不同组织中L型钙通道的研究综述

一、不同组织L型钙通道的研究概况（论文文献综述）

刘志沛^[1]（2020）在《异莲心碱和人参皂苷Rb1的抗心律失常机制》文中进行了进一步梳理心律失常是心脏疾病的主要并发症,严重的心律失常如室速、室颤会导致心源性猝死,因此心律失常是危害人类生命健康的一个公共卫生问题。心律失常的治疗主要有两类方式,一种是器械和手术治疗,比如植入起搏器、植入式心律转复除颤器,心脏射频消融术;另一种是抗心律失常药物治疗,比如胺碘酮、维拉帕米。虽然器械和手术治疗效果比较好,但也存在各种问题,因此抗心律失常药物治疗仍然是治疗心律失常最常见的策略。目前常用的抗心律失常药物大多数是西药,但是西药有一个棘手的问题,就是副作用较大,因此很多人尝试从传统中草药中开发抗心律失常药物。相较于西药,直接开发中草药及其活性单体优势很多,如中草药在中国乃至亚洲地区已应用数千年,其临床使用、毒性和副作用等方面都比较清楚,因此其开发成本低且安全性较高。炙甘草汤是抗心律失常的名方,在它的基础上研发了许多抗心律失常中成药,例如心速宁等。中成药心速宁由甘草、黄连、莲子心、人参、半夏、茯苓、枳实、常山、苦参、青蒿和麦冬等十一味中草药组成。这些药材的大多数活性成分都做过抗心律失常方面的研究,但有些活性成分在抗心律失常方面的研究不够完整。异莲心碱和人参皂苷Rb1分别提取自莲子心和人参,据报道它们具有多种药理活性,尤其是对心血管具有保护作用。根据上述资料,我们推测异莲心碱和人参皂苷Rb1可能具有抗心律失常的潜质,但其抗心律失常的机制需要深入研究。我们运用全细胞膜片钳技术,记录家兔左心室肌细胞的锋钠电流、晚钠电流、L型钙电流、多种钾电流和动作电位,观察异莲心碱和人参皂苷Rb1对这些电流和动作电位的作用。我们还记录了心室肌细胞的钙瞬变,观察人参皂苷Rb1对心室肌细胞内钙的影响。在细胞层面,也建立了多种病理模型,从缺氧-复氧模型中观察人参皂苷Rb1在缺氧后再复氧的条件下如何影响细胞内钙离子;从海葵毒素Ⅱ（ATX-II）诱导的早期后除极和细胞外高钙诱导的晚期后除极模型中观察异莲心碱和人参皂苷Rb1对后除极这种与心律失常密切相关的病理活动的影响。最后,还观察了人参皂苷Rb1对缺血再灌注损伤引起的心律失常的作用。实验结果显示,异莲心碱浓度依赖性地抑制锋钠电流,半抑制浓度为5.43μmol/L,8μmol/L的异莲心碱使锋钠电流稳态激活曲线右移,稳态失活曲线左移,同时也使锋钠电流时间依赖性复活曲线右移。异莲心碱也能浓度依赖性地抑制L型钙电流,半抑制浓度为1.18μmol/L,2μmol/L的异莲心碱使L型钙电流稳态失活曲线左移,但不影响稳态激活曲线和时间依赖性复活曲线。异莲心碱（1、5、10μmol/L）还能抑制ATX-II诱导增大的晚钠电流,但20μmol/L的异莲心碱不影响内向整流钾电流和延迟整流钾电流的大小。异莲心碱对动作电位的作用表现为抑制动作电位幅度和最大上升速率,缩短动作电位时程,但不影响静息膜电位水平。异莲心碱可以消除ATX-II诱导的早期后除极和细胞外高钙（3.6 mmol/L）诱导的晚期后除极。人参皂苷Rb1浓度依赖性地抑制锋钠电流,半抑制浓度为13.22μmol/L,20μmol/L的人参皂苷Rb1使锋钠电流稳态失活曲线左移,但不影响稳态激活曲线。人参皂苷Rb1也能浓度依赖性地抑制L型钙电流,半抑制浓度为41.89μmol/L,80μmol/L的人参皂苷Rb1使L型钙电流稳态失活曲线左移,但不影响稳态失活曲线。人参皂苷Rb1（40、80、160μmol/L）对内向整流钾电流和延迟整流钾电流的大小无影响。人参皂苷Rb1对动作电位的作用表现为抑制动作电位幅度和最大上升速率,缩短动作电位时程,但不影响静息膜电位水平。人参皂苷Rb1不仅可以降低细胞内钙浓度,抑制缺氧-复氧引起的钙超载的发生,还能消除细胞外高钙（3.6 mmol/L）诱发的晚期后除极。40μmol/L人参皂苷Rb1降低了缺血再灌注损伤引发的室性早搏的次数,延迟了室性早搏的首发时间,也降低了室性心动过速的发生率。综上所述,异莲心碱通过抑制锋钠电流、L型钙电和晚钠电流,消除早期后除极和晚期后除极的发生来发挥抗心律失常的作用;人参皂苷Rb1通过抑制锋钠电流、L型钙电流,降低细胞内钙水平和抑制钙超载的发生来发挥抗心律失常的作用。

冯雪芹^[2]（2020）在《孕期高糖饮食对老年雄性子代大鼠肠系膜动脉功能的影响及机制研究》文中提出研究背景:当今社会经济水平不断提高,营养过剩的孕妇随之增多。母体孕期的不良刺激将会显着增加子代出生后罹患成人疾病（如糖尿病、高血压和中风等）的风险。相关研究发现,孕期高糖饮食可升高子代雄性大鼠青年期的血糖水平,抑制肠系膜动脉血管平滑肌细胞上大电导钙依赖性钾通道（Large-conductance Ca2+-activated K+channels,BK）的功能,最终导致肠系膜动脉功能异常。在老龄化进程中,血管老化是引起各种器官衰老的重要病理基础,成为多种慢性退行性疾病共同的发病机制。目前胎儿期高血糖暴露对血管老化进程的影响尚不清楚。本课题将研究孕期母体高糖饮食对老年雄性子代大鼠肠系膜动脉功能的影响及其机制,以期为高血压等心血管疾病预防的孕期营养干预奠定基础,为相关药物研发提供线索。方法:4月龄SPF级SD雌雄大鼠按照1:2进行配种,发现阴栓时视为孕期第一天。将孕鼠随机分为对照组和高糖组,每组20只。高糖组孕鼠自孕期第一天起给予20%蔗糖水和标准饲料至子代出生,对照组孕期给予正常饮水和标准饲料。两组孕鼠均自然分娩,给予雄性子代正常饮水饮食至20月龄,运用在体血压检测技术、微血管张力检测技术和肌源性张力检测技术,评估孕期高糖饮食对老年雄性子代大鼠肠系膜动脉结构与功能的影响。进一步运用膜片钳电生理检测技术,结合分子生物学技术等方法,探讨肠系膜动脉平滑肌细胞表型与重要离子通道功能改变参与其中的机制。结果:与对照组相比,1)孕期高糖饮食导致老年雄性子代大鼠体重显着增加（P<0.05）,空腹胰岛素水平升高,体内出现胰岛素抵抗;收缩压无显着差异,舒张压和平均动脉压显着升高,具有统计学意义。2)高糖组中基质金属蛋白酶2表达升高（P<0.05）,而其天然组织抑制剂1表达下降（P<0.05）,提示细胞外基质重塑;去氧肾上腺素介导的血管收缩反应和压力诱导的肌源性张力均减弱,提示血管功能发生改变,这种改变可能与肠系膜动脉中L-型钙通道的功能降低有关。3)血管平滑肌细胞的收缩型基因（如α-SMA等）表达显着降低。同时,胰岛素信号通路IR/IRS-1/PI3K信号通路表达下调,利用原代平滑肌细胞证明胰岛素信号通路和L-型钙通道均可调控血管平滑肌细胞的细胞表型。结论:孕期高糖饮食抑制了老年雄性子代大鼠肠系膜动脉上L-型钙通道和PI3K的功能和表达,从而改变了血管平滑肌细胞的细胞表型,最终导致肠系膜动脉功能减弱,发生动脉硬化。

