨酸等,其中氨基酸4种。经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠的BMD、BMC含量明显下降（P<0.001）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝药物治疗后的BMD、BMC含量明显上升（P<0.01,P<0.001）;HE染色结果表明,骨质疏松症模型大鼠的骨小梁间隙增大（P<0.01）,经双膝骨胶宝药物治疗后骨小梁的数量有所增加（P<0.01）,骨小梁间隙距离呈现明显减少（P<0.05）。骨质疏松症模型大鼠的血清ALP含量显着地升高（P<0.001）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后ALP含量均出现了明显下降（P<0.01,P<0.001）;骨质疏松症模型大鼠血清钙含量降低（P<0.05）,经双膝骨胶宝药物治疗后血清钙含量升高（P<0.05）;骨质疏松症模型大鼠的血清磷含量明显升高（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶的药物治疗后血清磷含量明显降低（P<0.05）;经双膝骨胶宝药物治疗后的骨质疏松症模型大鼠的尿钙含量明显有所下降（P<0.01）,模型大鼠的尿磷含量明显有所上升（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后尿磷含量明显有所下降（P<0.05,P<0.01）;骨质疏松症模型大鼠血清的PN1P含量有所下降（P<0.001）,经过戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后的PN1P含量有所上升（P<0.05）;骨质疏松症模型大鼠的CTX-1含量有所上升（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后CTX-1含量明显有所下降（P<0.05,P<0.01）;骨质疏松症模型大鼠的骨钙素含量明显下降（P<0.01）,经戊酸雌二醇片、双膝骨胶宝的药物治疗后骨钙素含量显着升高（P<0.05,P<0.01）。骨质疏松症模型大鼠的血清OPG含量明显降低（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后血清OPG含量均有明显上升（P<0.01,P<0.001）;经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠的胫骨RANKL、TRAF6、NF-κB1蛋白质含量明显上升（P<0.01,P<0.05）,OPG蛋白质含量明显下降（P<0.001）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨RANKL蛋白质浓度含量有明显减少（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨TRAF6蛋白质的含量明显减少（P<0.001）,大鼠胫骨OPG蛋白质总含量明显升高（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨NF-κB1蛋白含量明显降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）;经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠RANK、RANKL、TRAF6的基因相对表达量含量明显升高（P<0.01）,OPG的基因相对表达量含量明显降低（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANK的基因相对表达量含量显着降低（P<0.01,P<0.05）;经戊酸雌二醇片、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANKL的基因相对表达量明显降低（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后OPG的基因相对表达量明显升高（P<0.01,P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后TRAF6的基因相对表达量明显降低（P<0.05）。免疫组化结果显示骨质疏松症模型大鼠股骨颈中OPG阳性表达量明显降低（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠OPG阳性表达量明显增高（P<0.01,P<0.05）;经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠股骨颈中RANKL阳性表达量明显增高（P<0.001）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANKL阳性表达量明显降低（P<0.001）。结论狗骨胶中相对含量较高的海藻糖、苦参碱、柠檬酸、氨基酸等成分与骨质疏松症相关联,相对含量较高的氨基酸以羟脯氨酸、脯氨酸为主,与骨质疏松症治疗关系密切;狗骨胶中含有的胶束化成分琥珀酸盐、硬脂酸具有增溶效果可促吸收,B族维生素有利于维持维生素的稳定性促进营养物质的吸收。狗骨胶、双膝骨胶宝均可通过调节骨密度水平、骨新陈代谢水平等方式抵抗骨质的流失,可调节RANKL/RANK/OPG信号通路,降低TRAF6含量抑制NF-κB1的炎症反应,通过调控RANKL/OPG/TRAF6信号通路达到抗骨质疏松症疗效。
孙琪[8]（2021）在《狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合大鼠邻近节段椎间盘退变的作用及其机制》文中进行了进一步梳理第一部分大鼠卵巢切除合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变模型的研究目的:本研究拟对卵巢切除（Ovariectomy,OVX）大鼠进行腰椎融合手术（Posterolateral lumbar fusion,PLF）,建立邻近椎间盘退变（Adjacent segmental intervertebral disc degeneration,ASDD）的动物模型。观察腰椎融合后相邻椎体和椎间盘的退变情况,进一步讨论腰椎融合术后ASDD病理情况以及去除卵巢引起雌激素减少对ASDD的影响。方法:将雌性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠40只随机分为以下4组:Sham组（假手术组）、OVX组（双侧卵巢切除组）、PLF组（腰椎融合组）以及OVX+PLF组（卵巢切除合并腰椎融合组）。大鼠3月龄时进行OVX术,术后4周再行PLF术。PLF术是对L4-5节段双侧融合同时将自体髂骨研磨呈颗粒状进行自体骨移植并使用钢丝穿过棘突缠绕,使之得以固定。在PLF术4周后,对行PLF术的动物进行X-ray扫描检查,观察腰椎融合情况并进行影像学评分,随之安乐死动物并取材,保留L3-6节段及其椎间盘。采用手法评估去检测腰椎融合情况,对标本进行微计算机断层扫描技术（Micro-computed tomography,Micro-CT）检测,分离提取L5-6椎间盘及相邻椎体,进行脱钙、包埋、切片,并采用HE染色评估ASDD情况。结果:1融合评估1.1X线检测结果:与OVX+PLF组相比,PLF组L4-5节段新骨形成和影像学密度增加。同时影像学评分结果证实PLF组显着高于OVX+PLF组（P<0.05）。