一、血管平滑肌细胞的内皮依赖性超极化(英文)（论文文献综述）
郭鹏美[1]（2021）在《大鼠冠状动脉对细胞外酸中毒收缩性增强与其血管平滑肌细胞TMEM16A/ANO1高活性有关》文中提出研究背景:酸中毒（Acidosis）是一个最常见,也是一个最棘手的临床问题。严重的酸中毒不仅可以危害人类健康,甚至可以威胁人们的生命。酸中毒对心肌组织和心脏有明显的损害作用,对基础血管张力和血管收缩-舒张运动也有很大的影响,前期研究发现酸化细胞外液和细胞外酸中毒（Extracellular acidosis,ECA,定义为细胞外p H=6.8）只收缩大鼠冠状动脉（Rat coronary artery,RCA）,对其他血管基础肌张力无显着影响,但是细胞外酸中毒的作用机制至今不明确。充分理解酸中毒导致的损伤机制是恰当的预防和准确的治疗酸中毒的前提条件。TMEM16A编码的ANO1,是一种钙激活的氯通道(Ca2+-activated Cl-channel,Ca CC)。研究发现,CaCC在血管张力调节、血管平滑肌细胞增殖、上皮细胞分泌、肿瘤细胞活力等环节中均具有极其重要的作用。细胞外酸中毒对冠状动脉平滑肌细胞（Artery smooth muscle cell,ASMC）Ca CC活性的影响及其血管肌张力调节的关系鲜少有人报道。本课题旨在研究细胞外酸中毒收缩RCA与细胞外钙内流、细胞内钙释放、Ca CC之间的关系。从而进一步加深对酸中毒机制的认识,为临床治疗酸中毒提供理论基础。本课题分为四个部分:第一部分钙激活氯通道在细胞外酸中毒收缩大鼠冠状动脉中的作用目的:1.观察细胞外酸中毒对大鼠不同状态下的不同动脉肌张力的影响。2.观察细胞外酸中毒影响RCA张力是否与Ca CC有关。3.观察细胞外酸中毒影响RCA张力是否与细胞外钙内流和细胞内钙释放有关。方法:1.取正常Sprague-Dawley大鼠（12周龄,体重290-310 g）,腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉,断头放血处死,快速分离出RCA、大鼠脑基底动脉（Rat cerebral basilar artery,CBA）、肾内动脉（Rat intrarenal artery,IRA）、肠系膜动脉（Rat mesenteric artery,MA）、肺内动脉（Rat intrapulmonic artery,IPA）、肌内动脉（Rat intramuscular artery,IMA）,将小动脉剪成长度大约2 mm的动脉血管环,并固定在DMT血管张力测定仪上,随后对血管环进行张力的标化,检测血管环对收缩剂和舒张剂的血管运动反应性,通过观察血管环对乙酰胆碱的舒张反应确定去内皮的成功性,最后选取反应性良好,成功去内皮的血管环进行下一步实验。2.观察不同浓度的细胞外酸化（Extracellular p H,p Ho=7.2、7.0、6.8、6.6、6.4）对静息状态和血栓素A2类似物（U46619,0.3μmol/L）、KCl（30 mmol/L）预收缩状态的RCA、CBA、IRA、MA、IPA和IMA的肌张力的影响。3.通过预孵氯通道抑制剂尼氟酸（Niflumic Acid,NFA）和5-硝基-2,3-苯酚丙胺甲酸盐（5-nitro-2-（3-phenylpropylamino）benzoic acid,NPPB）、Ca CC抑制剂T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01和苯溴马隆（Benzbromarone）、无氯浴液（去氯）、ANO1抗体（1:100）来研究Ca CC在细胞外酸中毒收缩RCA中的作用。4.通过预孵L-型电压门控钙通道抑制剂硝苯地平（Nifedepine）和肌质网钙释放通道抑制剂利阿诺定（Ryanodine）和丁卡因（Tetracaine）来研究细胞外钙内流和细胞内钙释放在细胞外酸中毒收缩RCA中的作用。结果:1.细胞外酸化（p Ho=7.2、7.0、6.8、6.6、6.4）浓度依赖性地收缩静息状态和U46619、KCl预收缩状态的RCA,但是对CBA、IRA、MA、IPA和IMA的肌张力无显着性影响。2.细胞外酸中毒引起的RCA的收缩幅度为3.74±1.19 m N,氯通道抑制剂（NFA和NPPB）和Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01和苯溴马隆)均浓度依赖性地抑制细胞外酸中毒导致的RCA收缩,其IC50值分别为9.74±0.24、10.03±0.32、3.04±0.48、2.45±0.54和2.84±0.12μmol/L。