马晓峰^[3]（2020）在《靶向电压门控钙通道的东莨菪内酯杀螨机制研究》文中研究表明朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus（Boisduval）,是一种危害多种经济作物的世界性农业害螨,并对我国的农林生产造成严重的威胁。目前,防治朱砂叶螨主要是通过化学药剂,但由于“3R”问题日趋严重,寻找新型的高效绿色杀螨剂已成为当务之急。实验室前期从黄花蒿等植物中提取分离得到的东莨菪内酯scopoletin已显示出对朱砂叶螨具有触杀、驱避、抑制产卵等效果,实验室前期探索发现东莨菪内酯可能是一种神经毒剂,但目前为止,具体的杀螨作用机制还不清楚。因此,探讨东莨菪内酯的具体杀螨作用机制将有助于以东莨菪内酯为模板进行药物修饰和改造设计,为开发安全、高效、新型的绿色杀螨剂提供理论指导。本研究通过探讨电压门控钙通道介导的东莨菪内酯引起朱砂叶螨钙稳态失衡机制入手,进行了电压门控钙通道基因的分子鉴定及与东莨菪内酯杀螨作用之间关系的研究,取得了以下主要研究成果:1.探讨了东莨菪内酯引起草地贪夜蛾细胞钙稳态失衡的影响,明确了质膜电压门控钙通道基因参与了东莨菪内酯的胁迫设置有钙外液环境和无钙外液环境,并用不同浓度的东莨菪内酯处理草地贪夜蛾细胞,探讨东莨菪内酯对细胞内游离钙离子浓度的响应。发现了在有钙外液环境下,1-100μmol/L的东莨菪内酯可引起细胞内游离钙浓度增加,且在1-100μmol/L浓度范围内,随着东莨菪内酯的浓度升高,胞内钙离子浓度随之上升,即胞内钙离子浓度与东莨菪内酯的处理浓度呈正相关,当1-100μmol/L浓度级别提升至1 mmol/L时东莨菪内酯可引起胞内钙离子相对荧光强度降低。在无钙外液下,1-100μmol/L的东莨菪内酯也可引起细胞内游离钙浓度增加,但增加幅度较有钙外液环境小,且二者之间有显着性差异。由于东莨菪内酯可引起昆虫细胞钙浓度升高,使得细胞钙稳态环境失衡,且这种失衡途径很可能是通过质膜电压门控钙通道介导的外钙内流导致。这为研究东莨菪内酯对朱砂叶螨电压门控钙通道介导的钙稳态失衡提供了理论指导。2.克隆鉴定了L型和T型电压门控钙通道TcL-VDCC、TcT-VDCC的各亚基全长,并分析了其在不同螨态的表达模式和东莨菪内酯胁迫下的表达模式通过分段克隆得到了朱砂叶螨L型和T型钙通道TcL-VDCC-α1、TcT-VDCC-α1的全长,同时克隆了其辅助亚基TcL-VDCC-β、TcVDCC-α2δ并将其序列提交到NCBI,GenBank登录号分别为MK213369、MK256354、MK372341、MK388861;通过分析其结构域发现TcL-VDCC-α1具有典型的电压门控钙通道的结构特性,还具有IQ结构域等L型钙通道特有的结构域;并且通过序列比对、进化分析表明TcL-VDCC、TcT-VDCC各亚基在进化位置上与二斑叶螨亲缘关系最近,并且与蛛形纲聚类到一个分支。不同螨态的表达模式结果显示,这四条基因在所有螨态都有表达,且在幼螨期显着高表达。TcL-VDCC-α1、TcT-VDCC-α1在不同浓度的东莨菪内酯的胁迫表达模式中分析表明在24h和48h处理后其mRNA表达被上调,显示了TcL-VDCC、TcT-VDCC在东莨菪内酯的胁迫处理过程后产生了表达响应。3.利用RNAi验证了TcL-VDCC、TcT-VDCC基因在东莨菪内酯的杀螨作用中的功能合成了TcL-VDCC、TcT-VDCC的dsRNA片段（dsTcL-VDCC、dsTcT-VDCC）,用饲喂法将其导入朱砂叶螨体内,48h后检测沉默效率分别为:55.40%和56.70%;东莨菪内酯的敏感性检测表明,用LC30的东莨菪内酯处理饲喂了dsTcL-VDCC、dsTcT-VDCC的朱砂叶螨,48h后的致死率分别为:11.20%、10.30%。LC50的东莨菪内酯处理饲喂dsTcL-VDCC、dsTcT-VDCC的螨,48h后的致死率分别为:17.67%、12.30%。这表明了沉默了TcL-VDCC、TcT-VDCC的表达后降低了朱砂叶螨对东莨菪内酯的敏感性,并且可能是东莨菪内酯杀螨作用的潜在靶标之一。4.利用同源建模和分子对接技术探索了东莨菪内酯与TcL-VDCC的可能结合位点利用同源建模技术以r Cav1.1的晶体模型为模板构建了朱砂叶螨TcL-VDCC的三维结构模型;通过分子对接技术探索了东莨菪内酯小分子化合物与TcL-VDCC的三维结构模型在活性口袋Pocket1的结合构象,结果显示,东莨菪内酯与TcL-VDCC Pocket1的结合能为-6.771 Kcal/mol,并且东莨菪内酯与Pocket1上的1099位的天冬酰胺（Asn）和1171位的丝氨酸（Ser）结合;同时用特异性钙通道阻滞剂硝苯地平进行了与TcL-VDCC Pocket1的结合,结果显示,硝苯地平与TcL-VDCC Pocket1的结合能为-7.662 Kcal/mol,硝苯地平与TcL-VDCC三维结构模型上的1171位和1517位的丝氨酸（Ser）结合。综上所述,本研究首先参考草地贪夜蛾细胞探讨了东莨菪内酯引起昆虫细胞钙稳态的影响及其可能的机制,进而探讨了由电压门控钙通道介导东莨菪内酯引起朱砂叶螨钙稳态失衡的机制,初步明确了电压门控钙通道TcL-VDCC、TcT-VDCC在东莨菪内酯对朱砂叶螨的作用机制中所起的作用,为最终明确东莨菪内酯的作用机理提供了新的见解及思路。