由于Sham与OVX组未行PLF术,故未参与融合评分。1.2手法检测结果:作为检测融合情况的金标准,对PLF和OVX+PLF组行手法检查,发现L4-5节段固定良好,并且缠绕棘突的钢丝完整,未检测到融合节段的活动情况。2 Micro-CT检测结果与Sham组相比,OVX组和OVX+PLF组合大鼠的BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Th均显着降低（P<0.01）,而Tb.Sp显着增加（P<0.05,P<0.01）。然而Sham组与PLF组之间没有显着差异（P>0.05）。DHI评分在Sham组中显着高于OVX组,PLF组和OVX+PLF组（P<0.01）,OVX+PLF组的DHI评分显着低于OVX组和PLF组（P<0.05,P<0.01）,DHI评分在OVX组和PLF组之间未见显着差异（P>0.05）。3组织学检测及评分结果HE染色显示:与Sham组相比,OVX组、PLF组和OVX+PLF组髓核细胞减少且部分发生黏液样退变,纤维环排列紊乱,终板钙化增加,这种变化在OVX+PLF组中表现的尤为明显。组织学评分结果显示:与Sham组相比,OVX组、PLF组和OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05）,与OVX组和PLF组相比,OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05,P<0.05）,然而OVX组与OVX+PLF组之间无显着差异（P>0.05）。第二部分狄诺塞麦对卵巢切除大鼠合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变的作用目的:本研究拟对卵巢切除合并腰椎融合术诱导邻近节段椎间盘退变模型给予狄诺塞麦（Denosumab,Dmab）进行干预,从而观察Dmab对ASDD的作用。方法:将雌性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠60只随机分为以下5组:Sham组、OVX组、PLF组以及OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组,对大鼠分别行假手术（Sham组）,双侧卵巢切除（OVX组）,腰椎融合（PLF组）,卵巢切除合并腰椎融合（OVX+PLF组）和卵巢切除合并腰椎融合Dmab干预（OVX+PLF+Dmab组）。腰椎融合术72小时后,OVX+PLF+Dmab组大鼠经皮下注射给予Dmab治疗干预,剂量为0.25mg/kg/day,一周五天,其余各组大鼠经皮下注射给予等体积的生理盐水。在Dmab干预4周后对大鼠行安乐死并取材,保留L3-6节段及其椎间盘,同时采用手法评估去检测腰椎融合情况,随之行Micro-CT检测,提取L3-4椎间盘的m RNA行RT-PCR检测基质金属蛋白酶-13（Matrix metalloproteinase-3,MMP-13）、聚集蛋白聚糖（Aggrecan,Agg）和血小板型金属蛋白酶4（A sidintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS-4）m RNA的表达水平,将L5-6椎间盘及相邻椎体分离提取,并进行脱钙、包埋、切片。对L5-6椎间盘分别进行免疫组织化学染色检测MMP-13、Agg和ADAMTS-4的蛋白表达水平。结果:1手法检测:对PLF组、OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组行手法检查,发现L4-5节段固定良好并且缠绕棘突的钢丝牢固完整,未检测到融合节段的活动情况。2 Micro-CT检测结果与Sham组相比,OVX组和OVX+PLF组合大鼠的BMD、BV/TV、和Tb.N均显着降低（P<0.01）,而Tb.Sp均显着增加（P<0.05,P<0.01）。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组BMD、BV/TV和Tb.N均显着增加（P<0.01）,而Tb.Sp显着降低（P<0.01）。然而Sham组与PLF组之间没有显着差异（P>0.05）。3免疫组织化学染色与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4（P<0.05,P<0.05,P<0.01）蛋白表达水平均增高而Agg（P<0.01）蛋白表达均降低。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4（P<0.01）蛋白表达水平均显着降低而Agg（P<0.01）蛋白表达均显着增高。4 RT-PCR检测与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4 m RNA（P<0.01）表达水平显着增高而Agg m RNA表达显着降低（P<0.01）。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4 m RNA（P<0.01）表达水平显着降低而Agg（P<0.01）蛋白表达显着增高。第三部分狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合诱发相邻节段椎间盘退变作用机制的研究目的:本研究基于Dmab可以延缓卵巢切除大鼠合并腰椎融合后邻近节段椎间盘退变,然而其作用机制尚未研究,拟应用卵巢切除合并腰椎融合诱导邻近节段椎间盘退变模型,早期经皮下注射给予Dmab干预,进一步探讨Dmab对卵巢切除合并腰椎融合后大鼠邻近节段椎间盘退变的作用机制。方法:将雌性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠60只随机分为以下5组:Sham组、OVX组、PLF组以及OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组,对大鼠分别行假手术（Sham组）,双侧卵巢切除（OVX组）,腰椎融合（PLF组）,卵巢切除合并腰椎融合（OVX+PLF组）和卵巢切除合并腰椎融合Dmab干预（OVX+PLF+Dmab组）。腰椎融合术72小时后,OVX+PLF+Dmab组大鼠经皮下注射给予Dmab治疗干预,剂量为0.25mg/kg/day,一周五天,其余各组大鼠经皮下注射给予等体积的生理盐水。在Dmab干预4周后,安乐死动物并取材,保留L3-6节段及其椎间盘,Micro-CT分析L6椎体终板结构的变化,同时采用手法评估去检测腰椎融合情况。置于10%福尔马林溶液中固定保存,然后对标本进行脱钙、包埋、切片。对L5-6椎间盘进行免疫组织化学染色检测SOX-9（Sry related HMG box-9,SOX-9）和CD24（Cluster of differentiation 24,CD24）,番红O固绿染色染色评估ASDD情况。对L6椎体进行压缩试验检测椎体生物力学参数的变化。结果:1融合评估手法检测结果:对行腰椎融合的所有动物（PLF组、OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组）进行手法检查,结果证实大鼠L4-5节段固定良好并且缠绕棘突的钢丝完整。均未检测到融合节段存在活动情况。2 L5-6终板检测在Sham组中可以观察到完整的终板结构,骨质结构相对紧密,在OVX组、PLF组和OVX+PLF组中发现终板存在不同程度骨质丢失的情况,同时发现终板上存不同程度的空隙,然而在OVX+PLF+Dmab中上述情况得以显着改善。