一、自体骨髓移植在实体瘤治疗中的应用研究（论文文献综述）
刘皎皎[1]（2021）在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中提出目的:采用随机对照临床试验（RCT）方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例（以下简称西医组）,采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例（以下简称中医组）,采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例（以下简称中西医组）,采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落（中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落）,最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组（西医组）38例、补肾生髓成肝综合治疗组（中西医组）42组、补肾生髓成肝单独治疗组（中医组）36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心（世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构）完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生长因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:（1）三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义（P>0.05）。（3）三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低（P<0.05）,组间比较无统计学差异（P>0.05）。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义（P>0.05）。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（4）三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（5）三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义（P<0.05）,且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。（8）IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。（9）IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均较正常人群组升高（75.165）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。（10）PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组（4401.67）。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。（11）TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
曹韪凡[2]（2020）在《靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究》文中指出近年来,嵌合抗原受体（Chimeric antigen receptor,CAR）修饰的T细胞为代表的靶向免疫细胞治疗方案受到广泛关注。该技术通过在T细胞中转染并表达人工CAR,促使T细胞可以特异性靶向结合肿瘤表面抗原。同时,利用人工CAR胞内段结构域提供T细胞活化信号,使其成为具有精准靶向性、并持续维持杀伤活性的新一代细胞治疗技术,在多种肿瘤治疗领域特别是血液系统肿瘤的治疗中表现出良好的治疗效果。目前,大多数关于CAR的研究主要集中在T细胞,然而伴随而来的细胞因子风暴、脱靶效应等副作用已成为限制CAR-T细胞临床应用的重要因素。针对这些副作用或缺陷,促使我们将注意力转移到以自然杀伤（natural killer,NK）细胞与因子诱导杀伤细胞为代表的非特异性免疫细胞的人工CAR的改造研究中。NK细胞属于先天固有免疫系统中的重要组成部分,是机体天然免疫屏障中的主要承担者。NK细胞在肿瘤的免疫治疗中具有特殊优势。首先,NK细胞不受主要组织相容性复合体识别限制,并且无需抗原提呈细胞就可以激活自身免疫应答反应;其次,NK细胞在过继性细胞回输疗法中,体内存活周期短,不会诱发抗移植物宿主反应,相较于T细胞,NK细胞诱发因子风暴反应可控。然而人体肿瘤细胞可以通过多种免疫逃逸机制逃避NK细胞非特异杀伤作用,使得NK细胞在肿瘤免疫治疗中的作用受到了制约。基于以上因素和前期我们在CAR-CIK细胞研究工作中的基础与策略,本次在NK细胞中引入CAR的修饰改造,引导NK细胞对血液肿瘤细胞靶向杀伤,同时利用CAR胞内段细胞活化信号结构域的表达来增强免疫细胞自身的活性。以B淋巴细胞白血病的特异性靶标CD19为靶点,针对不同来源的NK细胞生物学特点,开展了人工CAR胞内段和跨膜区的改造工作。在胞内段优化过程中,将具有NK细胞活化功能的含有IL-15分子、4-1BB细胞共刺激信号分子、CD3 ζ链胞内区分子、CD8引导链和Kozak序列等胞内段活化结构域相关分子序列进行串联整合,融入到CAR结构中,制备特性化针对NK细胞的人工CAR重组质粒,然后通过病毒载体,在体外进行转导,成功构建出带有靶向识别杀伤功能的人工CAR修饰的NK细胞。同时,优化了 NK细胞体外培养与活化体系,为后续大剂量的细胞制备,开展体外、体内试验以及未来临床试验和应用奠定了基础。在此基础上,为了进一步检验人工CAR修饰细胞的靶向杀伤能力,采用乳酸脱氢酶法、杀伤因子检测和流式细胞检测等多种方法,对构建的CAR-CIK、CAR-NK-92、CAR-NK细胞杀伤效果进行了验证与分析评估。利用药效学,研究分析了我们构建的人工CAR修饰细胞在小鼠急性B淋巴细胞白血病模型中的靶向杀伤作用以及安全性。结果表明,构建的人工CAR修饰细胞具有明显的靶向杀伤能力和可靠的生物安全性。此外,利用单细胞转录组测序技术和基因表达水平以及生物信息学分析,研究脐血NK细胞分别在人工CAR载体转导前后以及增殖过程中基因的表达谱变化。结果显示,以CX3CR1为代表的功能成熟的NK细胞基因高表达,而且具有独特的转录特性,探讨了 NK细胞的发育生物学的分子机制,并针对CD19-CAR-NK细胞技术的临床应用研究进行了再设计与评估。本项研究的创新点在于尝试突破人工CAR细胞方法改造非特异性细胞的技术瓶颈,构建出一套创新优化的CAR-NK制备体系,为拓展人工CAR细胞治疗方案提供技术支撑;改造了 CAR胞内段细胞活化信号分子,以及验证了 CD19-CAR-NK细胞的成药性、有效性以及安全性;这将有利于CAR相关技术在免疫治疗过程中发挥更重要的作用,并为进一步的临床应用研究提供新方法和新思路。