于秋丽^[4]（2020）在《Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响》文中研究指明氟是与人体健康密切相关的微量元素之一,适量摄入有益于机体的生长发育及维持骨骼、牙齿的正常结构和生理机能;一旦被过量摄入,就会通过血液循环进入全身各处,并在体内蓄积,引起机体急性或慢性氟中毒效应,称为地方性氟中毒,简称地氟病。地氟病致病机制复杂,涉及氧化应激、线粒体改变、内质网应激、信号转导通路改变等。研究表明,氟暴露致细胞凋亡异常可能也是氟致细胞损伤的机制之一。细胞凋亡是一种由基因调控的程序性死亡,真核细胞主要通过内部线粒体途径、内质网途径和外部死亡受体途径介导细胞凋亡发生。我们前期的研究提示,内质网和线粒体途径参与了氟暴露致细胞凋亡异常,但氟暴露致细胞凋亡的死亡受体途径鲜见报道,Fas/Fas L信号通路是主要死亡受体通路之一,在细胞凋亡过程中起重要作用。且在许多细胞凋亡进程中,常伴随Ca2+浓度异常增加,特别是在凋亡早期,细胞内Ca2+浓度异常升高,提示Ca2+可能是启动细胞凋亡的早期信号之一。而在对氟中毒动物模型和体外细胞毒性试验中均检测到细胞内钙离子超载的现象,并证实其与活性氧水平升高以及细胞凋亡密切相关。前期在体动物神经电生理研究表明,细胞内钙超载可能是氟暴露后细胞膜上L-型钙通道活性改变导致的。L-型钙通道拮抗剂是Ca2+进入细胞的阻滞剂,可以有效减少细胞内的Ca2+浓度,抑制凋亡起始信号。但L-型钙通道拮抗剂是否对氟化物诱导的Fas/FasL信号通路依赖性凋亡具有干预作用及其保护机制的研究鲜有报道。本研究通过体外试验探讨Fas/FasL信号通路在氟诱导PC12细胞凋亡中的作用及分子机制,并探究L-型钙通道拮抗剂Nifedipine在上述过程中的干预效果。1.Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用为探讨Fas/FasL信号通路在氟致PC12细胞凋亡中的作用及分子机制,实验采用含20、40、80、160 mg/L NaF培养液处理PC12细胞12、24、36、48小时后,检测细胞活性;用上述不同剂量梯度NaF培养液处理PC12细胞24小时后,检测细胞内活性氧水平、细胞凋亡率、细胞内Fas/FasL信号转导通路Fas、FasL、FADD、Caspase 8、Caspase 3和Bid基因/蛋白表达水平。实验结果如下:（1）细胞活性检测结果:氟暴露12、24、36 h后,各剂量组细胞存活率均呈下降趋势,且呈氟暴露剂量依赖性,其中在160F氟暴露时,PC12细胞存活率均呈极显着下降（P<0.01）;自染氟24 h后开始,80F组PC12细胞存活率呈极显着下降（P<0.01）,染氟48 h后,各氟暴露组细胞剂量-存活率曲线经历了先极显着升高（P<0.01）,然后再极显着下降（P<0.01）的过程。（2）细胞内活性氧水平检测结果:不同剂量氟暴露24 h后,与对照组比,40F组PC12细胞活性氧水平显着增加（P<0.05）,80F与160F组PC12细胞活性氧水平呈极显着增加（P<0.01）,且各组PC12细胞活性氧水平呈氟暴露剂量依赖性。（3）细胞凋亡率检测结果:各剂量氟暴露组早期和晚期凋亡细胞数目较对照组均极显着增加（P<0.01）,氟化钠剂量越高,细胞凋亡率（早、晚期细胞凋亡率之和）越高,且晚期凋亡细胞数目所占比例也逐渐增加。（4）Fas/FasL信号通路相关分子基因/蛋白表达结果:PC12细胞不同剂量氟暴露24 h后,与对照组比,随氟暴露剂量的增加,Fas、FasL、FADD、Caspase 8、Caspase 3基因和蛋白表达水平均呈上升趋势（P<0.05）,且与氟暴露剂量呈依赖性;而各氟暴露剂量组Bid基因和蛋白表达水平逐渐下降,其中80F和160F组呈显着或极显着下降（P<0.05或P<0.01）。综上所述,氟暴露引起PC12细胞内活性氧水平升高,导致Fas/FasL信号通路中各分子表达水平显着上升（P<0.05）,Bid表达水平显着下降（P<0.05）,诱导细胞异常凋亡,最终影响细胞活性,且以上指标均呈氟暴露剂量依赖性。结果提示Fas/FasL信号通路在氟暴露致PC12细胞凋亡中起重要作用,其中FADD可能是Fas/FasL信号通路中的重要靶分子。2.L-型钙通道拮抗剂对氟诱导的PC12细胞凋亡的影响为探讨L-型钙通道拮抗剂Nifedipine对氟诱导PC12细胞通过Fas/FasL信号通路凋亡的干预效果,实验采用剂量效应明显的80 mg/L NaF分别与0.5、1.0、2.0、4.0μM的L-型钙通道拮抗剂Nifedipine联合处理PC12细胞24 h后,检测PC12细胞内活性氧和钙离子水平、细胞凋亡率、细胞膜L-型钙通道Cav1.2及Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达水平、细胞周期分布情况。实验结果如下:（1）细胞内活性氧水平检测结果:与对照组比,F组与F+4.0N组细胞内活性氧水平极显着上升（P<0.01）。与F组比,F+0.5N组、F+1.0N组、F+2.0N组与F+4.0N组活性氧水平均极显着下降（P<0.01）。不同剂量Nifedipine处理组活性氧水平呈现先降低后升高的趋势。（2）细胞内钙离子水平检测结果:各处理组细胞内钙离子水平较对照组显着升高（P<0.05）;与F组比,F+1.0N组与F+2.0N组细胞内钙离子浓度极显着降低（P<0.01）,F+0.5N组和F+4.0N组虽无显着性差异,但有下降的趋势。（3）细胞凋亡率检测结果:与对照组比,各处理组早期和晚期凋亡细胞数目均极显着增加（P<0.01）;与F组比,F+0.5N组、F+1.0N组和F+2.0N组凋亡细胞数目呈Nifedipine剂量依赖性减少（P<0.01）,而F+4.0N组凋亡细胞数目出现上升趋势。晚期凋亡细胞比例先减少而后增加。（4）基因/蛋白表达结果:与对照组比,F组与F+0.5N组Cav1.2和Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达水平显着升高（P<0.05）或有升高趋势,各处理组Bid基因和蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与F组比,F+1.0N组和F+2.0N组Cav1.2以及上述Fas/FasL信号通路相关基因/蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,F+2.0N组Bid基因和蛋白表达水平极显着升高（P<0.01）。（5）细胞周期检测结果:与对照组比,F组与F+4.0N组G1期细胞数量极显着增加（P<0.01）,S期细胞极显着减少（P<0.01）;与F组比,F+0.5N组、F+1.0N组和F+2.0N组G1期细胞极显着减少（P<0.01）,S期细胞极显着增加（P<0.01）,G2期细胞显着增加（P<0.05）或有增加趋势,而F+4.0N组G1期细胞极显着增加（P<0.01）,S期细胞极显着减少（P<0.01）。综上所述,L-型钙通道拮抗剂Nifedipine通过抑制过量ROS产生、细胞内钙超载、Fas/FasL信号通路的激活以及影响细胞周期,有效调控PC12细胞凋亡异常。表明Nifedipine对氟致钙超载诱导的细胞异常凋亡具一定干预作用,可能是一种新型有效的抗氟药物。