分析结果证实,与Sham组相比,OVX组和OVX+PLF组中大鼠终板的Po.N均降低（P<0.05,P<0.01）,而Po（op）（P<0.05,P<0.01）和Po.V（tot）（P<0.01）显着增高。然而再给予Dmab治疗后,与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中大鼠终板的Po.N均显着增高（P<0.01）,而Po（op）和Po.V（tot）均显着降低（P<0.01）。3组织学检测及评分结果番红O固绿染色显示,Sham组髓核内充大量的脊索细胞和细胞外基质,终板结构完整有大量的软骨细胞,纤维环排列整齐有序,然而与之相反,OVX组、PLF组和OVX+PLF组髓核内脊索细胞及围绕脊索细胞的细胞外基质显着减少并且部分发生黏液样退变,终板钙化严重伴有新骨形成,纤维环稀疏紊乱。上述退变情况在OVX+PLF组中表现的更加突出。然而,在给予Dmab干预后上述变化被显着抑制。组织学评分结果显示,与Sham组相比,OVX组、PLF组和OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05）,与PLF组相比,OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05）,然而OVX组与OVX+PLF组之间无显着差异（P>0.05）。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组评分显着降低（P<0.05）。4生物力学检测椎体压缩实验证实,与Sham组相比,在OVX组、PLF组和OVX+PLF组椎体极限应力（Maximum stress）、弹性模量（Elastic modulus）、极限负荷（Maximum load）及屈服应力（Yield stress）均显着降低（P<0.01）。这些变化在OVX+PLF组中表现的更为明显,然而与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组极限应力、弹性模量、极限负荷及屈服应力均显着增加（P<0.01）。5免疫组织化学染色与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组大鼠髓核中SOX-9的表达水平均显着增高（P<0.01）。与OVX组和PLF组相比,OVX+PLF组中SOX-9的表达水平均显着增高（P<0.01）。然而,与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中SOX-9表达水平显着降低（P<0.01）。与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组大鼠髓核中CD24的表达水平均显着降低（P<0.01）。与OVX组和PLF组相比,OVX+PLF组中CD24的表达水平均降低（P<0.05）。然而,与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中CD24表达水平显着增高（P<0.01）。结论:1.切除卵巢大鼠行自体髂骨移植横突间合并棘突钢丝固定的腰椎融合术可以导致ASDD的发生。该模型对阐述ASDD病理改变以及后续治疗干预提供较好的动物模型基础。2.雌激素减少诱发的骨质疏松加重ASDD,提示在腰椎融合术后邻近节段椎间盘退变的病理进展中骨质疏松是一种重要的危险因素。在卵巢切除合并腰椎融合后相邻节段椎间盘退变动物模型中,早期给予Dmab药物干预可以改善椎体骨质疏松,延缓终板软骨的骨化,维持椎体骨密度和保持骨小梁结构的完整性,提示Dmab是防治ASDD的一种潜在性药物。3.Dmab不仅可以有效维持椎体的骨密度,还能通过促进成骨形成来改善椎体和终板骨小梁微结构维持椎体生物力学的性能,同时保护椎间盘结构功能的完整性,进而延缓ASDD的病理改变。
孟庆海[9]（2021）在《泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化的机制研究》文中研究说明目的:探究绝经后女性雌激素受体下调、肠道菌群变化及绝经后血管损伤之间的相关性,探究泽泻醇B乙酸酯能否通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化并探索其可能机制。方法:第一章:收集接受主动脉置换术的绝经前（<45岁）和绝经后（>55岁）女性主动脉血管及绝经前（<45岁）正常女性和绝经后（>55岁）冠心病女性患者粪便。16SrRNA基因高通量测序分析女性粪便中的肠道菌群,HE染色观察女性主动脉血管的病理变化,透射电镜观察女性血管中的超微结构变化,免疫组化染色检测女性血管中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K 和 p-AKT 的表达。分析绝经前后女性主动脉炎症、雌激素受体表达及肠道菌群组成的相关性。第二章:使用LDLR-/-小鼠合并高脂饮食复制动脉粥样硬化模型,对动脉粥样硬化模型小鼠进行双侧卵巢切除复制绝经后动脉粥样硬化模型（模型组）,同时设置C57BL/6正常饮食和高脂饮食组以及LDLR-/-小鼠正常饮食组。对绝经后动脉粥样硬化模型小鼠分别进行AB23A治疗实验、粪菌移植实验及AB23A与抗生素联合应用实验。实验周期结束后,使用生化试剂盒检测小鼠血清中TC、TG、LDL-c及HDL-c 水平以评价血脂,ELISA试剂盒检测小鼠血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平以评价血清炎症,油红O染色检测小鼠主动脉及主动脉根部切片中阳性面积以评价动脉粥样硬化损伤,Masson染色检测小鼠主动脉根部切片中胶原以评价纤维帽面积,免疫组织化学染色检测小鼠主动脉根部切片及结肠中NLRP3和IL-1β的表达水平以评价组织炎症,HE染色检测小鼠结肠组织形态以评价组织病理损伤,免疫组织荧光染色检测小鼠结肠中Claudin-1、Occludin和ZO-1的表达水平以评价紧密连接的状态,蛋白印迹法检测小鼠结肠组织中NLRP3、IL-1β、Claudin-1、Occludin和ZO-1的蛋白表达水平以进一步确认结肠中炎症和紧密连接状态。16SrRNA基因高通量测序分析小鼠粪便中肠道菌群。分析AB23A模型小鼠治疗实验中小鼠动脉粥样硬化相关症状、肠道菌群及紧密连接之间相关性。第三章:对绝经后动脉粥样硬化模型小鼠进行AB23A治疗实验。实验周期结束后,使用ELISA试剂盒检测小鼠血清中雌激素水平,免疫组织化学染色检测小鼠结肠中ERα、ERβ、GPER和SRC的表达水平,免疫组织荧光染色检测小鼠结肠中PI3K和p-AKT的表达水平,蛋白印迹法检测小鼠结肠组织中ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平。应用胆固醇负荷的Caco-2细胞复制肠道上皮细胞损伤模型,使用AB23A并联合ERα抑制剂MPP、ERβ抑制剂PHTPP、GPER抑制剂G-15、PI3K抑制剂LY294002或AKT抑制剂10-DEBC抑制相应蛋白,或联合ERα siRNA、ERβ siRNA、GPER siRNA或SRC siRNA沉默相应基因的表达,作用于Caco-2细胞,并建立不同的对照和分组。MTT法检测细胞活性,油红O染色评价细胞脂质堆积,免疫荧光法检测细胞中 SRC、ERα、ERβ、GPER、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin 及 ZO-1 单独或共同表达的情况,蛋白印迹法检测细胞中SRC、ERα、ERβ、GPER、NLRP3、IL-1β、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin、ZO-1的蛋白表达情况,免疫共沉淀法检测细胞中GPER与SRC的相互作用。