主要结果:1.构建了基于CAR-T技术的靶向CD19的CAR-CIK细胞、CAR-NK-92细胞制备体系。2.构建了基于脐血来源的NK细胞靶向CD19的新型CAR-NK细胞技术体系。3.体外实验验证了 CD19-CAR-NK具有显着的靶向细胞杀伤功能,并呈现剂量依赖性特点,特异性杀伤效果明显。4.探索了 CAR-NK细胞最佳NK细胞转导方法,可使用慢病毒载体或逆转录病毒载体对NK细胞进行转导。通过优化的培养体系培养的NK细胞可以获得更好的转导效率。5.利用单细胞测序技术,探讨了脐血NK细胞分别在CAR转导前后以及增殖过程中基因表达谱变化,以CX3CR1为代表的功能成熟NK细胞基因高表达转录特性。6.B淋巴细胞白血病小鼠模型研究结果表明,CD19-CAR-NK细胞在回输后第7天抑瘤率为61%,远高于对照组抑瘤率12%。未产生相关毒性以及致瘤致畸等不良情况,验证了 CD19-CAR-NK细胞具有良好的生物安全性及有效性。
吕萃[3]（2020）在《多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究》文中指出从多能干细胞诱导分化出可移植、有功能的血液及免疫细胞一直是再生医学领域的研究热点和难点。本文第一部分证明小鼠胚胎干细胞分化来源、体内成熟的T细胞可以结合CAR-T技术改造实现体内清除肿瘤的目的,第二部分初步实现诱导小鼠胚胎干细胞获得可移植的髓系祖细胞种子,移植后可在体内短期再生髓系细胞（包括粒细胞、单核-巨噬细胞）。本研究为再生T细胞以及可移植髓系细胞的转化研究提供了技术借鉴。嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T）疗法已成为临床上治疗血液肿瘤的有效手段。通常CAR-T细胞是通过分离患者外周血来源的T细胞在体外进行基因编辑而制备,但是患者自身的T细胞数量有限且经常出现功能异常或耗竭,因此需要探索T细胞新的来源。本研究基于课题组已开发的定向诱导T细胞技术,利用Runx1-Hoxa9条件性表达的多能干细胞系诱导分化出可植入免疫缺陷鼠（B-NDG）的造血祖细胞（induced hematopoietic progenitorcells,iHPCs）,移植B-NDG小鼠5周后,从脾脏中分离出再生的T细胞（induced T cells,iT）,通过将iT细胞感染CD19-CAR逆转录病毒制备CD19-CAR iT细胞。为了验证CD19-CAR iT细胞在体内针对B淋巴瘤细胞的杀伤功能,本研究首先通过移植表达荧光素酶（luciferase）的B淋巴瘤细胞（Ka539-luciferase）构建了基于C57BL/6的肿瘤负荷鼠模型,随后分别将CD19-CAR iT细胞和Ctrl-CARiT细胞（阴性对照）过继移植到肿瘤模型中,流式检测发现CD19-CAR iT细胞可以持久抑制外周血中CD19+B细胞的产生,这表明了其具有针对特异抗原的直接杀伤能力。同时小鼠活体成像实验证实CD19-CAR iT细胞可以有效缓解肿瘤模型鼠的肿瘤负荷,并且相比于对照组,经过CD19-CAR iT细胞治疗的肿瘤鼠能够显着延长生存时间（>70天）。其次,CD19-CAR iT细胞在体内接受到CD19抗原刺激后能够快速增殖,并且可被大量激活（CD44+CD62L-）,从侧面印证了 CD19-CARiT细胞功能的有效性。以上结果说明CD19-CAR iT细胞可以有效清除B淋巴瘤细胞,也验证了由多能干细胞诱导再生的iT细胞可以用于制备CAR-T细胞,这为T细胞疗法的新细胞来源提供了技术参考。与此同时,髓系细胞,特别是粒细胞和单核-巨噬细胞,是天然免疫系统重要成员,在吞噬、杀菌和抗病原体感染中发挥关键作用。因此,再生有功能的髓系细胞对移植和化疗后的抗感染治疗具有重要的临床意义。本研究发现,Runx1-Hoxa10二因子条件性诱导表达的mES细胞系（iR10 mESCs细胞系）可诱导分化获得可移植的造血细胞种子,移植后体内再生出髓系细胞,包括粒细胞和单核-巨噬细胞。具体而言,首先通过形成拟胚体（Embryoid bodies,EBs）的方式模拟胚胎发育早期阶段,随后通过诱导Runx1和Hoxa10的表达和添加特定造血细胞因子进行培养获得诱导型生血内皮细胞（iHECs,CD31+CD41lowCD45-c-Kit+CD201hi）。生成的iHECs再和OP9-DL1基质细胞共培养获得诱导型造血祖细胞（induced hematopoietic progenitor cells,iHPCs）,这些 iHPCs 植入半致死辐照后的Rag1-/-小鼠后成功再生髓系细胞（CD11b+）。PCR测序结果证明体内再生的髓系细胞确实插入了目的基因Runx1和Hoxa10。此外,在骨髓和脾脏组织中均检测到再生的髓系细胞,包括粒细胞（CD11b+Gr1+）、单核细胞（CD11b+Gr1-F4/80-）和巨噬细胞（CD11b+F4/80+）。最后,iHPCs在移植入半致死辐照后的野生型受体鼠后也成功再生髓系细胞。结合再生髓系细胞的功能实验结果,本研究将为再生人髓系细胞提供技术参考,也有望为临床上抗感染细胞疗法等提供新的细胞来源。
杨文娟[4]（2020）在《自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究》文中研究表明目的:探讨自体造血干细胞移植（auto-HSCT）治疗恶性血液病的临床疗效及预后影响因素分析。方法:回顾性分析1983年1月2019年12月在中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院行自体造血干细胞移植（auto-HSCT）的215例恶性血液病患者的临床资料。自体外周血干细胞（APBSC）动员采用环磷酰胺（Cy）+足叶乙甙（VP-16）化疗联合重组人粒细胞刺激因子方案。预处理方案:恶性淋巴瘤（ML）及急性白血病（AL）、髓外浆细胞瘤采用全身照射（TBI）+VEM/IAC方案;多发性骨髓瘤10例采用白消安+VP-16+Cy（BVC）方案、5例采用硼替佐米+BVC方案、5例采用硼替佐米+马法兰方案、7例采用马法兰方案;孤立性浆细胞瘤采用BVC方案。对患者总生存率（OS）、无进展生存率（PFS）、复发率（RR）等进行统计。统计学处理采用SPSS 25.0统计软件,多分类数据采用非参数检验,对患者的OS、PFS采用Kaplan-Meier方法计算并绘制生存曲线,组间比较采用Log rank检验进行单因素分析,对影响OS、PFS的多因素分析采用Cox比例风险回归模型。P<0.05认被为差异有统计学意义。结果:本研究215例行auto-HSCT的恶性血液病患者中自体骨髓移植（ABMT）33例,自体外周血干细胞移植（APBSCT）182例。恶性淋巴瘤（ML）169例[非霍奇金淋巴瘤（NHL）119例,霍奇金淋巴瘤（HL）47例,灰区淋巴瘤（GZL）3例],多发性骨髓瘤（MM）27例,浆细胞瘤2例（髓外浆细胞瘤1例、孤立性浆细胞瘤1例）,NHL并髓外浆细胞瘤1例,急性淋巴细胞白血病（ALL）10例（Ph+1例）,急性髓系白血病5例[M2 1例、M3 1例（PML/RARα阴性）、M5 2例、粒细胞肉瘤1例],朗格罕斯细胞组织细胞增生症（LCH）1例。