胡斌^[5]（2019）在《KCNE亚基调控KCNQ1通道以及β2亚基调控果蝇BK通道的机制研究》文中进行了进一步梳理离子通道是一类跨膜蛋白,负责细胞的离子运输,可以促进动作电位的产生和信息的传递,在神经、心血管等系统中发挥着重要的作用。在体内,离子通道受到多种辅助蛋白的调控,这大大丰富了其功能多样性。离子通道及其辅助蛋白的功能异常会诱发各种疾病。研究离子通道及其辅助蛋白的结构与功能对于理解各种生理活动以及相关疾病的诊断和治疗具有重大意义。在本文中,我们重点研究了三种类型的离子通道:KCNQ1钾通道、Ca2+和电压激活的大电导钾（BK）通道以及T型钙通道。本文的研究内容围绕这三种离子通道可以分为以下四个部分。（1）KCNE2辅助亚基调控KCNQ1通道转运的机制研究。研究表明KCNE2的NH2（N）端是其抑制KCNQ1电流振幅和上膜表达的关键区域,然而,其中涉及的具体的分子机制仍然不清楚。本文发现KCNE2抑制KCNQ1电流振幅和上膜表达的原因是KCNE2将KCNQ1滞留/回收在内质网（ER）中。我们检测了一系列KCNE2N端的突变体对调控KCNQ1功能的影响。结果显示,KCNE2 N端的25–29氨基酸序列片段（NWRQN）的缺失或者附近几个疏水残基的突变都会部分削弱KCNE2对KCNQ1的抑制作用。而当“NWRQN”和疏水残基都突变后,KCNE2几乎丧失了对KCNQ1的抑制作用。这些结果表明KCNE2通过N端的一个结构基序（NWRQN）以及附近的几个疏水残基共同组成的ER滞留/回收信号降低了KCNQ1在细胞膜上的表达水平。本研究揭示了KCNE2抑制KCNQ1上膜表达的具体分子机制,为进一步探索KCNE辅助亚基调控其他电压门控钾离子通道提供了新的重要线索和思路。（2）KCNE亚基的正向转运机制及其对调节KCNQ1功能的影响。研究报道KCNE亚基的转运缺陷与LQTS的发生有关。然而,调控KCNE辅助亚基正向转运的具体分子机制仍不清楚。本研究发现KCNE1和KCNE2的COOH（C）端对于它们从ER转运至细胞膜是必不可少的。我们检测了一系列KCNE1和KCNE2的C端突变体在细胞内的定位以及对调节KCNQ1功能的影响。结果显示在KCNE1和KCNE2的C端存在一段高度保守的序列（[K/R]S[K/R][K/R]）对于促进它们的ER输出非常关键。结果显示,缺少这段保守序列的KCNE2滞留在ER中,并丧失了抑制KCNQ1通道上膜表达和电流振幅的能力。与KCNE2不同的是,KCNE1中的这段序列还在调节KCNQ1的门控特性中发挥着重要的作用。此外,免疫共沉淀实验证明KCNE2 C端的缺失不影响其与KCNQ1通道的结合,而KCNE1的C端对于其与KCNQ1通道结合则非常关键。本研究揭示了KCNE1和KCNE2在细胞内转运的分子机制,为研究它们结合和调控KCNQ1通道或其他Kv通道提供了新的线索和思路。（3）β2亚基调节哺乳动物和果蝇BK通道的不同机制。与辅助亚基β2结合后,哺乳动物BK/β2通道（hSlo1/β2或mSlo1/β2）表现出增强的激活和完全失活特性。然而,β2亚基如何调节果蝇BK通道（dSlo1）仍然不清楚。在本研究中,通过比较不同种源BK/β2通道的功能,我们确定了β2调控哺乳动物BK通道和果蝇BK通道之间的三个不同点:1)与哺乳动物Slo1/β2中的情况不同,β2氨基端的“失活球”（FIW）并不能使dSlo1/β2产生完全失活,并且可能作为通道复合物的滞留/回收信号;2)β2的K33、R34、K35残基减慢了dSlo1/Δ3-β2通道的激活;3)相比mSlo1/β2通道,dSlo1/β2通道的预失活增强。我们的研究结果揭示了β2亚基调节不同种源BK通道的不同机制,也为研究其他BK/β复合物激活和失活的结构基础提供了新的见解。（4）Syntaxin-3A结合和调控T型钙通道的机制研究。Syntaxin-1A被报道能够结合和调节T型钙通道,在调控低阈值胞吐过程中发挥重要作用。Syntaxin-3A与syntaxin-1A高度同源,它是否能够结合并调控T型钙通道尚不清楚。本研究首先通过免疫共沉淀实验证明syntaxin-3A与T型钙通道有直接的相互作用。电生理数据表明syntaxin-3A能够抑制这些钙通道的电流密度。这种抑制作用并不是因为syntaxin-3A影响了T型钙通道在细胞膜上的表达水平。我们进一步发现,syntaxin-3A可以特异性结合Cav3.2通道II、III结构域的连接区域。此外,syntaxin-3A的跨膜区对于其与T型钙通道的相互作用必不可少,但是其中参与相互作用的关键位点还有待进一步确定。本文的研究结果证实了syntaxin-3A和T型钙通道之间的相互作用,为进一步理解syntaxin-3A结合和调控钙通道的机制提供了新的发现和见解。