结果:第一章:与绝经前女性相比,绝经后女性血管内皮层和平滑肌均呈现更严重的损伤及 NLRP3、Caspase-1、IL-1β 表达的升高,而 ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K 和 AKT的表达均显着降低。与正常绝经期女性相比,绝经后冠心病女性粪便中肠道菌群的物种丰度和物种多样性显着降低;特定水平的物种相对丰度变化显着,如门水平上,Firmicutes、Tenericutes及Fusobacteria等细菌门的相对水平在绝经后女性的粪便中显着降低,而Verrucomicrobia及Bacteroidetes等细菌门的相对水平显着升高,属水平上,Clostridium 及Faecalibacterium等细菌属的相对水平显着降低,而 Shigella、Lactobacillus及Bacteroides等细菌属的相对水平显着升高。相关性分析显示绝经前后女性主动脉炎症、雌激素受体表达及肠道菌群组成之间具有显着的相关性。第二章:与动脉粥样硬化小鼠相比,绝经后动脉粥样硬化小鼠血脂、血清炎症水平和动脉粥样硬化损伤进一步增加,并导致结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化的加剧,AB23A的治疗显着降低模型小鼠血脂、血清炎症水平和动脉粥样硬化损伤,并显着减轻结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化;与动脉粥样硬化小鼠相比,绝经后动脉粥样硬化小鼠的肠道菌群的丰度和多样性显着降低,且特定物种水平上相对丰度发生显着改变,AB23A的治疗显着增加模型小鼠肠道菌群的丰度和多样性,并逆转模型小鼠特定物种水平上相对丰度的变化,如AB23A的治疗显着增加模型小鼠粪便内降低的Firmicutes细菌门的相对水平,显着降低模型小鼠粪便内升高的Verrucomicrobia细菌门的相对水平,在属水平上,AB23A的治疗显着降低模型小鼠的粪便中Bacteroides和Akkermansia等细菌属的相对水平;相关性分析显示小鼠的动脉粥样硬化相关症状、肠道菌群组成及紧密连接之间呈现显着相关性。粪菌移植导致模型小鼠肠道菌群丰度、多样性和特定物种水平上相对丰度向供体小鼠靠近;接受模型组小鼠粪便的受体小鼠的肠道菌群丰度和多样性显着低于接受AB23A治疗组粪便的受体小鼠,具有同样变化的还包括特定物种水平上的相对丰度;改变模型小鼠肠道菌群结构足以引起血脂、血清炎症和动脉粥样硬化症状以及结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化显着改变,与接受模型组小鼠粪便的受体小鼠相比,接受AB23A治疗组粪便的受体小鼠的血脂、血清炎症和动脉粥样硬化损伤显着降低,结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化显着减轻。抗生素显着抑制各组小鼠肠道菌群的丰度和多样性;给予抗生素的模型组小鼠中,总胆固醇水平、血清炎症和动脉粥样硬化症状显着降低,结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化显着减轻;AB23A对给予抗生素的模型组小鼠的治疗仍促进了肠道菌群的丰度和多样性;抗生素的应用,增强了 AB23A对模型小鼠血脂、血清炎症和动脉粥样硬化损伤的降低作用及对结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化的减轻作用。第三章:双侧卵巢的切除,导致高脂饮食LDLR-/-小鼠雌激素受体、雌激素水平及SRC表达的显着降低,同时显着降低的还有PI3K/AKT信号,AB23A未影响模型小鼠雌激素水平,但显着上调肠道中雌激素受体和SRC的表达,并上调PI3K/AKT信号。胆固醇的负荷导致Caco-2细胞中胆固醇堆积、炎症增加和紧密连接损伤;AB23A减轻胆固醇作用的Caco-2细胞中胆固醇堆积、炎症和紧密连接损伤,上调SRC的表达并增强PI3K/AKT信号。使用ERα或ERβ的抑制剂或ERα或ERβ的基因被沉默时,未影响AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用,也未影响AB23A对GPER和SRC的上调作用,同样未影响AB23A对PI3K/AKT信号的激活;使用GPER抑制剂或GPER siRNA时,AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用被取消,同时被取消的还包括AB23A对SRC的上调作用和对PI3K/AKT信号的激活。SRC的基因被沉默时,AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用被取消,AB23A对PI3K/AKT信号的激活作用同样被取消,但未影响AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞雌激素受体表达的上调作用。PI3K/AKT信号被阻断时,AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用被取消;但是PI3K/AKT信号的抑制未影响AB23A对雌激素受体和SRC的上调作用。结论:1.绝经后女性血管炎症和损伤的增加与雌激素受体信号降低及肠道菌群的紊乱具有显着的相关性。2.AB23A可通过调节肠道菌群减轻绝经后LDLR-/-小鼠肠道炎症并保护肠屏障,进而降低绝经后小鼠的血脂、血清炎症及血管炎症,抑制绝经后小鼠动脉粥样硬化的发生发展。3.AB23A通过激活结肠上皮细胞GPER上调SRC表达并激活下游的PI3K/AKT信号进而抑制结肠上皮细胞炎症和紧密连接损伤是其抑制绝经后小鼠动脉粥样硬化发生发展的机制之一。
顾建忠[10]（2021）在《广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性及山茶籽对绝经后骨质疏松症的影响》文中指出目的:探讨广西壮族自治区中少数民族瑶族绝经后妇女的雌激素受体-α基因分布,了解雌激素受体-α基因多态性与瑶族妇女骨质疏松的关系;确定山茶籽提取物对骨质疏松症的影响。方法1广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性对绝经后骨质疏松症的影响选取广西地区,瑶族妇女,612例,取5ml血液样本,DNA提取试剂盒进行DNA的提取,碱性磷酸酶试剂盒检测血液样本的碱性磷酸酶,超声骨密度仪检测患者跟骨骨密度,用酶联免疫吸附法检测雌激素。方法2山茶籽对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响将5月龄,96只雌性大鼠,分为4组,分别为去卵巢组（OVX）,假手术组（Sham）,山茶籽提取物组（Ts）,苯甲酸雌二醇组（E2）。分别在第4、8、12、16周各取六只,麻醉后,对大鼠股骨取材,进行HE染色,测量骨钙,骨磷,骨密度以及相应的雌激素。结果:（1）与其他四个基因比较,60岁之后P基因组的碱性磷酸酶升高,骨密度降低,黄体生成素和促卵泡激素升高,雌二醇和孕酮降低（P<0.05）;与其他四个基因比较,65岁之后Xx基因组的碱性磷酸酶降低,骨密度提高,黄体生成素和促卵泡激素降低,雌二醇和孕酮升高（P<0.05）。（2）去卵巢组的镜下骨组织疏松,骨钙、骨磷、血清护骨素和骨密度低于其他3组（P<0.05）,山茶籽提取物组的骨钙、骨磷、血清护骨素和骨密度与假手术组和雌二醇组无显着差异（P>0.05）。去卵巢组与其他三组比较,血清黄体生成素和促卵泡激素明显升高,雌二醇和孕酮明显降低（P﹤0.05）。山茶籽提取物组的黄体生成素,促卵泡激素,雌二醇和孕酮与假手术组和雌二醇组无显着差异（P>0.05）。结论:（1）绝经后妇女含P基因易患绝经后骨质疏松症,应提前预防;含Xx基因的妇女骨密度高,不易患绝经后骨质疏松症。（2）山茶籽提取物可以提高骨密度以及雌二醇,山茶籽提取物可以用来治疗骨质疏松症。