移植中位年龄34（1161）岁,男性患者148例,女性患者67例。中位随访时间为36（0426）个月,除1例患者移植当天回输自体外周血干细胞后发生急性肺水肿死亡、1例移植后9天因真菌败血症死亡外,其余213例患者均获得造血重建,粒细胞植入的中位时间为+12（+8+33）d,血小板植入中位时间为+13（0+73）d,ABMT造血恢复慢于APBSCT患者,差异有统计学意义（P<0.05）。215例患者3年、5年OS分别为79.9%、74.9%,3年、5年PFS分别为66.9%、63.2%,复发率（RR）为26.98%（58/215）,移植相关死亡率（TRM）为3.72%（8/215）,移植前76例PR、NR、PD或复发的患者中51例在移植后达CR,有效缓解率67.11%。单因素分析显示患者性别、移植年龄及移植前病程对auto-HSCT后长期预后无明显影响（P>0.05）,干细胞来源影响患者移植后3年OS及PFS,APBSCT的3年OS及PFS均优于ABMT患者（P<0.05）;诊断影响患者移植后3年OS,ML及MM患者移植后3年OS优于AL患者,3年OS分别为81.0%、73.2%、50.8%（P<0.05）;移植前疾病状态影响患者3年PFS,移植前病情CR及PR患者移植后3年PFS优于NR、PD及复发患者（P<0.05）。多因素分析显示急性白血病是影响患者OS的的独立危险因素,相对风险（RRs）是4.397（95%CI,1.716-11.268）（P<0.05）,而移植前病情未缓解、复发、进展是影响患者PFS的独立危险因素,相对风险（RRs）是2.718（95%CI,1.283-5.754）（P<0.05）。结论:自体造血干细胞移植治疗恶性血液病安全有效,可作为恶性血液病患者诱导缓解后的巩固治疗,移植后部分患者可获得长期生存;对于复发难治或移植前未缓解的恶性血液病患者,自体造血干细胞移植可作为挽救性治疗提高患者缓解率、延长生存期,改善生活质量。
徐欢天[5]（2020）在《靶向B7-H3的CAR-T细胞的构建及功能研究》文中研究说明嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor T-cells,CAR-T）治疗技术是指通过基因工程等手段改造T淋巴细胞使其表达特定的能够识别肿瘤表面抗原的嵌合抗原受体（CAR）,改造后的CAR-T细胞具有不依赖主要组织相容性复合体（MHC）限制性的肿瘤识别和杀伤能力。近年来不断累积的临床数据证实了CAR-T细胞在血液系统肿瘤治疗中的安全性与有效性,但CAR-T疗法在实体瘤治疗方面却进展甚微,其中一个重要原因就是实体肿瘤的生物学特性更为复杂,高肿瘤异质性等特点使CAR-T细胞的靶点选择充满挑战。共刺激分子B7-H3是2001年发现的一个B7免疫调控家族成员,作为B7-CD28检查点通路的新成员,在肿瘤免疫过程中起到了极其重要的作用。虽然B7-H3的m RNA广泛分布于组织细胞中,但其接受包括多种mi RNA在内的转录后调控,使其蛋白表达谱非常局限,在正常组织中不表达或极低表达。最近大量研究表明,B7-H3在多种实体肿瘤中高表达,并与肿瘤的免疫逃逸、黏连、侵袭和转移存在密切联系。尽管B7-H3在肿瘤发生过程中的确切分子机制尚未明确,但是,其在肿瘤组织中特异性高表达特征为以B7-H3为靶点的抗肿瘤治疗提供了分子基础。最近靶向B7-H3的抗体8H9在治疗小儿中枢神经系统/闭锁转移瘤（CNS/LM）的临床试验取得了良好的结果,被FDA授予突破性治疗称号,这一结果更加凸显了靶向B7-H3在肿瘤治疗中的潜力。因此本研究拟探讨靶向B7-H3的嵌合抗原受体T细胞对高表达B7-H3的胃癌细胞SGC-7901的体外和体内特异性杀伤作用。本研究首先以8H9抗体序列为基础,设计靶向B7-H3的sc Fv,并以此sc Fv为CAR的胞外抗原结合区,以CD28和CD137为共刺激分子,以CD3ζ链为胞内信号传导区,通过融合PCR构建CAR编码序列,之后通过同源重组将CAR编码序列插入至慢病毒表达载体,通过电泳及测序结果验证慢病毒表达载体序列构建成功。然后使用慢病毒感染T细胞以制备anti-B7H3-CAR-T细胞,我们通过荧光显微镜和蛋白质免疫印迹法观察到anti-B7H3-CAR蛋白在T细胞中成功表达,并且通过流式细胞术分析得到anti-B7H3-CAR-T细胞的阳性率为26%。之后,我们进一步探索anti-B7H3-CAR-T细胞在体内和体外对B7H3-SGC细胞的杀伤作用。在体外实验中,anti-B7H3-CAR-T细胞能够特异性地杀伤B7H3-SGC细胞并分泌大量的IL-2和IFN-γ。在体内实验中,anti-B7H3-CAR-T细胞能有效地抑制肿瘤细胞的过快增长并延长小鼠的生存时间,肿瘤组织切片的免疫组化和HE染色结果显示anti-B7H3-CAR-T细胞能够有效浸润到肿瘤组织内部并产生杀伤性作用,且对小鼠的肝和肾组织无严重的不良反应。因此,本研究首次系统探讨了以B7-H3为靶点的CAR-T细胞的体外和体内抗肿瘤作用,这一方法有望成为治疗B7-H3高表达实体瘤的新策略。
钱丽玲,陈蒋庆,吴晓燕,荆瑞瑞,孙洁[6]（2019）在《细胞治疗的典范：嵌合抗原受体T细胞疗法》文中指出嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法是一种利用合成受体特异性靶向抗原的过继性细胞疗法（ACT）,目前在血液肿瘤的治疗中有极大的临床应用价值。虽然美国食品药品监督管理局（FDA）已经批准两款CAR-T药物上市,但CAR-T疗法在治疗过程中仍然存在一些副作用,如细胞因子释放综合征（CRS）、神经毒性、B细胞功能缺失等。同时,CAR-T疗法在实体瘤治疗中的效果甚微,主要原因是缺乏特异性靶点以及肿瘤微环境对CAR-T细胞功能的抑制等。文中将从CAR的结构设计、临床应用、合成生物学对新型CAR的优化来阐述应用CAR-T细胞疗法治疗肿瘤所面临的挑战及广阔前景。
刘贝贝[7]（2019）在《CAR-T治疗B细胞淋巴瘤典型病例报告及相关文献分析》文中提出肿瘤免疫治疗是激发或调动机体的免疫系统,恢复与增强患者自身的免疫监测和杀瘤功能。其具有特异性强、副作用小、安全性好等优点,可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞,是防止肿瘤患者术后复发和中晚期肿瘤治疗的重要手段之一。嵌合抗原受体修饰T的细胞（Chimeric antigen receptor T cell,CAR-T）疗法是近年来迅速发展的一种过继细胞疗法,其在治疗血液系统恶性肿瘤方面已经取得令人瞩目的成果。目前,已有两款靶向CD19的CAR-T细胞产品获得美国FDA批准上市,用于治疗血液系统肿瘤。肿瘤细胞免疫治疗的关键是选择理想的肿瘤抗原靶标,即该抗原在正常组织中不表达,而在肿瘤细胞中特异性表达,从而在免疫细胞杀伤肿瘤细胞的同时,避免正常组织或重要器官遭受攻击引发严重的毒副作用或自身免疫性疾病。相关研究表明,B细胞淋巴瘤的肿瘤细胞表面常稳定表达CD19分子,这为免疫细胞治疗提供了一个理想的肿瘤抗原靶点。恶性淋巴瘤（Malignant lymphoma,ML）起源于淋巴造血组织,多发生于淋巴结和/或淋巴结外部位淋巴组织。是淋巴组织内原有的淋巴细胞和组织细胞恶性增生而形成的肿瘤。虽然一些上市的靶向药物（如利妥昔单抗）大大的改善了患者的预后,但是仍然有20-30%的复发、难治型的患者出现耐药,进而复发,并且完全缓解率低。据有关文献报道,复发性非霍奇金瘤的总体缓解率不到20%,且患者生存期短。因此,亟待寻找新的疗法治疗复发、难治性的恶性淋巴瘤。本研究主要针对我单位进行的临床研究抗CD19 CAR-T细胞治疗胃淋巴瘤典型病例进行报告并对目前关于CAR-T细胞治疗恶性淋巴瘤的相关临床研究文献进行分析。该患者为胃弥漫大B细胞淋巴瘤,接受抗CD19 CAR-T细胞回输,长期随访显示患者CR长达25.8个月。患者在治疗过程中最常见不良反应事件为发热,轻度畏寒、寒战、头痛,低球蛋白血症等,上述症状经过对症治疗后有效缓解。目前国内外针对B细胞淋巴瘤的相关临床研究结果均显示CAR-T细胞治疗B细胞淋巴瘤具有良好的安全性和耐受性。