去氯也时间依赖性地抑制细胞外酸中毒导致的RCA收缩。ANO1抗体（1:100）对细胞外酸中毒导致的RCA收缩抑制率为41.17±18.64%。3.细胞外酸中毒促发由细胞内钙释放和外钙内流引起的RCA的收缩,收缩幅度分别为2.01±0.61 m N和4.52±1.66 m N。L-型电压门控钙通道抑制剂硝苯地平抑制细胞外酸中毒导致的RCA收缩,其IC50值为9.85±0.44 nmol/L。肌质网钙释放通道抑制剂利阿诺定50μmol/L和丁卡因1 mmol/L均不同程度地抑制细胞外酸中毒导致的RCA收缩,其中对由细胞内钙释放引发的收缩幅度抑制率分别为90.93±3.50%和87.27±7.04%。第二部分细胞外酸中毒对大鼠动脉平滑肌细胞的钙激活氯电流的影响目的:1.观察细胞外酸中毒对RCA、CBA、IRA、MA的ASMC的钙激活氯电流和膜电位的作用。2.观察Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01)、去氯和ANO1抗体对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC钙激活氯电流改变作用的影响。3.观察L-型电压门控钙通道抑制剂（硝苯地平）和肌质网钙释放通道抑制剂（利阿诺定和丁卡因）对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC钙激活氯电流改变作用的影响。方法:1.将分离好的去内皮血管分别转移到总体积1 m L的细胞酶解液I,恒温37℃,持续通入O2,30 min左右,待血管组织变成松软状。再将细胞酶解液I中的血管转移到总体积0.5 m L细胞酶解液II,恒温37℃,持续通入O2,5 min左右,待血管略微变细。之后加入到细胞酶解液II中与其相同体积的0.5 m L的37℃分离液,继续3 min左右,待血管变的更细,用玻璃滴管轻轻吹打血管,使细胞机械分离。最后加入4℃的分离液终止酶解作用,并以800 rpm的转速,6 min离心1次,去除上清液再次加入4℃的分离液,反复离心2次,去除残留的酶。去掉上清液,留1 m L细胞液用于全细胞膜片钳的实验。2.采用全细胞膜片钳技术,观察细胞外酸中毒对RCA、CBA、IRA、MA的ASMCs的钙激活氯电流的作用。3.观察Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01 10μmol/L、Ca CCinh-A01 10μmol/L)、ANO1抗体（1:100）孵育及去氯对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC的钙激活氯电流的改变作用的影响。4.采用全细胞膜片钳技术,观察细胞外液不同浓度的Ca2+、L-型电压门控钙通道抑制剂（硝苯地平30 nmol/L）孵育和肌质网钙释放通道抑制剂（利阿诺定50μmol/L和丁卡因1 mmol/L）孵育对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC的钙激活氯电流的改变作用的影响。5.采用全细胞膜片钳技术,观察细胞外酸中毒对RCA、CBA、IRA、MA的ASMCs膜电位的作用,以及ANO1抗体（1:100）对其作用的影响。结果:1.细胞外酸中毒增大RCA ASMC的钙激活氯电流,但是对CBA、IRA、MA的ASMCs的钙激活氯电流作用无显着性影响。2.Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01 10μmol/L、Ca CCinh-A01 10μmol/L)均抑制细胞外酸中毒导致的RCA ASMC的钙激活氯电流的增大作用,在电压+100 m V时,抑制率分别为78.95±20.66%和73.39±18.02%,在电压-100 m V时,抑制率分别为87.49±32.33%和55.50±15.25%。去氯和ANO1抗体（1:100）也抑制细胞外酸中毒导致的RCA ASMC的钙激活氯电流的增大作用,在电压+100 m V时,抑制率分别为99.44%±2.54%和91.54±7.66%,在电压-100 m V时,抑制率分别为99.75%±1.74%和91.61±18.20%。3.L-型电压门控钙通道抑制剂（硝苯地平30 nmol/L）在-100 m V和+100 m V时对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC的钙激活氯电流的增大作用的抑制率分别为86.63±15.70%和82.29±12.37%。