二、雌激素减轻大鼠血管钙化的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、雌激素减轻大鼠血管钙化的实验研究（论文提纲范文）
（1）基于“阳化气，阴成形”理论研究TGF-β1/Smads影响黄韧带肥厚的机制及模型的建立（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 黄韧带肥厚的机制及动物模型建立的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 TGF-β1/Smads信号通路与纤维化 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 基于“阳化气,阴成形”理论研究IL-1β、TNF-α和TGF-β1/Smads在LFH中的表达及相关性 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 标本收集 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 影像学测量 |
| 1.4 主要器械、设备、试剂等 |
| 1.5 手术方式 |
| 1.6 标本的取材、运输等标准操作规程 |
| 1.7 HE染色与组织形态学观察 |
| 1.8 Masson染色与纤维化观察 |
| 1.9 免疫组化法检测两组黄初带IL-lp、TNF-α、TGF-β1/Smads (TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7)、Col1和Col3蛋白的定位、半定量表达 |
| 1.10 实时焚光聚合酶链式反应（Real-Time PCR)检测IL-1β、TNF-α、TGF-β1/Smads (TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7)、Col1、Col3&mRNA表达 |
| 1.11 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 HE染色结果 |
| 2.3 Masson染色结果 |
| 2.4 免疫组化结果 |
| 2.5 Real-Time PCR结果 |
| 2.6 DLSS组内黄韧带厚度和各层纤维化分级的相关性分析 |
| 2.7 DLSS组内黄韧带厚度和各层弹性-胶原纤维比的相关性分析 |
| 2.8 DLSS组内黄韧带厚度和各层mRNA表达的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 炎症与纤维化是黄韧带肥厚的主要病理机制 |
| 3.2 黄韧带背侧层是退变的起点 |
| 3.3 基于“阳化气,阴成形”理论探讨黄韧带“炎症-纤维化”病理过程 |
| 3.4 基于“阳化气,阴成形”理论探讨DLSS的中医药治疗 |
| 3.5 其他 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于三种造模方法诱导大鼠黄韧带肥厚动物模型的建立与评价 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要器械、设备、试剂等 |
| 1.3 实验动物的分组与取材 |
| 1.4 实验动物的造模 |
| 1.5 影像学测量 |
| 1.6 HE染色与大鼠黄韧带厚度的测量 |
| 1.7 Masson染色与大鼠黄韧带纤维化观察 |
| 1.8 免疫组化法检测各组黄初带IL-1β、TNF-α、TGF-β1/Smads (TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7)、Col1、Col3蛋白的定位、半定量表达 |
| 1.9 免疫印迹法定性、半定量分析IL-1β、TNF-α、TGF-β1和Coll蛋白在各组黄韧带内表达 |
| 1.10 Real-Time PCR检测 IL-1β、TNF-α、TGF-β1/Smads (TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7)、Col1、Col3的mRNA表达 |
| 1.11 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 HE染色与大鼠黄韧带厚度的结果 |
| 2.2 Masson染色与大鼠黄韧带纤维化的结果 |
| 2.3 影像学测量结果 |
| 2.4 免疫组化结果 |
| 2.5 免疫印迹结果 |
| 2.6 Real-Time PCR结果 |
| 2.7 大鼠黄韧带与人增厚黄韧带的比较 |
| 2.8 模型成功率 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大鼠黄韧带肥厚模型的建立方法 |
| 3.2 大鼠黄韧带肥厚的病理表现 |
| 3.3 机械应力是诱发或加速黄韧带肥厚的重要因素 |
| 3.4 基于“阳化气,阴成形”理论探讨大鼠黄韧带增厚模型的建立 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）西洋参丹参配伍调控PI3K/Akt/NF-κB通路稳定动脉粥样硬化易损斑块的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 西洋参丹参治疗动脉粥样硬化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 PI3K/Akt/NF-κB信号通路在动脉粥样硬化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 益气活血养阴方药治疗冠心病心绞痛的系统评价研究 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 1 文献筛选结果 |
| 2 纳入研究的基本特征 |
| 3 纳入文献质量 |
| 4 Meta分析结果 |
| 5 敏感性分析 |
| 6 发表偏倚分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于网络药理学探讨西洋参丹参配伍治疗冠心病的作用机制 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 1 药物活性成分和相关靶点的获取 |
| 2 冠心病相关靶点的获取 |
| 3 药物和疾病交集靶点的获取 |
| 4 蛋白质互作网络构建和关键靶点获取 |
| 5 靶点通路富集分析及可视化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 西洋参丹参有效部位的制备及高效液相色谱法成分含量测定 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 药材质量检测 |
| 2 有效部位含量测定 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 西洋参丹参配伍干预ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 一般情况 |