郭飘[8]（2019）在《利用单细胞测序技术研究骨髓源细胞在肝癌起源中的作用》文中研究指明研究背景和目的肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是一种致死率很高的恶性肿瘤,其死亡率位居全球癌症相关致死疾病的第三位。现有的诊疗手段并不能有效地改善HCC患者的预后,因此我们希望追根溯源,探寻启动HCC发生的细胞类型,为临床诊疗提供新的理论依据。研究表明,参与肝脏实质重塑的成熟肝细胞以及肝干/祖细胞均可以是HCC的起源细胞。骨髓来源的细胞(bone marrow-derived cells,BMDCs)也被证实能够进入受损肝脏参与肝细胞的再生。已有报道称BMDCs参与胃癌、皮肤癌、肺腺癌等多种恶性肿瘤的发生,但其在HCC起源中的作用尚不明确。因此,本课题旨在通过以下研究内容探讨BMDCs在HCC起源中的作用,从单细胞水平揭示HCC的发生及演变进程,为临床上HCC的诊疗提供新思路:构建经致死剂量照射和同种异体GFP+骨髓移植的二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DEN）诱导小鼠肝癌模型,分离获取肿瘤组织单细胞,分析其拷贝数变异（copy number alteration,CNA）模式,明确肝癌组织中的肿瘤细胞来源;基于CNAs构建系统发生树,探究HCC的进化模式;利用生物信息学分析方法评估DEN诱导形成的小鼠HCC和人HCC的相似性,为实现HCC基础研究向临床应用的转化提供新的理论依据。研究方法1.构建同种异体全骨髓移植后DEN诱导小鼠肝癌模型——通过鼠尾静脉将GFP转基因雄性C57BL/6小鼠的全部骨髓细胞移植入经致死剂量照射去除本身骨髓细胞的野生型雄性C57BL/6小鼠体内,在此基础上使用DEN诱导小鼠肝癌的形成。通过H&E染色和免疫组化染色明确肝脏所成肿瘤的性质。2.冰冻组织免疫荧光检测肝脏肿瘤组织中GFP和HCC特异性标志物磷脂酰肌醇聚糖3（glypican 3,GPC3）的表达情况。3.制备肿瘤组织单细胞悬液,镜下挑选单细胞,使用多重退火环状循环扩增技术进行单细胞全基因组扩增,构建DNA文库,进行低深度（0.3×）的全基因组测序。4.运用生物信息学分析方法检测单细胞的CNA模式,构建CNA事件矩阵,并以此为基础,绘制系统发生树。5.利用巢式PCR技术对肿瘤细胞基因组中的GFP序列进行验证。6.构建去除骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)的骨髓(CD45+骨髓细胞)移植模型,在此基础上使用DEN诱导小鼠肝癌的形成,从单细胞水平探讨BM-MSCs对HCC发生的影响。7.流式细胞术检测CD45磁珠富集CD45+骨髓细胞的特异性。8.构建同种异性骨髓移植后DEN诱导小鼠肝癌模型,利用免疫荧光联合荧光原位杂交技术检测HCC细胞的性染色体构成,进一步验证HCC细胞的来源。9.根据绘制的六只测序小鼠的肝癌系统发生树,探讨HCC细胞CNAs的进化模式。10.利用生物信息学分析方法在多只小鼠共享的CNA区域内寻找和人HCC突变基因相对应的同源基因,分析该模型形成的小鼠HCC和人HCC的相似性。研究结果1.成功构建了同种异体全骨髓移植后DEN诱导小鼠肝癌模型,组织病理学检测证实肝脏所成肿瘤为HCC。2.冰冻组织免疫荧光结果表明肝癌组织中部分肿瘤细胞存在GPC3和GFP的共定位,初步提示BMDCs参与HCC的发生。3.单细胞CNA分析结果显示肝癌组织中存在GFP+和GFP-的肿瘤细胞。4.GFP+和GFP-的肿瘤细胞共享部分CNA区域,提示这些细胞很可能是同一起源,即均来自于骨髓;不同的肿瘤细胞也具有一些各自独特的CNAs,说明肿瘤细胞之间也存在明显的异质性。5.巢式PCR结果证实GFP+和GFP-的肿瘤细胞基因组里均存在GFP序列,进一步说明BMDCs是小鼠HCC的主要起源。6.成功构建了去除BM-MSCs的骨髓(CD45+骨髓细胞)移植后DEN诱导小鼠肝癌模型。结果显示CD45+骨髓移植组小鼠的成瘤率明显降低,说明BM-MSCs对HCC的发生十分重要。7.CD45+骨髓移植组小鼠的肝癌组织中仍存在GFP+和GFP-的肿瘤细胞,单细胞CNA分析结果显示这两群细胞具有高度相似的CNA模式,巢式PCR也证实它们的基因组里均包含GFP序列。流式细胞术检测结果发现CD45+的供体骨髓中混有少量CD45-的骨髓细胞,提示可能是未被完全去除的BM-MSCs启动了HCC的发生。测序结果也提供了另一种可能性,即BM-MSCs可能不是参与HCC起源的唯一骨髓细胞亚群。8.成功构建了同种异性骨髓移植后DEN诱导小鼠肝癌模型。通过检测GPC3+细胞即HCC细胞的性染色体情况,发现HCC细胞均来自于供体骨髓,并未发生供体骨髓细胞和HCC细胞的稳定融合,说明在本小鼠肝癌模型中,BMDCs直接参与HCC的起源。9.在本小鼠肝癌模型中,肿瘤细胞CNAs的进化模式并非单一,而是同时存在间断进化和渐进进化这两种模式。10.生物信息学分析表明多只小鼠共享的CNA区域内存在与人HCC突变基因相对应的同源基因,体现出本实验模型所形成的小鼠HCC和人HCC具有一定的相似性。研究结论本课题成功构建了骨髓移植后DEN诱导小鼠肝癌模型,通过分析肝癌单细胞的CNA模式,发现BMDCs是HCC的主要起源细胞。我们推测化学致癌物DEN引起的肝损伤会募集BMDCs入肝,BMDCs通过转分化为肝细胞参与肝脏再生。长期暴露在这种化学致癌环境中,这些细胞更容易转变为肿瘤细胞而启动HCC的发生。在本研究模型中,BM-MSCs这一骨髓细胞亚群对HCC的发生十分重要。生物信息学分析结果表明在本小鼠肝癌模型中,渐进式和间断式的CNA进化模式同时存在;本实验模型里的小鼠HCC和人HCC具有一定的相似性。BMDCs是HCC起源细胞的发现会加深人们对HCC发病机制的认识和理解,有利于新的治疗靶点或治疗手段的产生。