在细胞外液无钙的条件下,肌质网钙释放通道抑制剂（利阿诺定50μmol/L和丁卡因1 mmol/L）均不同程度地抑制细胞外酸中毒导致的RCA ASMC的钙激活氯电流的增大作用,在电压+100 m V时,抑制率分别为90.88±8.81%和95.21±11.11%,在电压-100 m V时,抑制率分别为96.15±20.41%和89.68±11.00%。4.细胞外酸中毒对RCA、CBA、IRA、MA的ASMCs膜电位均产生去极化作用,但是对RCA ASMC膜电位去极化作用更强。ANO1抗体（1:100）,对细胞外酸中毒引起的RCA ASMC膜电位的去极化作用抑制79.16±5.25%。第三部分细胞外酸中毒对大鼠动脉平滑肌细胞内Ca2+和Cl-浓度的影响目的:1.观察细胞外酸中毒对RCA、CBA、IRA、MA的ASMCs内Cl-和Ca2+浓度的作用。2.观察去氯对RCA ASMC内Cl-浓度的影响。3.观察Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01)、去氯和ANO1抗体对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内Cl-浓度改变作用的影响。4.观察肌质网钙释放通道抑制剂（利阿诺定和丁卡因）和ANO1抗体对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内Ca2+浓度改变作用的影响。方法:1.将分离好的ASMC放在浴槽里使其贴壁,分别孵育Cl-探针SPQ和Ca2+探针Fluo-4-AM 1 h,实验中选取背景处标记为背景荧光值（F0）,细胞上的标记为测量荧光值（F）,细胞内Cl-的测定激发波长和发射波长分别为350 nm和470 nm,细胞内Ca2+的测定激发波长和发射波长分别为488 nm和>510 nm,通过NIS-Elements AR软件观察和分析不同干预对细胞内Cl-和Ca2+浓度的影响。根据公式Cl-（mol）=[F0/（F-F0）-1]/Ksv,Ksv=7.61,计算细胞内Cl-的浓度。2.通过Cl-探针观察细胞外酸中毒对RCA、CBA、IRA、MA的ASMCs内Cl-浓度的作用。3.观察去氯1 h对细胞内Cl-浓度的影响。4.通过预孵Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01 10μmol/L、Ca CCinh-A01 10μmol/L),去氯、预孵ANO1抗体（1:100）观察其对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内的Cl-浓度改变作用的影响。5.通过Ca2+探针观察细胞外酸中毒对RCA ASMC内钙释放和细胞外钙内流引起的细胞内Ca2+浓度的影响。6.预孵肌质网钙释放通道抑制剂（利阿诺定50μmol/L和丁卡因1 mmol/L）观察其对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC由细胞内钙释放和细胞外钙内流引起的细胞内Ca2+浓度改变的影响。预孵ANO1抗体（1:100）观察其对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内Ca2+浓度改变的影响。结果:1.细胞外酸中毒降低RCA ASMC内的Cl-浓度,但是对CBA、IRA、MA的ASMCs内的Cl-浓度无显着性影响。2.Ca CC抑制剂(T16Ainh-A01 10μmol/L、Ca CCinh-A01 10μmol/L)均不同程度地抑制细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内Cl-浓度的降低作用,其抑制率分别为64.29±12.16%和57.14±8.45%。去氯降低细胞内Cl-浓度,去氯和ANO1抗体（1:100）抑制细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内Cl-浓度的降低作用,其抑制率分别为75.00±7.75%和92.36±8.25%。3.细胞外酸中毒可以通过细胞内钙释放和细胞外钙内流升高RCA ASMC内的Ca2+浓度。4.