| 2 主动脉粥样硬化斑块病理学检测 |
| 3 西洋参丹参对ApoE~(-/-)小鼠血脂水平的影响 |
| 4 西洋参丹参对ApoE~(-/-)小鼠IL-1β、TNF-α和ICAM-1水平的影响 |
| 5 西洋参丹参对ApoE~(-/-)小鼠NO和ET-1水平的影响 |
| 6 西洋参丹参对ApoE~(-/-)小鼠SOD和MDA含量的影响 |
| 7 西洋参丹参对ApoE~(-/-)小鼠主动脉MMP-9蛋白表达的影响 |
| 8 西洋参丹参对ApoE~(-/-)小鼠主动脉p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 西洋参丹参配伍干预ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 西洋参丹参对内皮细胞活性的影响 |
| 2 西洋参丹参对ox-LDL损伤内皮细胞活性的影响 |
| 3 西洋参丹参对ox-LDL损伤内皮细胞ICAM-1、MMP-9的影响 |
| 4 西洋参丹参对ox-LDL损伤内皮细胞SOD和MDA含量的影响 |
| 5 西洋参丹参对ox-LDL损伤内皮细胞p-PI3K、p-Akt和p-NF-κB蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（3）电针对骨质疏松骨关节炎共病大鼠膝关节影响的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 流行病学 |
| 一、骨质疏松 |
| 二、骨关节炎 |
| 三、骨质疏松与骨关节炎共病 |
| 第二节 骨质疏松与骨关节炎共病的机制讨论 |
| 一、从病理特点分析 |
| 二、从生化水平分析 |
| 三、从激素水平分析 |
| 四、从蛋白组学分析 |
| 五、从基因相关性的研究分析 |
| 第三节 诊断依据 |
| 一、西医诊断依据 |
| 二、中医诊断依据及证候分类 |
| 第四节 中医病因病机分析 |
| 一、骨质疏松的病因病机 |
| 二、骨关节炎的病因病机 |
| 三、骨质疏松与骨关节炎共病的病因病机 |
| 第五节 治疗 |
| 一、西医治疗 |
| 二、中医治疗 |
| 第六节 骨质疏松与骨关节炎共病动物模型的建立 |
| 一、骨质疏松造模实验动物的选择 |
| 二、骨关节炎造模实验动物的选择 |
| 三、骨质疏松与骨关节炎共病的造模方式的选择 |
| 四、本研究实验动物及造模方式的选择 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 背景与目的 |
| 第二节 材料和方法 |
| 一、材料与设备 |
| 二、方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校其间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（4）尿毒清对慢性肾衰竭大鼠主动脉钙化的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要实验仪器 |
| 1.1.3 主要试剂与药品 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.1.5 标本采集 |
| 1.1.6 检测指标与方法 |
| 1.1.7 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 术后大鼠状态及存活情况 |
| 1.2.2 假手术组与5/6肾切除组大鼠肾功能指标比较 |
| 1.2.3 四组大鼠肾脏病理比较 |
| 1.2.4 四组大鼠血钙、血磷、甲状旁腺激素指标比较 |
| 1.2.5 四组大鼠血清TNF-α、IL-6浓度结果比较 |
| 1.2.6 四组大鼠主动脉钙盐沉积情况比较 |
| 1.2.7 四组大鼠主动脉钙定量检测结果比较 |
| 1.2.8 四组大鼠主动脉RANKL、OPG的表达水平比较 |
| 1.2.9 四组大鼠主动脉RANKL、OPG的mRNA表达水平比较 |
| 1.2.10 PTH、TNF-α、IL-6与RANKL、OPG表达的相关性分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 实验动物及慢性肾衰竭血管钙化造模方法的选择 |
| 1.3.2 慢性脏病血管钙化的发病机制 |
| 1.3.3 尿毒清颗粒对慢性肾衰竭血管钙化的影响 |
| 1.3.4 实验不足之处 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第2章 综述 慢性肾脏病血管钙化的研究进展 |
| 2.1 RANK/RANKL/OPG系统与血管钙化 |
| 2.1.1 RANK/RANKL/OPG系统成员概述 |
| 2.1.2 RANK/RANKL/OPG系统的作用原理 |
| 2.1.3 RANK/RANKL/OPG系统与慢性肾脏病血管钙化 |
| 2.2 慢性肾脏病致血管钙化的治疗手段 |
| 2.2.1 低磷饮食 |
| 2.2.2 充分透析 |
| 2.2.3 继发性甲状旁腺功能亢进的治疗 |
| 2.2.4 磷结合剂 |
| 2.2.5 拟钙剂 |
| 2.2.6 活性维生素D |
| 2.2.7 维生素K |
| 2.2.8 镁 |
| 2.2.9 焦磷酸盐类似物 |
| 2.2.10 硫代硫酸钠 |
| 2.2.11 人甲状旁腺激素 |
| 2.2.12 中药 |
| 2.3 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（6）TGF-β1在诱导血管钙化过程中激活Wnt/β-catenin信号通路与COX-2关系的研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 TGF-β1 诱导VSMCs钙化过程中与Wnt/β-catenin信号通路关系的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 COX-2在TGF-β1 诱导VSMCs钙化中的作用及其机制的研究 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 体内抑制COX-2 对慢性肾衰所致血管钙化和肾损伤作用的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 慢性肾脏病血管钙化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录 |
（7）狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一: 动物药狗骨在中医领域的历史沿革与应用 |
| 1. 从狗的历史文化到药用价值 |
| 2. 狗骨的药用历史沿革进展 |
| 3. 讨论 |
| 4. 参考文献 |
| 综述二: 狗骨胶及其相关复方治疗骨质疏松症现代研究及进展 |
| 1. 狗骨(胶)成分、药理基础研究 |
| 2. 狗骨不同剂型的现代研究及应用 |
| 3. 狗骨胶不同剂型的现代研究及应用 |
| 4. 讨论 |
| 5. 参考文献 |
| 综述三: 含胶类复方治疗骨科类疾病常用药物的配伍规律研究 |
| 1. 资料来源及方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 参考文献 |
| 综述四: 骨质疏松症发病机理及RANKL/OPG/TRAF6相关机制研究进展 |