朱秋娟,马梁明,王涛,任瑞瑞,谢云霞,牛燕燕,鹿育晋[9]（2018）在《自体外周造血干细胞联合活化骨髓移植治疗晚期实体瘤8例临床观察》文中认为化疗是恶性肿瘤的重要治疗手段,许多实体瘤包括淋巴瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、神经母细胞瘤对化疗相对敏感,增加化疗药物的剂量强度和采用大剂量放疗,可提高此类实体瘤的疗效。自体外周造血干细胞支持下的大剂量化放疗是指在放疗或化疗后,予以集落刺激因子动员,采集患者的外周造血干细胞,并在体外进行保存,在预处理后进行回输,以促进造血恢复及免疫功能重建,从而改善实体瘤的治疗效果,本研究对8例晚期恶性实体瘤患
石远凯,孙燕[10]（2015）在《中国恶性实体瘤自体造血干细胞移植25年回顾》文中研究表明高剂量治疗联合自体造血干细胞移植（highdose therapy/autologous hematopoietic stem cell transplantation,HDT/AHSCT）技术是恶性实体瘤治疗的一项重要手段。1978年,美国国家癌症研究所的Appelbaum等[1]首次报道了HDT联合自体骨髓移植（autologous bone marrow transplantation,ABMT）治疗Burkitt淋巴瘤,可使部分既往常规化疗疗效不
二、自体骨髓移植在实体瘤治疗中的应用研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、自体骨髓移植在实体瘤治疗中的应用研究（论文提纲范文）
（1）“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入标准 |
| 2.2 排除标准 |
| 2.3 剔除标准 |
| 2.4 退出标准 |
| 2.5 中止标准 |
| 2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
| 2.7 疗效判断 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 三组患者基线资料比较 |
| 5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
| 5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
| 5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
| 5.5 三组患者中医证候评分比较 |
| 5.6 三组患者生存质量评分比较 |
| 5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
| 2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
| 3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
| 4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
| 1 研究样本及方法 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 实验操作流程 |
| 2 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
| 3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
| 3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
| 2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医证候评分量表 |
| SF-36 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（2）靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 CAR-T的抗肿瘤研究和构建策略 |
| 1.2 人工CAR的结构 |
| 1.2.1 胞外抗原结合区 |
| 1.2.2 胞内细胞信号传导区与跨膜链接区 |
| 1.2.3 CAR-T的抗肿瘤机制及进展 |
| 1.3 CAR-T技术研究和临床应用的瓶颈 |
| 1.3.1 细胞因子风暴 |
| 1.3.2 脱靶效应 |
| 1.3.3 实体瘤应用瓶颈 |
| 1.3.4 转染载体的缺陷 |
| 1.3.5 移植物抗宿主反应与免疫细胞活性维持 |
| 1.3.6 免疫抑制作用 |
| 1.3.7 CAR-T细胞来源的限制 |
| 1.4 NK细胞为代表的非特异性免疫细胞研究 |
| 1.4.1 NK细胞的生物学特性研究 |
| 1.4.2 NK细胞对肿瘤的杀伤机理 |
| 1.5 NK细胞在治疗中的研究进展 |
| 1.5.1 针对血液肿瘤的NK细胞过继性免疫治疗研究 |
| 1.5.2 针对实体瘤的NK细胞相关免疫研究 |
| 1.6 人工CAR修饰的NK细胞构建与研究进展 |
| 1.6.1 CAR-NK分子靶点 |
| 1.6.2 CAR改造NK细胞的临床应用 |
| 1.7 CAR-NK相关的细胞因子介导的内源性NK细胞活化 |
| 1.8 非特异性免疫细胞的选择 |
| 1.8.1 CIK细胞的生物学特性和抗瘤特点研究 |
| 1.8.2 NK细胞来源与筛选 |
| 1.9 特异性分子靶点的研究与选择 |
| 1.10 本研究的目的和意义 |
| 2 CIK细胞人工CAR改造研究 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验细胞株与质粒 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 |
| 2.1.3 主要实验试剂及耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 外周血单个核细胞的分离和培养 |
| 2.2.2 CAR-T细胞与CAR-CIK细胞的体外制备和体外扩增培养 |
| 2.2.3 CAR表达载体的构建及转化 |
| 2.2.4 病毒转导与检测 |
| 2.2.5 CAR-T细胞体外扩增 |
| 2.2.6 CAR-CIK细胞体外扩增 |
| 2.2.7 细胞计数及细胞形态增殖情况观察 |
| 2.2.8 CAR-CIK和CAR-T细胞免疫表型的检测 |
| 2.2.9 CAR-CIK和CAR-T细胞体外抗肿瘤活性的研究 |
| 2.2.10 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 CAR-T细胞和CAR-CIK细胞体外制备和扩大培养 |
| 2.3.2 设计并构建Psb1576-CD19-CAR重组载体 |
| 2.3.3 扩增CD19片段重组质粒构建和慢病毒的制备 |
| 2.3.4 CD19抗原过表达靶细胞稳定株构建 |
| 2.3.5 CD19-CAR在T细胞中的转导效率和免疫表型 |
| 2.3.6 CD19-CAR在CIK细胞中的转导效率和免疫表型 |