肌质网钙释放通道抑制剂（利阿诺定50μmol/L和丁卡因1 mmol/L）对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC由内钙释放引起的细胞内Ca2+浓度升高的抑制率分别为90.93±19.56%和87.27±7.04%,由外钙内流引起的细胞内Ca2+升高的抑制率分别为20.56±14.67%和40.63±6.62%。ANO1抗体（1:100）对细胞外酸中毒导致的RCA ASMC内的Ca2+增大作用的抑制率为75.45±2.39%。第四部分TMEM16A/ANO1在大鼠不同动脉及其平滑肌细胞中的表达差异目的:1.观察TMEM16A/ANO1在RCA、CBA、IRA、MA平滑肌层及其ASMCs的表达差异。方法:1.将分离好的动脉血管及其ASMCs染色,做免疫荧光观察ANO1蛋白在RCA、CBA、IRA、MA平滑肌层及其ASMCs的表达差异,用多个分离好的动脉血管去内皮后提取m RNA或者总蛋白,通过实时荧光定量PCR和Western blotting实验分析TMEM16A/ANO1在RCA、CBA、IRA、MA平滑肌层的表达差异。结果:1.TMEM16A m RNA和ANO1蛋白在RCA、CBA、IRA、MA平滑肌层及其酶解分离的ASMCs上均有表达,但是荧光密度、实时荧光定量PCR结果和Western blotting的灰度比值均显示TMEM16A m RNA和ANO1蛋白在RCA平滑肌层及其酶解分离的ASMC上分布含量较CBA、IRA、MA平滑肌层及其ASMCs更加丰富。全文结论:1.细胞外酸中毒收缩RCA,增大RCA ASMC的钙激活氯电流,降低RCA ASMC内Cl-浓度,升高RCA ASMC内的Ca2+浓度,这些作用均被氯通道抑制剂、Ca CC抑制剂、去氯和钙拮抗剂所抑制。细胞外酸中毒对CBA、IRA、MA的肌张力和相应ASMCs的钙激活氯电流和细胞内Cl-浓度无显着性影响。2.细胞外酸中毒去极化RCA、CBA、IRA、MA的ASMCs的膜电位,但是对RCA ASMC的膜电位去极化作用更强。3.TMEM16A/ANO1在RCA、CBA、IRA、MA平滑肌及其对应的ASMC上均有表达,但是在RCA平滑肌层以及ASMC上含量最为丰富,而且ANO1抗体显着地抑制细胞外酸中毒导致的RCA及其ASMC在本次实验中观察到的所有结果。
王野[2]（2021）在《前列腺素类物质参与了肾内动脉平滑肌细胞内向整流K+通道的调节》文中认为第一部分影响BaCl2收缩大鼠肾内动脉的因素目的:1.研究不同类型的钾通道阻滞剂对离体大鼠肾内动脉（rat intrarenal arteries,RIRAs）血管环张力的影响:观察内向整流性钾通道（inward rectifier potassium channels,Kir）抑制剂BaCl2、电压依赖性钾通道（voltage-dependent K+channels,KV）抑制剂4-氨基吡啶（4-aminopyridine,4-AP）、钙激活钾通道(calcium-activated K+channels,KCa)抑制剂四乙胺（tetraethylamine,TEA）、ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive K+channels,KATP)抑制剂格列本脲（glibenclamide,GLI）对RIRAs肌张力的影响。2.观察内皮及各种抑制剂对BaCl2收缩RIRAs的影响:分别观察内皮剥脱、一氧化氮合酶（nitricoxide synthase,NOS）抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲基酯（NG-nitro-L-arginine methylester ester,L-NAME）、环氧化酶（cycloxygenase,COX）非选择性抑制剂吲哚美辛（indometacin,INDO）、COX1抑制剂S2064和COX2抑制剂N194及血栓素-前列腺素受体（thromboxane-prostanoid receptor,TPR）拮抗剂S18886和L-655240对BaCl2收缩RIRAs的影响。3.观察各种缩血管剂对BaCl2收缩RIRAs的影响:首先利用氯化钾（KCl,30m M）、血栓素A2类似物（U46619,0.03（?）M）或苯肾上腺素（PE,0.1（?）M）使血管产生轻微的预收缩（相当于最大收缩的5～20%）,然后在预收缩的基础上观察BaCl2对RIRAs血管环肌张力的影响。方法:1.