| 1. 骨质疏松症疾病的患病率 |
| 2. 骨质疏松症发病与骨代谢关联性 |
| 3. 骨质疏松症RANK/RANKL/OPG通路研究进展 |
| 4. 骨质疏松症与RANKL/OPG/TRAF6信号通路的相关研究进展 |
| 5. 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分: 理论研究 |
| 理论研究一: 中医古籍文献对骨质疏松症的理论认知 |
| 1. 骨痿的病机:虚实夹杂,骨枯髓减 |
| 2. 骨痿的病因:年老体衰,诸多病因 |
| 3. 骨痿的治疗:补益肾气,滋补阴阳 |
| 4. 小结 |
| 理论研究二: 基于“以形补形、五行生克”理论探究狗骨胶治疗骨质疏松症的理论基础 |
| 1. 对“以形补形”理论应“不拘于泥,师于古,异中求同” |
| 2. 从“五行生克”探虎骨、狗骨抗骨质疏松症之理 |
| 3. 骨胶常见用于治疗骨痿 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 理论研究三: 双膝骨胶宝基于“温肾助阳,活血通经”法治疗骨质疏松症的理论探讨 |
| 1. 双膝骨胶宝组成药物抗骨质疏松症理论探究 |
| 2. 双膝骨胶宝整体方剂配伍特点 |
| 3. 小结 |
| 第二部分: 实验研究 |
| 实验一: 基于UHPLC-QE-MS技术的非靶标代谢组学探究狗骨胶、狗骨粉成分差异分析 |
| 1. 试剂及仪器 |
| 2. 实验流程 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验二: 狗骨胶、双膝骨胶宝治疗维甲酸骨质疏松大鼠抗骨质疏松症疗效观察 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验三: 狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症之骨代谢影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验四: 狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 结语与展望 |
| 一、中医理论研究结果显示 |
| 二、实验研究结果显示 |
| 三、创新性 |
| 四、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合大鼠邻近节段椎间盘退变的作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 大鼠卵巢切除合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变模型的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 狄诺塞麦对卵巢切除大鼠合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合诱发相邻节段椎间盘退变作用机制的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 椎间盘退变的病因和再生治疗相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 一、女性绝经后动脉粥样硬化的预防与治疗是全球范围内亟待解决的问题 |
| 二、绝经后及动脉粥样硬化时肠道菌群发生显着变化,调节肠道菌群可能是防治女性绝经后动脉粥样硬化的有效途径 |
| 三、肠道炎症导致肠屏障的破坏并加速动脉粥样硬化的发展 |
| 四、雌激素受体信号的降低促进肠屏障中肠道上皮细胞间紧密连接的损伤 |
| 五、泽泻醇B乙酸酯可能通过调节肠道雌激素受体和肠道菌群增强肠屏障发挥抗绝经后动脉粥样硬化的作用 |
| 六、研究的目的与意义及科学假说的提出 |
| 第一章 绝经后和非绝经期女性主动脉血管病变、血管内雌激素受体信号及肠道菌群异同的比较分析 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 临床样本的采集 |
| 1.1.2 试剂与耗材 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 人类女性肠道菌群的检测 |
| 1.2.2 人类女性主动脉血管HE染色 |
| 1.2.3 人类女性主动脉血管透射电镜的检测 |
| 1.2.4 人类女性主动脉血管免疫化学染色 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 绝经后女性主动脉血管呈现高度的损伤与炎症 |
| 1.3.2 绝经后女性主动脉血管中激素受体和SRC的表达以及PI3K/AKT信号显着降低 |
| 1.3.3 非绝经期女性及绝经后女性肠道菌群组成异同的分析 |
| 1.3.4 绝经前后女性主动脉炎症、雌激素受体表达及肠道菌群组成的相关性分析 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群抑制肠道炎症保护肠屏障抗绝经后动脉粥样硬化 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 药物、试剂与耗材 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 绝经后动脉粥样硬化小鼠模型的复制、分组及给药 |
| 2.2.2 小鼠一般情况观察 |
| 2.2.3 小鼠血脂水平的检测 |
| 2.2.4 小鼠血清炎症因子水平的检测 |
| 2.2.5 小鼠主动脉油红O染色 |
| 2.2.6 小鼠主动脉根部切片的油红O染色、Masson染色及免疫组织化学染色 |
| 2.2.7 小鼠结肠组织的HE染色、免疫组织化学染色及免疫组织荧光染色 |
| 2.2.8 小鼠结肠组织蛋白印迹检测 |
| 2.2.9 小鼠肠道菌群的检测 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 AB23A改善绝经后动脉粥样硬化小鼠的血脂紊乱、炎症及血管损伤 |
| 2.3.2 AB23A减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠的肠道炎症并改善肠道紧密连接 |
| 2.3.3 AB23A调节绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道菌群结构 |
| 2.3.4 小鼠动脉粥样硬化相关症状、肠道菌群变化及紧密连接呈现显着相关性 |
| 2.3.5 粪菌移植改变绝经后动脉粥样硬化小鼠的肠道菌群结构 |
| 2.3.6 调节菌群结构减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠血脂紊乱、炎症及血管损伤 |
| 2.3.7 调节菌群结构减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道炎症并改善肠道紧密连接 |
| 2.3.8 抗生素抑制小鼠肠道菌群但未取消AB23A对绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道菌群组成的调节作用 |
| 2.3.9 抗生素减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠的损伤,增强AB23A对绝经后动脉粥样硬化小鼠的治疗作用 |