师慧^[6]（2019）在《脊髓电刺激对房颤犬左心房重构及miRNA表达谱的影响》文中提出[背景]心房颤动（Atrial Fibrillation,AF,以下简称房颤）是以心房电活动极快速而紊乱为特征的心律失常。因其增加患者死亡风险,抗AF治疗非常重要,目前房颤治疗的措施均存在局限性。研究发现自主神经系统（Autonomic Nervous System,以下简称ANS）张力失衡与房颤的发生与维持关系密切。通过刺激和消融自主神经,可影响其ANS平衡状态,促进或抑制房颤。脊髓电刺激（Spinal Cord Stimulation,以下简称SCS）通过调控交感副交感神经活性,可纠正ANS张力失衡,并已被成功应用于治疗顽固性心绞痛、心律失常电风暴、顽固性心衰、无休止室速等危急重症,但可否在治疗房颤中发挥作用,国内外尚无系统研究。[目的]对成功建立的房颤犬模型施加颈胸段脊髓电刺激,观察左心房肌的组织细胞形态结构变化、心房重构相关标志蛋白的表达、微小RNA（microRNA,以下简称miRNA）表达谱变化,与空白对照组及非脊髓电刺激房颤犬模型组对比,分析脊髓电刺激对房颤的治疗效果,及对房颤犬左心房重构和miRNA表达谱的影响,探讨脊髓电刺激治疗房颤的可能机制及作用靶点。[方法]1、18只健康成年比格犬随机平均分为空白对照（Ctrl组）,房颤模型对照（AF组）,房颤模型实施脊髓电刺激（SCS组）3组。（1）给AF组及SCS组实验犬植入高频率起搏器,以AOO模式快速起搏右房以建立房颤模型。（2）建模成功的SCS组实验犬植入脊髓电刺激器,刺激电极定位于脊髓背侧T1～T4节段水平,调整参数逐渐增加刺激电压,每次持续刺激2～6小时,共持续12周。（3）将心电追踪仪植入AF组和SCS组实验犬前胸壁皮下,动态监测心电活动和分析房颤负荷。（4）完成模型制作、脊髓电刺激干预后,处死实验犬,留取左心房肌组织,对组织切片行HE染色和Masson染色后,光镜下观察3组实验犬左心房组织的形态学特征及纤维化程度;电镜下观察3组实验犬左心房组织心肌细胞超微结构变化。2、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及免疫印迹法（Western blot）测定3组实验犬左心房肌组织L-型钙通道蛋白α亚基、缝隙连接蛋白40（Connexin40,CX40）、缝隙连接蛋白 43（Connexin43,CX43）、酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）、乙酰胆碱转移酶（Choline Acetyltransferase,CHAT）和生长相关蛋白43（Growth Associated Protein43,GAP43）的mRNA及蛋白表达水平,并统计分析组间差异;免疫组化和免疫荧光法观察上述6种目标蛋白在3组实验犬左心房肌的表达分布,以平均光密度值统计分析各组间表达差异。3、采用miScript miRNAPCR Array检测3组实验犬左心房肌miRNA表达谱,筛选出3组间明显差异表达的miRNA并对其行聚类分析、qRT-PCR验证,运用生物信息学预测软件对差异表达较显着的miR-33a及miR-219-3p的靶基因及其与靶基因的主要结合位点进行预测分析,用KEGG数据库查找靶基因下游信号通路。[结果]1、18只实验犬中3只在房颤建模过程中死亡,其余15只完成实验。（1）AF组和SCS组存活的9只犬植入起搏器,AOO模式下快速右房起搏均成功完成房颤模型制作,房颤出现时间10.45±2.32周,建模成功率75%,建模成功时起搏频率587.82±13.35次/min。（2）心电追踪仪监测到的房颤负荷,SCS组（7.35±2.42）%明显低于AF组（46.45±6.21）%,P<0.05。（3）左心房肌HE染色光镜下表现为:Ctrl组心肌细胞排列整齐、结构完整;AF组心肌细胞排列紊乱,镜下可见少许细胞变性坏死表现,有间质水肿及纤维化;SCS组心肌细胞排列稍紊乱,有少许间质水肿及核浓缩,但程度均较AF组减轻。（4）左心房肌Masson染色光镜下表现为:AF组左心房纤维化程度较Ctrl组明显增加,SCS组也有纤维化表现,但程度较AF组降低。（5）左心房肌电镜下表现为:Ctrl组心肌细胞核内结构正常、肌原纤维节有序排列;AF组心肌细胞有少许肌浆网扩张、线粒体肿胀变形表现,但是表现不突出;SCS组心肌细胞肌原纤维排列相对整齐,无明显线粒体肿胀或肌浆网扩张之表现。2、脊髓电刺激对房颤犬左心房重构标志物的影响qRT-PCR法、Western blot法、免疫组化和免疫荧光四种方法检测3组实验犬的左心房组织中GAP43、TH、CHAT、CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基mRNA层面和蛋白层面的表达水平,发现各指标在3组间均存在差异。（1）mRNA表达水平,AF组的GAP43、TH、CHAT表达较Ctrl组上调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达较Ctrl组下调,P均<0.05;SCS组与Ctrl组比较,GAP43、CHAT 表达上调,P<0.05,TH 表达上调但P>0.05,CX40、CX43表达下调,P<0.05,L-型钙通道α亚基表达下调但P>0.05;SCS组与AF组比较,GAP43、TH、CHAT表达下调,P均<0.05,CX40、CX43表达上调,但P均>0.05,L-型钙通道蛋白α亚基表达上调,P<0.05。（2）蛋白表达水平,AF组与Ctrl组比较,GAP43、TH、CHAT表达上调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达下调,P均<0.05;SCS组与Ctrl组比较,GAP43、TH、CHAT表达上调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达下调,P均<0.05;SCS组与AF组比较,GAP43、TH、CHAT表达下调,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达上调,P均<0.05。（3）免疫组化染色结果显示,与Ctrl组相比,AF组左心房肌标本中反映心房神经重构的标志蛋白GAP43、TH、CHAT阳性着色反应增加,SCS组也有着色增加,但程度较AF组浅;而反映电-解剖重构的标志蛋白CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基在Ctrl组阳性着色反应深,AF组着色明显变浅,SCS组着色介于二者之间。图片处理软件计算平均光密度值并统计分析,AF组与Ctrl组比较,GAP43、TH、CHAT升高,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基降低,P均<0.05,SCS 组与 Ctrl 组比较,GAP43、TH 升高,P 均<0.05,CHAT 升高但P>0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基降低,P均<0.05;SCS组与AF组比较,GAP43、TH、CHAT均降低,P均<0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均升高,但 P>0.05。（4）免疫荧光显像结果显示,与Ctrl组相比,AF组代表心房神经重构的GAP43、TH、CHAT均高表达,代表心房电-解剖重构的CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均低表达;与Ctrl组相比,SCS组GAP43、TH、CHAT均高表达,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均低表达;与AF组相比,SCS组GAP43、TH、CHAT均低表达,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基表达差异不明显。利用图片分析软件计算平均光密度值并统计分析,与Ctrl组对比,AF组GAP43、TH、CHAT升高,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基降低,P均<0.05;与Ctrl组对比,SCS 组 GAP43 升高,P<0.05,TH、CHAT 也升高但 P>0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均降低,P均<0.05;与AF组对比,SCS组GAP43、TH、CHAT降低,P均<0.05,CX40、CX43、L-型钙通道蛋白α亚基均升高但P>0.05。3、脊髓电刺激对房颤犬左心房肌miRNA表达谱的影响miScript miRNA PCR Array筛选3组实验犬左心房肌组织中差异表达的miRNA,按变化倍数（Fold change,FC）>2或<0.5,且P<0.05为判断标准,与Ctrl 组比较,AF 组上调表达的 miRNA 为 let-7a、miR-33a、miR-92b、miR-345、miR-500、miR-875,下调表达的 miRNA 为 miR-30b、miR-143、miR-196b、miR-216a、miR-219-3p、miR-222、miR-665、miR-1306;与 Ctrl 组比较,SCS 组上调表达的miRNA为miR-33a和miR-105b,下调表达的miRNA为miR-122、miR-143、miR-216a、miR-219-3p、miR-222、miR-665、miR-1306;与 AF 组比较,SCS组上调表达的miRNA为miR-30b、miR-105b,下调表达的miRNA为let-7a、miR-33a、miR-92b、miR-375、miR-500、miR-875。qRT-PCR 法对上述差异表达miRNA进行验证,所得结果与miScript miRNA PCR Array筛选结果一致;聚类分析这些差异表达的miRNA,在TargetScan数据库中查找到miR-33a、miR-219-3p有一共同靶基因TLR4,其中miR-33a与TLR4仅有1个非保守作用位点,miR-219-3p与TLR4有1个保守作用位点和2个非保守作用位点。然后从KEGG数据库中查找到TLR4在NF-κ B信号通路中起重要作用。[结论]1、高频率持续起搏右心房制作房颤犬模型安全、有效、成功率高;从90次/分起始,逐渐增加起搏频率,个体化实施间断或持续犬右心房起搏制作房颤模型,可减小实验意外发生率,房颤模型更稳定且更类似慢性房颤发生发展实际情况。2、脊髓电刺激干预犬房颤模型,安全性高,可操作性强。3、脊髓电刺激有效抑制犬房颤的发生和持续,缓解和逆转房颤相关左心房重构及纤维化,有可能用作治疗房颤的手段之一。4、房颤模型犬存在左心房电-解剖重构和神经重构,SCS可缓解和逆转这类重构,尤其是逆转心房神经重构。SCS可能通过调控心脏自主神经进而逆转左心房神经重构。SCS对左心房重构的逆转作用可能对治疗房颤有利。5、SCS可改变房颤犬左心房肌的部分差异miRNA表达,主要涉及的miRNA包括 let-7a、miR-30b、miR-92b、miR-375、miR-500、miR-875,它们可能是脊髓电刺激干预房颤的分子调控机制,进而可能是脊髓电刺激干预房颤的靶点。6、左心房肌差异表达的miR-33a和miR-219-3p,可能通过TLR4/NF-κ B经典炎症信号转导通路参与调控房颤犬的炎症反应,从而影响房颤转归,有可能成为脊髓电刺激治疗房颤的靶点之一。