雄性成年SD大鼠（280～320 g）经腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉后断头放血处死,立即打开腹腔取出肾脏组织,并将其放入4℃、p H=7.40的HEPES液中。在显微镜下分离出第二、三级肾内动脉血管,血管内径约为150～280（?）m,将分离出的血管分割成长度为2 mm的血管环,之后用两根直径为40（?）m的不锈钢钢丝（长度为2 cm）轻柔穿过血管环,尽量避免碰到血管壁,减少内皮的损伤,然后将其固定在微血管环张力记录仪（DMT）的浴槽内（用钢丝紧贴管壁反复轻轻摩擦血管可达到去除内皮的目的）,之后调节两根钢丝间的距离对血管环进行标准化,使血管环达到相当于在体血压为80 mm Hg时的前负荷。浴槽中的血管孵育在37℃、p H=7.40、含95%O2+5%CO2饱和的正常生理盐水（PSS）中稳定30 min,用60m M KCl连续刺激血管2次,若前后两次血管收缩强度差异小于10%,且收缩强度大于2 m N,说明血管活性良好,可以正式进行实验。2.待血管稳定后,向血管浴槽内依次分别累加BaCl2（0.03、0.1、0.3、1.0 m M）、4-AP（0.03、0.1、0.3、1.0 m M）、TEA（0.03、0.1、0.3、1.0 m M）、GLI（3、10、30、100（?）M）并记录张力变化。当上一浓度的收缩达坪台后方可进行下一浓度的累加。实验结果以60 m M KCl引起的最大收缩为100%构建浓度-收缩曲线,观察这4种类型的钾通道阻滞剂对血管张力产生的影响。3.分别观察有内皮和去内皮的RIRAs对BaCl2浓度-收缩量效曲线的影响,以BaCl2的最大收缩为100%制作浓度-收缩曲线,计算各浓度使血管收缩的百分比,观察内皮对BaCl2收缩肾内动脉血管的影响。4.血管在浴槽中稳定30 min中后,重复构建BaCl2（0.03、0.1、0.3、1.0 m M）的浓度-收缩曲线,当收缩曲线可重复时,在下次构建BaCl2浓度-收缩曲线前10 min分别在浴槽PSS中加入抑制剂INDO（0.01 m M）、L-NAME（0.01 m M）、S2064（10（?）M）、N194（0.1（?）M）或收缩剂PE（0.1（?）M）、KCl（30 m M）、U46619（0.03（?）M）或INDO+PE、L-NAME+PE。结果以预孵抑制剂或收缩剂前BaCl2引起的最大收缩为100%来计算抑制剂和收缩剂或它们的组合对0.1 m M BaCl2诱导的收缩造成的影响。5.在浴槽PSS中分别加入U46619（0.03、0.1、0.3、1.0（?）M）、PE（0.03、0.1、0.3、1.0（?）M）、KCl（20、40、60、80 m M）、BaCl2（0.03、0.1、0.3、1.0 m M）、PE（0.1（?）M）+BaCl2（0.03、0.1、0.3、1.0 m M）,当血管收缩曲线可重复时,用正常PSS液冲洗血管使其恢复基础张力,之后让血管预孵在含TPR拮抗剂L-655240（1.0（?）M）和S18886（10（?）M）的PSS中,10 min后重新构建上述浓度-收缩曲线。以预孵L-655240和S18886前各种收缩剂所引起的最大收缩为100%,观察预孵L-655240和S18886后不同的收缩剂对血管张力变化影响。结果:1.0.03～1.0 m M BaCl2、4-AP、TEA均可浓度依赖性地收缩RIRAs,而GLI在100（?）M时对血管张力没有明显影响。BaCl2（1 m M）、4-AP（1 m M）、TEA（1m M）、GLI（0.1 m M）引起的收缩分别为6.75±0.86 m N、1.03±0.54 m N、1.87±0.75 m N、0.35±0.21m N,分别相当于60 m M KCl引起最大收缩的70.5%、10.7%、18.2%、3.6%（P<0.05）,与4-AP、TEA、GLI相比,BaCl2诱导RIRAs收缩的能力更强。2.内皮剥脱使0.1 m M BaCl2引起的收缩从1.07±0.42 m N增加到2.01±0.03m N（P<0.05）。L-NAME（0.01 m M）预孵使BaCl2收缩曲线上移,使0.1 m M BaCl2诱导的收缩增加到3.15±0.24 m N（P<0.05）。INDO（0.01 m M）使BaCl2收缩曲线右移,并使0.1 m M BaCl2诱导的收缩降低到0.21±0.08 m N（P<0.05）。S2064（0.01 m M）、N194（0.1（?）M）分别使0.1m M BaCl2诱导的RIRAs的收缩降低到0.27±0.11 m N、0.39±0.24 m N（P<0.05）。