| 2.3.10 抗生素增强AB23A对绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道炎症的抑制作用及对肠屏障的保护作用 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 泽泻醇B乙酸酯激活结肠上皮GPER/SRC及PI3K/AKT信号保护肠屏障抗绝经后动脉粥样硬化 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 细胞系 |
| 3.1.3 药物与试剂 |
| 3.1.4 仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 绝经后动脉粥样硬化小鼠模型的复制、分组及给药 |
| 3.2.2 小鼠血清雌激素水平的检测 |
| 3.2.3 小鼠结肠组织免疫组织化学染色及免疫组织荧光染色 |
| 3.2.4 小鼠结肠组织蛋白印迹检测 |
| 3.2.5 Caco-2细胞的培养 |
| 3.2.6 Caco-2细胞的分组及干预方式 |
| 3.2.7 MTT检测Caco-2细胞活性 |
| 3.2.8 Caco-2细胞油红O染色 |
| 3.2.9 Caco-2细胞免疫荧光染色 |
| 3.2.10 Caco-2细胞蛋白印迹检测 |
| 3.2.11 Caco-2细胞免疫沉淀检测 |
| 3.2.12 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 AB23A调节绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道中ERs/SRC及PI3 K/AKT信号 |
| 3.3.2 AB23A在胆固醇作用的Caco-2细胞模型中减少胆固醇堆积、减轻炎症并保护紧密连接 |
| 3.3.3 AB23A促进胆固醇作用的Caco-2细胞模型中SRC的表达和P13K/AKT信号 |
| 3.3.4 GPER的阻断减轻AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞模型的保护作用 |
| 3.3.5 SRC是AB23A通过GPER发挥肠道保护及脂质调节作用的关键因子 |
| 3.3.6 AB23A通过上调GPER激活SRC发挥对胆固醇作用的Caco-2细胞模型的保护作用 |
| 3.3.7 AB23A发挥肠道保护及脂质调节作用需要PI3K/AKT信号的激活 |
| 3.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 论文正文缩略词中英文对照表 |
| 综述: 女性绝经后动脉粥样硬化发展与雌激素、雌激素受体和肠道菌群关系的研究现状 |
| 一、雌激素及雌激素受体与绝经后动脉粥样硬化 |
| 二、肠道菌群与绝经后动脉粥样硬化 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 读博期间参与科研课题及其他工作情况 |
| 读博期间发表论文 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性及山茶籽对绝经后骨质疏松症的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性对绝经后骨质疏松症的影响 |
| 1 内容和方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 雌激素受体-α基因多态性分析 |
| 2.2 雌激素受体-αPvuⅡ基因多态性与碱性磷酸酶的结果 |
| 2.3 雌激素受体-αPvuⅡ基因多态性与骨密度的结果 |
| 2.4 雌激素受体-αPvuⅡ基因多态性与雌激素水平的结果 |
| 2.5 雌激素受体-αXbaⅠ基因多态性与碱性磷酸酶的结果 |
| 2.6 雌激素受体-αXbaⅠ基因多态性与超声骨密度的结果 |
| 2.7 雌激素受体-αXbaⅠ基因多态性与雌激素水平的结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 骨质疏松症模型 |
| 3.2 骨质疏松症与雄激素的关系 |
| 3.3 骨质疏松症与雌激素的关系 |
| 3.4 骨质疏松症与雌激素受体-α的关系 |
| 4 小结 |
| 第二部分 山茶籽对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及主要试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠骨组织形态结构 |
| 2.2 大鼠骨钙、骨磷检测结果 |
| 2.3 大鼠骨密度检测结果 |
| 2.4 大鼠血清护骨素检测结果 |
| 2.5 大鼠血清雌激素检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 植物性雌激素与破骨细胞的关系 |
| 3.2 植物性雌激素与成骨细胞的关系 |
| 3.3 骨质疏松症的判定 |
| 4 小结 |
| 研究不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 植物性雌激素防治绝经后妇女骨质疏松症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
四、雌激素减轻大鼠血管钙化的实验研究（论文参考文献）
- [1]基于“阳化气，阴成形”理论研究TGF-β1/Smads影响黄韧带肥厚的机制及模型的建立[D]. 王宝剑. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]西洋参丹参配伍调控PI3K/Akt/NF-κB通路稳定动脉粥样硬化易损斑块的作用机制研究[D]. 林泉. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]电针对骨质疏松骨关节炎共病大鼠膝关节影响的机制研究[D]. 廖源. 广州中医药大学, 2021(02)
- [4]尿毒清对慢性肾衰竭大鼠主动脉钙化的影响[D]. 陈婧. 华北理工大学, 2021
- [5]雌激素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导途径对钙诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响[J]. 吴新华,万家溪,刘宏,陈章荣,杨伟,赵秋燕. 岭南心血管病杂志, 2021(03)
- [6]TGF-β1在诱导血管钙化过程中激活Wnt/β-catenin信号通路与COX-2关系的研究[D]. 何芳. 重庆医科大学, 2021(01)
- [7]狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究[D]. 连雅君. 北京中医药大学, 2021(02)
- [8]狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合大鼠邻近节段椎间盘退变的作用及其机制[D]. 孙琪. 河北医科大学, 2021(02)
- [9]泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化的机制研究[D]. 孟庆海. 南京中医药大学, 2021(01)
- [10]广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性及山茶籽对绝经后骨质疏松症的影响[D]. 顾建忠. 右江民族医学院, 2021(01)