李祥^[7]（2019）在《孕期慢性缺氧和出生后高脂饮食对子代血压的影响及动脉平滑肌离子通道机制研究》文中进行了进一步梳理背景:心血管疾病（Cardiovasculardisease,CVD）是当今威胁人类健康的头号杀手,是全球引起死亡的主要病因。大量临床和实验研究证实低出生体重与成年子代心血管疾病的发生密切相关。孕期慢性缺氧会导致胎儿宫内生长受限,使其在出生后的生命历程中对高血压等心血管患病风险显着增加。高脂饮食作为出生后不良因素一直是营养学关注的问题。大量研究己证实高脂饮食可引起肥胖和高血脂症,进而导致高血压、冠心病等心血管疾病的发生。虽然最近已有研究提示,孕期缺氧可能会降低子代出生后对高脂饮食的耐受性,使子代更容受高脂饮食影响而患高脂诱导的心血管疾病,但其具体机制仍不清。因此本课题将运用大鼠股动脉插管技术、微血管功能检测技术、膜片钳技术及分子生物学等方法,从整体、细胞及分子水平来研究高脂饮食对孕期缺氧雄性子代血压的影响及其血管平滑肌细胞相关离子通道机制。第一部分 孕期缺氧和出生后高脂饮食对胎鼠发育及成年子代体重和脂代谢的影响目的:研究孕期缺氧和高脂饮食对胎鼠发育和子代大鼠体重及血脂的影响。方法:雌性SD大鼠怀孕后,随机分为正常对照组和缺氧组,在妊娠第5天至21天（Gestation Day,GD5-21）,缺氧组的孕鼠置于O2含量为10.5%缺氧箱中,正常对照组的孕鼠置于相应大小的常氧箱中。大鼠自然分娩后的3～8h内取出胎鼠进行称重。出生后第4周开始,将两组子代随机分成正常饮食组和高脂饮食（脂肪45%）组,喂养至第16周。于是衍生出四组:正常低脂组（CLF）,正常高脂组（CHF）,缺氧低脂组（HLF）和缺氧高脂组（HHF）在此期间,每两周记录一次各组大鼠的体重和摄食量,采用股动脉插管技术测量各组子代大鼠的基础血压和静息心率。结果:孕期缺氧子代出生体重较正常子代明显下降,至出生后第4周,两组体重无明显统计学差异。高脂饮食大鼠的体重明显较正常饮食大鼠增加。和正常饮食的子代大鼠相比,高脂饮食大鼠血浆甘油三脂、胆固醇、低密度脂蛋白以及游离脂肪酸的水平显着上升,高密度脂蛋白水平显着下降。孕期缺氧能进一步增加高脂饮食对甘油三脂、低密度脂蛋白和游离脂肪酸的影响。结论:孕期缺氧使胎儿发生宫内生长受限,并加剧出生后高脂饮食对血脂的影响第二部分 孕期缺氧及出生后高脂饮食对雄性子代大鼠血压及肠系膜动脉舒缩功能的影响目的:研究孕期缺氧和高脂饮食对子代大鼠血压及肠系膜动脉舒缩功能的影响。方法:雌性SD大鼠怀孕后,随机分为正常对照组和缺氧组,在妊娠第5天至21天（Gestation Day,GD5-21）,缺氧组的孕鼠置于O2含量为10.5%缺氧箱中,正常对照组的孕鼠置于相应大小的常氧箱中。出生后第4周开始,将两组子代随机分成正常饮食组和高脂饮食（脂肪45%）组,喂养至第16周。通过股动脉插管检测子代大鼠血压。通过微血管功能检测平台检测子代大鼠肠系膜动脉舒缩功能。结果:高脂饮食使子代收缩压、心率以及子代肠系膜动脉对对去氧肾上腺素（Phenylephrine,PE）的收缩反应显着增加,孕期缺氧能进一步加剧高脂饮食对收缩压以及肠系膜动脉收缩功能的影响。发现孕期缺氧和高脂饮食均能使子代舒张压上升。高脂饮食能够降低子代肠系膜动脉对Ach舒张反应的敏感性,孕期缺氧对其无明显作用。结论:高脂饮食能增加子代收缩压和肠系膜动脉对PE的收缩反应,孕期缺氧能进一步加剧高脂饮食对收缩压以及肠系膜动脉收缩功能的影响。第三部分 孕期缺氧及出生后高脂饮食对雄性子代肠系膜动脉平滑肌细胞BK通道的影响及机制目的:研究孕期缺氧和高脂饮食对子代大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BK通道的影响,并探讨其相关分子机制方法:运用膜片钳单通道技术检测子代肠系膜动脉平滑肌细胞BK通道生物物理特性的变化。运用传统全细胞模式记录BK通道全细胞电流。运用qRT-PCR和Western blot技术分别检测两组BK通道α亚基和β1亚基mRNA和蛋白表达水平。结果:和正常饮食雄性子代大鼠相比,高脂饮食大鼠肠系膜动脉BK通道功能显着增强,孕期缺氧对其无显着影响。高脂饮食能显着增加雄性子代大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞全细胞钾电流和BK通道电流。高脂饮食组大鼠BK通道Ca2+敏感性、开放概率、开放时间以及β1亚基mRNA和蛋白表达均明显增加,且这些改变均不受孕期缺氧因素影响。高脂饮食和孕期缺氧均不影响BK通道α亚基的mRNA和蛋白表达。结论:高脂饮食能显着增加雄性子代大鼠肠系膜动脉BK通道功能和BK通道β1亚基表达,孕期缺氧对BK通道功能和BK通道β1亚基的表达无显着影响且没有进一步加剧高脂的影响作用。第四部分 孕期缺氧及出生后高脂饮食对雄性子代肠系膜动脉平滑肌细胞L-型钙通道的影响及机制目的:研究孕期缺氧及出生后高脂饮食对雄性子代肠系膜动脉及平滑肌细胞L-型钙通道的影响。方法:通过微血管功能检测平台检测子代大鼠肠系膜动脉收缩功能。运用传统全细胞模式记录全细胞钙通道电流。运用qRT-PCR和Western blot技术检测L型钙通道α1C亚基mRNA和蛋白表达水平。结果:在孵育Nifedipine（L型钙通道阻滞剂）后,高脂饮食的雄性子代大鼠肠系膜动脉对去氧肾上腺素（Phenylephrine,PE）的收缩反应的变化幅值明显较正常饮食组增大,缺氧高脂组肠系膜动脉对PE收缩反应的变化幅值较正常高脂组也明显增加。膜片钳结果显示,高脂饮食的子代大鼠肠系膜平滑肌细胞全细胞L型钙通道的最大峰值电流密度无论是在基础状态还是在加入其特异性激动剂BayK 8644（5μmol/L）之后都较正常饮食组显着增加,并且各组雄性子代大鼠的非Nifedipine（1μmol/L）敏感电流、激活能力没有差异。孕期缺氧能进一步加剧高脂饮食对L型钙通道电流的影响。高脂饮食能降低平滑肌细胞L型钙通道的失活能力。高脂饮食显着增加雄性子代肠系膜动脉钙通道α1C亚基mRNA和蛋白表达,而孕期缺氧能使其表达进一步增加。结论:高脂饮食能显着增加雄性子代肠系膜动脉平滑肌钙通道的功能和α1C亚基的表达,孕期缺氧进一步加剧高脂饮食对钙通道的影响。