3.血管收缩剂PE（0.1（?）M）、KCl（30 m M）、U46619（0.03（?）M）的轻度预刺激使0.1m M BaCl2诱导的收缩分别增加到2.47±0.84 m N、2.37±0.11 m N、3.10±1.13 m N（P<0.05）。PE+L-NAME使0.1 m M BaCl2诱导的收缩增加到3.99±1.19 m N,PE+INDO将0.1 m M BaCl2诱导的收缩降低到1.24±0.34 m N（P<0.05）。4.TPR拮抗剂显着性抑制了TPR激动剂U46619引起的收缩,但对PE或KCl诱导的收缩抑制作用较弱。在静息状态下,L-655240和S18886分别使1 m M BaCl2诱导的收缩从6.03±1.78 m N减少到3.14±0.67 m N和3.89±1.15 m N（P<0.05）。此外,在PE轻度预刺激的情况下,L-655240和S18886分别使0.1 m M BaCl2诱导的收缩从2.48±1.09 m N降低到0.78±0.54 m N和1.56±0.63 m N（P<0.05）。结论:1.0.03～1.0 m M BaCl2可以浓度依赖性地收缩RIRAs。2.不同的血管收缩剂在低浓度的情况下显着增强了BaCl2阻断Kir通道所诱导的RIRAs的收缩。3.在静止或受刺激的RIRAs中,COX抑制剂和TPR拮抗剂均可显着性抑制BaCl2诱导的RIRAs收缩,而NOS抑制剂和内皮剥脱则增强这种收缩。第二部分Kir通道在大鼠肾内动脉平滑肌细胞中的表达及功能目的:1.观察BaCl2对急性分离的大鼠肾内动脉平滑肌细胞（rat intrarenal arteries smooth muscle cells,RIASMCs）细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响。2.观察BaCl2、TPR激动剂U46619、NO供体硝普钠（sodium nitroprusside,nitro）、Kir2.1 antibody（Kir2.1-Ab）对急性分离的RIASMCs Kir电流的影响。3.通过Western blotting来观察RIRAs中Kir通道的表达。方法:1.RIASMCs的分离:将分离好的RIRAs放入含有0.5 mg/ml木瓜酶,1 mg/ml胎牛血清和1 mg/ml苏糖醇的1 ml酶解液Ⅰ中,并将其放在37℃恒温浴槽内,在持续供氧的条件下孵育28～30 min,后将血管转入含有1 mg/ml胎牛血清,0.5 mg/ml胶原酶F和0.5 mg/ml胶原酶H的0.7 ml酶解液Ⅱ中,同样在37℃,持续供氧的条件下孵育3 min,然后在酶解液Ⅱ中加入37℃的分离液将体积稀释至1 ml继续孵育2 min后终止酶解反应,将所得的细胞悬浊液离心2次,每次6 min,转速为800 r/min,最后弃上清液,留取1 ml用于细胞实验。2.[Ca2+]i的测定:用滴管将新鲜分离的RIASMCs滴入规格为1 ml的玻璃底部细胞培养皿中,并加入灌流液,在37℃下静置30 min后用灌流液冲洗5 min,去除死细胞和组织碎片,然后用滴管轻轻吸出灌流液至培养皿中剩余0.5 ml为宜,然后加入0.5 ml浓度为5（?）M的Fluo4-AM进行负荷,60 min后用灌流液冲洗多余的Fluo4-AM,并打开恒温加热泵,用共聚焦显微镜以10帧/分钟的频率获取ASMCs图像,用固态二极管激光器产生488 nm的激发光束。在波长516～530 nm的区域测量荧光强度,并用NIS-Elements Ar进行分析,计算荧光比（F/F0,处理后的荧光强度与处理前的基础荧光强度的比值）。2.全细胞膜片钳Kir电流的记录:用滴管吸取2滴新鲜分离的RIASMCs滴于细胞培养皿底部的载玻片上并加入1 ml的Kir灌流液。在灌流液中缺乏或存在BaCl2、U46619或硝普钠的情况下记录全细胞电流;在电极内液中加入Kir2.1抗体（1:500）观察Kir2.1-Ab对Kir电流的影响。3.Western blotting:准备两组去内皮的直径为150～200μm和200～280μm RIRAs作为样本,每组20 mg。用RIPA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物在4°C下将样本裂解30 min。裂解后的匀浆在4°C,13,000×g下离心20 min,留取上清液,以BSA为标准,用BCA蛋白测定液测定蛋白质浓度。总蛋白（24μg）在15%Tris-HCl聚丙烯酰胺凝胶上分离后转移到硝酸纤维素膜上。