| 2.3.7 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 2.3.8 CIK和CAR-T细胞体外靶向细胞杀伤能力分析比较 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 NK细胞系的人工CAR改造研究 |
| 3.1 实验细胞株与材料试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 目的片段的PCR扩增和胶回收 |
| 3.2.3 表达GFP、IL-15和4-1BB基因的重组载体的构建及转化 |
| 3.2.4 病毒转导 |
| 3.2.5 流式细胞技术检测CAR阳性细胞比例以及表型分析 |
| 3.2.6 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CAR-NK-92细胞杀伤活性 |
| 3.2.7 细胞因子释放能力检测 |
| 3.2.8 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 CAR-NK-92重组质粒的设计 |
| 3.3.2 CAR-NK-92重组质粒的载体构建 |
| 3.3.3 CAR-NK-92重组质粒的筛选验证与载体包装和滴度测定 |
| 3.3.4 CAR-NK-92细胞的构建与免疫表型检测 |
| 3.3.5 不同浓度条件培养基对NK细胞扩增倍数的影响 |
| 3.3.6 不同浓度的条件培养基对NK细胞扩增以及活化表型的影响 |
| 3.3.7 CD19-CAR-NK-92细胞体外靶向识别杀伤能力检测 |
| 3.3.8 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 脐血来源的NK细胞人工CAR改造研究 |
| 4.1 实验用细胞材料及试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 脐血单个核细胞分离方法 |
| 4.2.2 脐血NK细胞分离方法 |
| 4.2.3 脐血NK细胞体外扩增培养 |
| 4.2.4 CAR表达载体的改造 |
| 4.2.5 针对NK细胞改良的CD19-CAR载体转导 |
| 4.2.6 CAR-NK细胞体外优化培养 |
| 4.2.7 脐血CAR-NK细胞免疫表型及重要功能性分子表达检测 |
| 4.2.8 脐血CAR-NK细胞对靶细胞的细胞毒作用检测 |
| 4.2.9 细胞因子释放能力检测 |
| 4.2.10 体内动物实验 |
| 4.2.11 过氧化物酶染色法 |
| 4.2.12 细胞总RNA提取与qRT-PCR检测基因表达水平 |
| 4.2.13 免疫印迹实验 |
| 4.2.14 细胞单基因测序与生信分析 |
| 4.2.15 临床研究试验前期方案设计 |
| 4.2.16 统计学数据处理分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 CAR-NK重组质粒的构建 |
| 4.3.2 脐血来源的NK细胞筛选与扩增培养 |
| 4.3.3 重组CD19-CAR载体的转导及转导效率检测 |
| 4.3.4 CD19-CAR-NK细胞分子表达 |
| 4.3.5 NK细胞对靶细胞杀伤作用的测定 |
| 4.3.6 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 4.3.7 CD19-CAR-NK细胞的动物体内药效检测 |
| 4.3.8 CD19-CAR-NK细胞的动物体内安全性检测 |
| 4.3.9 CD19-CAR-NK细胞的动物模型中药代动力学 |
| 4.3.10 CD19-CAR-NK细胞的高通量测序分析 |
| 4.3.11 CD19-CAR-NK细胞的基因功能分类分析 |
| 4.3.12 CD19-CAR-NK细胞的细胞生物学调控 |
| 4.3.13 临床试验样本病理学分析 |
| 4.3.14 CD19-CAR-NK细胞临床预实验研究 |
| 4.3.15 CD19-CAR-NK细胞临床研究前患者样本分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 讨论 |
| 5.1 非特异性免疫细胞人工CAR的构建及细胞生物学研究 |
| 5.2 体外非特异性细胞扩增活化体系的优化 |
| 5.3 非特异性免疫细胞的选择与理论依据 |
| 5.3.1 CIK细胞方案 |
| 5.3.2 NK-92细胞方案 |
| 5.3.3 脐血NK细胞方案 |
| 5.4 CAR-NK的体内药效和基因表达谱分析 |
| 5.5 超越CAR-T的新型CAR-NK的优势与发展 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
| 博士学位论文修改情况确认表 |
（3）多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 多能干细胞分化再生的T细胞体内抗肿瘤评估 |
| 1.1 引言 |
| 1.1.1 癌症细胞免疫疗法概述 |
| 1.1.2 CAR-T细胞免疫疗法概述 |
| 1.1.3 再生T细胞的研究进展 |
| 1.2 实验材料和实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 实验试剂 |
| 1.2.3 实验器材 |
| 1.2.4 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 iR9 mESCs体外定向分化获得造血祖细胞iHPCs |
| 1.3.2 iR9 mESCs来源的iHPCs移植免疫缺陷鼠再生T淋巴细胞 |
| 1.3.3 CD19-CAR iT细胞体内肿瘤杀伤功能验证策略 |
| 1.3.4 CD19-CAR iT可有效清除肿瘤模型鼠外周血中的B淋巴细胞 |
| 1.3.5 CD19-CAR iT可有效消除肿瘤模型鼠的肿瘤负荷 |
| 1.3.6 CD19-CAR iT可有效延长肿瘤模型鼠的生存期 |
| 1.3.7 CD19-CAR iT细胞在小鼠体内显示出增殖和激活能力 |
| 1.4 总结和讨论 |
| 第2章 多能干细胞再生可移植髓系细胞研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 髓系细胞的发育和调控 |
| 2.1.2 再生髓系细胞的现状和进展 |
| 2.1.3 髓系细胞再生新思路 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验器材 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 iRunx1-P2A-Hoxa10-EGFP mES打靶细胞系(iR10 mESCs)构建成功 |
| 2.3.2 iR10 mESCs体外诱导分化生成造血祖细胞 |
| 2.3.3 基质细胞OP9-DL1较MS5-DL1更能促进造血祖细胞产生 |
| 2.3.4 iR10 mESCs来源iHPCs移植Rag1~(-/-)小鼠能够再生髓系细胞 |
| 2.3.5 受体鼠各组织中能检测到再生髓系细胞 |