王增夏^[8]（2019）在《黄杨宁对过氧化氢预处理的大鼠心房肌细胞L-型钙通道的影响》文中认为目的:心房颤动的发病机制与心房电重构有关,L型钙通道参与心房电重构的过程,临床研究显示黄杨宁在房颤治疗中有效,本文旨在探索黄杨宁对过氧化氢预处理成年SD大鼠心房肌细胞L型钙电流、L型钙通道电生理特性及L型钙通道α亚单位表达变化的影响,来说明黄杨宁可能通过影响L型钙通道的电生理特性在房颤的治疗中发挥作用。方法:SD大鼠心房肌细胞的制备:Langendorff灌流装置系统用于逆行灌流离体心脏,并通过急性酶解法分离SD大鼠心房肌细胞,然后对分离获得的心房肌细胞进行梯度复钙,获得适合电生理记录要求的耐钙心肌细胞,以便后续的全细胞膜片钳技术实验正常进行。实验分组:将制备的心房肌细胞随机分为六组:空白组、H2O2组、H2O2+胺碘酮组、H2O2+黄杨宁组、H2O2+Mito TEMPO组、H2O2+黄杨宁+Mito TEMPO组。采用全细胞膜片钳技术记录L型钙通道电流(ICa L)、L型钙通道(ICa-L)的激活曲线、失活曲线及恢复曲线。细胞免疫荧光用于检测L型钙通道α亚单位Cav1.2蛋白的表达。结果:1.黄杨宁对大鼠心房肌细胞L-型钙电流密度及I-V曲线变化的影响:与空白组相比,H2O2组的L型钙电流密度增加（p<0.05）;与H2O2组相比,胺碘酮组、黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组的L型钙电流密度均降低（p<0.05）;与胺碘酮组相比,黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组的L型钙电流密度均增加（p<0.05）;黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组三组之间的L型钙电流密度无显着性差异（p>0.05）。2.黄杨宁对大鼠心房肌细胞ICa-L I-V曲线变化的影响。与空白组相比,H2O2组ICa-L I-V曲线下移,胺碘酮组,黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组ICa-L I-V曲线均上移,且胺碘酮组I-V曲线上移的最明显。3.黄杨宁对大鼠心房肌细胞ICa-L稳态激活、失活、恢复曲线的影响。激活曲线:与空白组相比,H2O2组曲线向左移动;与H2O2组相比,胺碘酮组,黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组曲线均向左移动;失活曲线:与空白组、H2O2组、黄杨宁组相比,胺碘酮组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组曲线均向左移动;恢复曲线:与空白组、H2O2组、黄杨宁组相比,胺碘酮组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组曲线均向右移动。4.黄杨宁对L型钙通道α亚单位Cav1.2蛋白表达的影响。与空白组相比,H2O2组蛋白表达增强;与H2O2组相比,胺碘酮组、黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组蛋白表达均减弱;其中胺碘酮组蛋白表达最弱,黄杨宁组、Mito TEMPO组、黄杨宁+Mito TEMPO组无明显差异。结论:1.H2O2增大ICa L;黄杨宁抑制ICa L,可能通过影响ICa-L电生理特性,在房颤的治疗中发挥作用。2.H2O2可能是通过增强ICa-LCav1.2蛋白的表达使ICa L增大。黄杨宁可能是通过减弱ICa-LCav1.2蛋白的表达使ICa L减小。

柯进^[9]（2019）在《蟾酥提取物bufalin通过调节T-型钙通道Cav3.2参与神经病理性痛及机制研究》文中指出目的:研究蟾酥提取物bufalin通过调节小鼠背根神经节（dorasal root ganglion,DRG）T-型钙通道参与神经病理性痛及作用机制。方法:应用坐骨神经分支选择性损伤模型（spared nerve injury model,SNI）研究bufalin对小鼠行为学的作用。应用电生理技术研究bufalin在假手术组（Sham）组和手术组（SNI）中对T-型钙通道电流的作用。在离体水平探究bufalin对T-型钙通道三个亚基Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3电流的作用。应用药理学方法研究其信号通路作用机制。结果:1)行为学结果显示,鞘内注射（L4-6）10 nM-100 nM的bufalin可缓解SNI引起的机械痛、热痛和CFA引起的炎症痛反应。注射T-型钙通道阻断剂Z941和TTA-P2后产生类似作用。2)电生理研究结果显示,bufalin对神经病理性疼痛小鼠DRG神经元T-型钙电流具有显着的抑制作用。与Sham相比,SNI组小鼠L4-6 DRGs中T-型钙通道电流的浓度效应曲线和失活曲线的EC500值比Sham组分别低67和100倍,并且bufalin促进各组中T-型钙通道的失活。3)在药理学研究中,预先加入蛋白激酶C（PKC）抑制剂GF109203X和chelerythrine chloride消除了bufalin对小直径DRG神经元中T-型钙电流的抑制作用,而加入蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89和PK16-22以及经典蛋白激酶C（classical PKC）抑制剂Ro31-8820则未引起这种作用。此外,预先孵育PKCδ特异性抑制剂Rottlerin后翻转了 bufalin对T-型钙通道的抑制作用,而电极内加入PKCe抑制剂,PKCη抑制剂和PKCε抑制剂则不能阻断bufalin对T-型钙通道的抑制作用。4)在外源表达体系中,bufalin对Cav3.2 T-型通道电流有较强的抑制作用,但对Cav3.1和Cav3.3电流无影响。5)免疫细胞化学和免疫印迹结果显示,预先用bufalin孵育DRG神经元后,能引起PKCδ发生转位现象。结论:Bufalin通过PKCδ信号通路选择性抑制DRG神经元中Cav3.2电流,并可缓解由SNI诱导的机械痛和热痛觉过敏。