转移后的膜用0.05%TBST洗涤3次,共15 min,5%的脱脂牛奶在室温下封闭2 h。然后将膜在含Kir2.1抗体（1:5000）的营养液中4°C过夜孵育。与一抗孵育后,用0.05%TBST洗涤3次,每次10 min,之后用含辣根过氧化物酶结合的山羊抗兔Ig G（1:5000）孵育1 h,同样用0.05%TBST洗3次,每次10 min,最后用超敏ECL化学发光试剂用化学发光检测系统（Bio-Rad）检测。结果:1.0.03～1.0 m M BaCl2浓度-依赖性地增加[Ca2+]i敏感的荧光强度。以BaCl2处理前的细胞荧光强度为1.0（对照）,细胞暴露在1.0 m M BaCl2时的最大荧光强度是对照组的2.27±0.48倍（P<0.05）。2.在-140 m V时,正常Kir电流密度为8.81±0.19 p A/p F。100μM BaCl2和3μM TPR激动剂U46619使电流密度分别减小到2.62±0.15 p A/p F和4.48±0.21 p A/p F,而NO供体硝普钠10μM使电流密度增加到10.93±0.62 p A/p F,Kir2.1-Ab使电流密度降低到5.61±0.42 p A/p F（P<0.05）。蛋白印迹实验结果显示Kir2.1在RIRAs中表达,并且在较小的RIRAs（直径<200μm）中表达更丰富。结论:1.0.03～1.0 m M BaCl2浓度-依赖性地增加了RIASMCs[Ca2+]i。2.在直径较小的RIRAs中,Kir2.1的表达明显更丰富。TPR激动剂U46619抑制Ba2+敏感的Kir电流,而NO供体硝普钠增强了Kir电流。
杨绍忠[3]（2021）在《七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节血管平滑肌收缩》文中指出血管张力由机体的内在机制和外在机制共同调节。吸入性麻醉药可直接作用于各种血管床的血管平滑肌和内皮细胞,影响血管阻力,从而导致器官血流改变。在维持血管张力方面,血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）中的钾离子（K+）通道起着重要作用。氯化钾（Potassium chloride,KCl）刺激血管平滑肌（Vascular smooth muscle,VSM）收缩的机制可能涉及Ca2+依赖和Ca2+敏化途径。KCl膜去极化通过电压依赖性Ca2+通道受体增加VSM细胞Ca2+内流,导致胞浆游离Ca2+（[Ca2+]i）增加。[Ca2+]i的增加激活Ca2+-钙调蛋白（Ca2+-calmodulin,CaM）依赖的肌球蛋白轻链激酶（Myosin light chain kinase,MLCK）,导致肌球蛋白轻链（Myosin light chain,MLC）磷酸化和血管收缩。除Ca2+依赖途径外,Ca2+诱导的Ca2+敏化途径还可通过调节Ⅱ类磷酸酰肌醇3-激酶α 亚基（Class Ⅱphosphoinositide 3-kinase α-isoform,PI3K-C2α）和 Rho 激酶活性来抑制MLC磷酸酶（MLC phosphatase,MLCP）,从而导致血管收缩。磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide3-kinase,PI3K）是一个广泛表达的酶家族,可以磷酸化膜肌醇脂类并发挥多种生物活性。根据其结构、分布、活化机制和功能不同,PI3K可分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ三类。Ⅰ类PI3K根据不同类型的偶联受体和调节激活剂可进一步分为IA类和IB类,介导细胞增殖、存活和迁移。Ⅱ类PI3K分为 PI3K-C2α,PI3K-C2β,和 PI3K-C2γ 三种。研究表明 PI3K-C2α 和 PI3K-C2β均参与Rho的激活和Rho激酶依赖性MLCP抑制。Ⅲ类存在于酵母中,是由Vps34蛋白（磷酸酰肌醇3-激酶囊泡分选蛋白34）组成的。已知VSM表达多种PI3Ks,包括Ⅰ类酶p110α和 p110β,Ⅱ类酶 PI3K-C2α 和 C2β。PI3Ks已被证明与糖尿病（diabetes mellitus,DM）及其并发症密切相关,是葡萄糖稳态的关键分子。PI3Ks对DM患者的重要性不仅限于对糖代谢的调节,还与DM引起的靶器官损害密切相关,如血管、心脏和大脑。研究证实,DM可导致中枢神经系统中PI3K活性的降低。