| 2.3.6 受体鼠骨髓中检测到再生的髓系祖细胞 |
| 2.3.7 iR10 mESCs来源髓系细胞在体内短期存在 |
| 2.3.8 野生型受体鼠体内再生髓系细胞 |
| 2.4 总结和讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（4）自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 自体造血干细胞的动员与采集 |
| 2.3 预处理方案 |
| 2.4 造血干细胞回输 |
| 2.5 并发症的预防及支持治疗 |
| 2.6 移植后维持治疗 |
| 2.7 主要观察指标 |
| 2.8 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.0 基本情况 |
| 3.1 造血重建 |
| 3.2 移植相关并发症 |
| 3.2.1 感染 |
| 3.2.2 其他早期并发症 |
| 3.2.3 远期并发症 |
| 3.3 随访 |
| 3.3.1 恶性淋巴瘤患者生存分析 |
| 3.3.2 多发性骨髓瘤患者生存分析 |
| 3.3.3 急性白血病患者生存分析 |
| 3.3.4 其他 |
| 3.4 影响患者移植后OS、PFS的单因素分析 |
| 3.5 影响患者移植后OS、PFS的多因素分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 研究不足及展望 |
| 6.1 研究不足 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
（5）靶向B7-H3的CAR-T细胞的构建及功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肿瘤免疫疗法 |
| 1.2 过继性细胞疗法 |
| 1.3 CAR-T疗法 |
| 1.3.1 CAR的构成 |
| 1.3.2 CAR-T疗法的副反应 |
| 1.3.3 CAR-T疗法在实体瘤的治疗中的挑战 |
| 1.3.4 CAR-T疗法的临床进展 |
| 1.4 B7-H3 分子 |
| 1.4.1 B7-H3 分子的结构和分布 |
| 1.4.2 B7-H3 分子的功能 |
| 1.4.3 靶向B7-H3 分子免疫疗法的临床进展 |
| 1.5 本文的结构安排和意义 |
| 1.5.1 本文的结构安排 |
| 1.5.2 本文的意义 |
| 第二章 靶向B7-H3 分子的CAR的构建与CAR-T细胞的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器设备 |
| 2.2.1 主要的实验材料和试剂 |
| 2.2.2 主要的实验仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 常用试剂的配方 |
| 2.3.2 慢病毒表达载体的构建 |
| 2.3.3 慢病毒表达载体的验证 |
| 2.3.4 慢病毒的制备 |
| 2.3.5 CAR-T细胞的制备 |
| 2.3.6 流式细胞术检测 |
| 2.3.7 BCA法测定蛋白浓度 |
| 2.3.8 蛋白质免疫印迹法检测蛋白的表达 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 anti-B7H3-CAR示意图及慢病毒质粒图谱 |
| 2.4.2 慢病毒表达载体质粒的鉴定结果 |
| 2.4.3 anti-B7H3-CAR-T细胞的制备条件优化结果 |
| 2.4.4 anti-B7H3-CAR-T细胞的制备和鉴定结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 靶向B7-H3 分子的CAR-T细胞的功能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和仪器设备 |
| 3.2.1 主要实验材料和试剂 |
| 3.2.2 主要实验仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞培养 |
| 3.3.2 构建c DNA文库 |
| 3.3.3 慢病毒构建稳转细胞系 |
| 3.3.4 CAR-T细胞杀伤肿瘤细胞实验 |
| 3.3.5 ELISA法检测细胞因子的浓度 |
| 3.3.6 异种移植小鼠模型 |
| 3.3.7 HE染色和IHC实验 |
| 3.3.8 统计学方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 靶细胞B7H3-SGC细胞的荧光展示结果 |
| 3.4.2 anti-B7H3-CAR-T细胞对B7H3-SGC细胞的杀伤作用 |
| 3.4.3 细胞因子分泌情况 |
| 3.4.4 anti-B7H3-CAR-T细胞对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制情况 |
| 3.4.5 anti-B7H3-CAR-T细胞在肿瘤组织中的浸润情况 |
| 3.4.6 anti-B7H3-CAR-T细胞对正常肝和肾组织无明显杀伤作用 |
| 3.4.7 anti-B7H3-CAR-T细胞能够延长荷瘤裸鼠的生存期 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 论文总结 |
| 4.2 论文创新 |
| 4.3 论文不足 |
| 4.4 论文展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（6）细胞治疗的典范：嵌合抗原受体T细胞疗法（论文提纲范文）
| 1 细胞治疗的分类及发展 |
| 1.1 细胞治疗的分类 |
| 1.2 CAR-T细胞治疗的发展 |
| 2 CAR的设计及临床应用 |
| 2.1 CAR的设计 |
| 2.2 CAR-T疗法的临床应用 |
| 2.2.1 CAR-T细胞在血液肿瘤中的应用 |
| 2.2.2 CAR-T疗法在治疗实体瘤中的应用 |
| 2.3 合成生物学方法优化CAR的设计 |
| 2.3.1 控制CAR-T细胞的毒性和活性 |
| 2.3.2 增强CAR-T细胞肿瘤识别的特异性 |
| 3 CAR-T治疗的前景 |
（7）CAR-T治疗B细胞淋巴瘤典型病例报告及相关文献分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 病例报告及临床研究简介 |
| 引言 |
| 第一章 病例报告 |
| 1.1 病史介绍 |
| 1.2 治疗经过 |
| 第二章 讨论 |
| 第三章 结论 |
| 第四章 本研究不足之处 |
| 第五章 临床研究简介 |
| 5.1 试验药物 |
| 5.2 适应症 |
| 5.3 研究目的 |
| 5.4 研究流程 |
| 5.5 研究设计类型 |
| 5.5.1 细胞剂量 |
| 5.5.2 试验设计方法 |
| 5.6 患者与方法 |
| 5.6.1 受试者选择 |
| 5.6.2 化疗预处理 |