杨用乐^[10]（2019）在《新型磷酸酶MTMR14的缺失对哮喘小鼠气道高反应性的影响及其机理研究》文中研究指明MTMR14是一种新型磷酸酶,在睾丸、骨骼肌和心肌中高表达,其缺失会导致细胞内钙紊乱,引起众多肌肉疾病,如中央核肌病、骨骼肌衰老、肌无力和肌肉疲劳等。此外,该基因还能调控细胞的增殖、迁移以及动脉粥样硬化的形成。哮喘是一种以气道高反应性和慢性气道炎症为特征的异质性疾病,通常由支气管和微气管的慢性炎症、气道阻塞而引起呼吸紊乱。作为细胞内重要的第二信使,Ca2+在调控哮喘的作用中起到十分重要的作用。在骨骼肌中,我们已经报道MTMR14的缺失可以导致细胞内钙的紊乱从而影响骨骼肌的正常功能,而我们最近的研究发现MTMR14在气管平滑肌中也是高表达的。因而我们推测MTMR14的缺失可能影响气管平滑肌的收缩以及哮喘的形成。为了验证该假设,我们首先检测了MTMR14在正常小鼠及哮喘小鼠中的表达情况,我们发现在哮喘小鼠中MTMR14的表达是下调的,这提示MTMR14可能在哮喘形成中发挥一定的作用。接着我们用野生型和MTMR14敲除型小鼠建立哮喘模型,用以研究MTMR14的缺失对哮喘小鼠气道高反应性的影响及其机理。实验结果如下:MTMR14敲除型哮喘小鼠气道炎症细胞浸润、气道壁重塑、气道高反应性及呼吸系统阻力均显着增强;进一步研究发现MTMR14的缺失导致Th2细胞因子IL-4、IL-13表达上调、黏蛋白Muc5ac、TNF、NOX4的表达也显着上调,这与前面的表型发现是一致的。此外我们还发现MTMR14的缺失导致了气管平滑肌中细胞内钙增加、L型钙通道电流异常,这可能与MTMR14的缺失导致了L型钙通道家族中Cav1.2表达下调以及胞内环境紊乱有关。另外,我们还筛选出一种可用于舒张由高钾和ACh诱导的小鼠离体气管环收缩的小分子化合物--Benidipine HCl。Benidipine HCl为长效的第二代二氢吡啶类钙离子拮抗剂,现在临床上将其作为抗高血压药和抗心绞痛药使用。我们的研究发现Benidipine HCl可通过阻断L型钙通道和NSCCs抑制外钙内流和内钙释放,以此来实现舒张由高钾和ACh所诱导的小鼠离体气管环的收缩。综上所述,我们的结果表明:MTMR14的缺失可通过影响气管平滑肌细胞内钙水平影响气管平滑肌细胞L型钙通道电流并导致气道高反应性;Benidipine HCl可通过阻断L型钙通道和NSCCs调控细胞内钙水平,抑制气管平滑肌收缩,其有可能用于治疗气管痉挛。

二、不同组织L型钙通道的研究概况（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、不同组织L型钙通道的研究概况（论文提纲范文）

（1）异莲心碱和人参皂苷Rb1的抗心律失常机制（论文提纲范文）

（2）孕期高糖饮食对老年雄性子代大鼠肠系膜动脉功能的影响及机制研究（论文提纲范文）

（3）靶向电压门控钙通道的东莨菪内酯杀螨机制研究（论文提纲范文）

（4）Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响（论文提纲范文）

（5）KCNE亚基调控KCNQ1通道以及β2亚基调控果蝇BK通道的机制研究（论文提纲范文）

（6）脊髓电刺激对房颤犬左心房重构及miRNA表达谱的影响（论文提纲范文）

（7）孕期慢性缺氧和出生后高脂饮食对子代血压的影响及动脉平滑肌离子通道机制研究（论文提纲范文）

（8）黄杨宁对过氧化氢预处理的大鼠心房肌细胞L-型钙通道的影响（论文提纲范文）

（9）蟾酥提取物bufalin通过调节T-型钙通道Cav3.2参与神经病理性痛及机制研究（论文提纲范文）

（10）新型磷酸酶MTMR14的缺失对哮喘小鼠气道高反应性的影响及其机理研究（论文提纲范文）

四、不同组织L型钙通道的研究概况（论文参考文献）

• [1]异莲心碱和人参皂苷Rb1的抗心律失常机制[D]. 刘志沛. 武汉科技大学, 2020(01)
• [2]孕期高糖饮食对老年雄性子代大鼠肠系膜动脉功能的影响及机制研究[D]. 冯雪芹. 苏州大学, 2020(06)
• [3]靶向电压门控钙通道的东莨菪内酯杀螨机制研究[D]. 马晓峰. 西南大学, 2020(01)
• [4]Fas/FasL凋亡途径在氟致PC12细胞损伤中的作用及L-型钙通道拮抗剂的影响[D]. 于秋丽. 浙江师范大学, 2020(01)
• [5]KCNE亚基调控KCNQ1通道以及β2亚基调控果蝇BK通道的机制研究[D]. 胡斌. 华中科技大学, 2019(01)
• [6]脊髓电刺激对房颤犬左心房重构及miRNA表达谱的影响[D]. 师慧. 昆明医科大学, 2019
• [7]孕期慢性缺氧和出生后高脂饮食对子代血压的影响及动脉平滑肌离子通道机制研究[D]. 李祥. 苏州大学, 2019(04)
• [8]黄杨宁对过氧化氢预处理的大鼠心房肌细胞L-型钙通道的影响[D]. 王增夏. 河南中医药大学, 2019(02)
• [9]蟾酥提取物bufalin通过调节T-型钙通道Cav3.2参与神经病理性痛及机制研究[D]. 柯进. 苏州大学, 2019(06)
• [10]新型磷酸酶MTMR14的缺失对哮喘小鼠气道高反应性的影响及其机理研究[D]. 杨用乐. 中南民族大学, 2019(08)

标签：孕期饮食论文;  细胞凋亡论文;  心房颤动论文;  药品论文;