| 5.6.3 细胞回输 |
| 5.6.4 不良反应的处理 |
| 5.6.5 统计学方法 |
| 5.6.6 疗效评价 |
| 第一部分 参考文献 |
| 第二部分 综述嵌合抗原受体修饰T细胞治疗在恶性实体肿瘤中的研究进展 |
| 1.CAR-T的应用原理 |
| 2.CAR-T的结构 |
| 3.CAR-T的发展历程 |
| 4.CAR-T的制备流程 |
| 5.CAR-T在实体瘤中靶向抗原的选择及临床应用 |
| 6.CAR-T的机遇与挑战 |
| 第二部分 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 |
| 攻读硕士学位期间参与课题 |
| 攻读硕士学位期间取得证书 |
| 项目资金支持 |
（8）利用单细胞测序技术研究骨髓源细胞在肝癌起源中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、骨髓来源的细胞参与肝癌起源 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂耗材 |
| 1.1.3 主要溶液配制 |
| 1.1.4 主要引物序列 |
| 1.1.5 主要实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 成功构建骨髓移植后DEN诱导小鼠肝癌模型 |
| 1.2.2 冰冻组织免疫荧光初步提示肝癌的骨髓起源 |
| 1.2.3 分离获取小鼠肝癌组织单细胞 |
| 1.2.4 单细胞全基因组扩增后质检和测序用DNA文库质检 |
| 1.2.5 小鼠肝癌单细胞的CNA模式 |
| 1.2.6 小鼠单细胞的CNA事件矩阵和系统发生树的构建 |
| 1.2.7 小鼠肝癌单细胞基因组中GFP序列的存在情况 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 BMDCs参与多种实体瘤的发生 |
| 1.3.2 利用单细胞测序技术进行肿瘤研究的必要性 |
| 1.4 小结 |
| 二、参与肝癌起源的骨髓细胞类型研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂耗材 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.1.4 主要引物序列 |
| 2.1.5 主要实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 去除BM-MSCs对小鼠肝癌成瘤率的影响 |
| 2.2.2 冰冻组织免疫荧光初步提示肝癌的骨髓起源 |
| 2.2.3 全骨髓移植组小鼠肝癌单细胞的CNA模式 |
| 2.2.4 全骨髓移植组小鼠单细胞的CNA事件矩阵和系统发生树的构建 |
| 2.2.5 全骨髓移植组小鼠肝癌单细胞基因组中GFP序列的存在情况 |
| 2.2.6 全骨髓移植组小鼠肝癌揭示HCC发生早期的CNA模式 |
| 2.2.7 CD45~+骨髓移植组小鼠肝癌单细胞的CNA模式 |
| 2.2.8 CD45~+骨髓移植组小鼠单细胞的CNA事件矩阵和系统发生树的构建 |
| 2.2.9 CD45~+骨髓移植组小鼠肝癌单细胞基因组中GFP序列的存在情况 |
| 2.2.10 流式细胞术分析CD45 磁珠富集的特异性 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 BM-MSCs在 HCC发生发展过程中具有双向作用 |
| 2.3.2 BM-MSCs在临床肝癌治疗中的应用前景和局限性 |
| 2.4 小结 |
| 三、骨髓来源的细胞参与肝癌起源的机制研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂耗材 |
| 3.1.3 主要溶液配制 |
| 3.1.4 主要实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 免疫荧光-荧光原位杂交技术检测细胞融合的可能性 |
| 3.2.2 小鼠肝癌单细胞CNAs揭示肝癌的进化模式 |
| 3.2.3 骨髓移植后DEN诱导形成的小鼠HCC和人HCC具有一定相似性 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 BMDCs相关细胞融合促进肿瘤进展 |
| 3.3.2 DEN诱导小鼠肝癌模型的临床相关性 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述原发性肝癌起源细胞的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）自体外周造血干细胞联合活化骨髓移植治疗晚期实体瘤8例临床观察（论文提纲范文）
| 1 资料和方法 |
| 1.1 临床资料: |
| 1.2 自体外周造血干细胞的动员、采集、冻存: |
| 1.3 自体骨髓采集及体外活化: |
| 1.4 预处理方案: |
| 1.5 活化骨髓细胞及外周造血干细胞回输: |
| 1.6 随访观察: |
| 1.7 疗效评价: |
| 2 结果 |
| 2.1 外周造血干细胞移植回输的细胞量: |
| 2.2移植后造血恢复情况即中性粒细胞及血小板的植活时间: |
| 2.3 预处理相关的毒性: |
| 2.4 疗效及随访: |
| 3 讨论 |
四、自体骨髓移植在实体瘤治疗中的应用研究（论文参考文献）
- [1]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [2]靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究[D]. 曹韪凡. 东北林业大学, 2020
- [3]多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究[D]. 吕萃. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [4]自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究[D]. 杨文娟. 甘肃中医药大学, 2020(10)
- [5]靶向B7-H3的CAR-T细胞的构建及功能研究[D]. 徐欢天. 东南大学, 2020(01)
- [6]细胞治疗的典范：嵌合抗原受体T细胞疗法[J]. 钱丽玲,陈蒋庆,吴晓燕,荆瑞瑞,孙洁. 生物工程学报, 2019(12)
- [7]CAR-T治疗B细胞淋巴瘤典型病例报告及相关文献分析[D]. 刘贝贝. 深圳大学, 2019(09)
- [8]利用单细胞测序技术研究骨髓源细胞在肝癌起源中的作用[D]. 郭飘. 天津医科大学, 2019(02)
- [9]自体外周造血干细胞联合活化骨髓移植治疗晚期实体瘤8例临床观察[J]. 朱秋娟,马梁明,王涛,任瑞瑞,谢云霞,牛燕燕,鹿育晋. 山西医药杂志, 2018(23)
- [10]中国恶性实体瘤自体造血干细胞移植25年回顾[J]. 石远凯,孙燕. 中华医学杂志, 2015(10)