大脑中PI3K信号的上调,可以逆转DM的病理后果,而使用PI3K抑制剂则可减轻甚至恢复DM相关的损伤。蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）又称Akt,是PI3K途径的关键下游底物,在细胞凋亡、增殖、迁移和转录及葡萄糖代谢等多种细胞过程中发挥关键作用。PI3K/Akt信号通路广泛存在于细胞中,可以激活并调控众多激酶靶点,是生理和病理条件下调节血管张力的关键因子。PI3K/Akt信号通路参与内皮细胞的典型功能,如调节血管平滑肌张力和血管生成等。Rho激酶在VSMC收缩机制中起重要作用。体内Rho-Rho激酶的激活可改变Ca2+的敏感性,磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1（Myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1）,抑制MLCP引起血管收缩。体内血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,Ang Ⅱ）、凝血酶和内皮细胞或平滑肌细胞中高血糖等因素,均可触发Rho激酶的激活。最新研究表明,DM患者外周循环白细胞的Rho激酶活性显着增加,抑制Rho激酶活性可以改善DM的疗效及预后。目前,临床常用的吸入性麻醉药为七氟醚（sevoflurane,SEVO）和异氟醚（isoflurane,ISO）,通常表现为浓度依赖性的心肌抑制和血管舒张,引起低血压。既往研究表明,SEVO和ISO可以通过PI3K/Akt途径对心肌和脑缺血再灌注损伤提供保护作用。PI3K/Akt通路通过L型Ca2+通道的调控以及Rho激酶、磷酸二酯酶5（phosphodiesterase 5,PDE5）的激活,导致血管收缩。研究表明,抑制PI3K信号通路是一种潜在的抗高血压和血管保护疗法。可能机制与细胞内信号转导直接作用于VSM有关,但确切机制尚未完全清楚。我们前期研究发现SEVO通过抑制蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）磷酸化降低Ang Ⅱ诱导的血管收缩,而不影响VSM中[Ca2+]i。最近研究表明,SEVO抑制 MLC、蛋白激酶 C 增强抑制蛋白（PKC-Potentiated inhibitory protein,CPI-17）和肌球蛋白磷酸酶靶向亚基 1/Thr853（Myosin phosphatase target subunit/Thr853,MYPT1/Thr853）对AngⅡ的磷酸化反应。ISO也抑制MLC对Ang Ⅱ的磷酸化反应,与MYPT1/Thr853的降低有关,但与CPI-17的磷酸化无关。SEVO和ISO均不影响Ang Ⅱ诱导的肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1/Thr696（Myosin phosphatase target subunit/Thr696,MYPT1/Thr696）磷酸化。上述研究表明两种吸入性麻醉药对Ang Ⅱ诱导的血管收缩和MLC磷酸化有相似的抑制作用,但其抑制MLCP活性的机制却不同。PI3K参与Rho的激活和由此产生的Rho激酶依赖性MLCP抑制,可诱导血管平滑肌收缩,但与其细胞内Ca2+浓度升高无关,表明该激酶参与了细胞内Ca2+敏化途径。研究表明,临床浓度的SEVO可显着抑制非DM大鼠对去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）的反应,但对DM大鼠无此作用。临床研究证实,用ISO或SEVO麻醉诱导,非DM患者的足部皮肤温度比DM患者更高,提示由交感神经系统控制的体温调节在DM患者中受损。这些发现表明DM血管对吸入性麻醉药的反应性发生了改变。但DM血管对吸入性麻醉药反应性的差异及其机制尚未确定,尤其是对血管病变较严重的老年DM研究较少。目前,关于SEVO和ISO对Ca2+诱导的Ca2+敏化途径在调节VSM收缩中的作用所知甚少。本研究分为三部分,第一部分研究对象为正常大鼠主动脉血管,旨在探讨吸入性麻醉药通过调节PI3K亚基和Rho激酶活性,对正常大鼠主动脉血管平滑肌收缩的影响。第二部分研究对象为老龄DM血管,通过与幼龄和老龄正常大鼠血管对比,旨在探讨吸入性麻醉药对DM大鼠主动脉血管平滑肌收缩的影响,并探讨年龄和DM对吸入性麻醉药血管舒张反应的特异性影响。主动脉为弹性储器血管,而决定外周血管阻力的主要是阻力血管,因此第三部分研究对象选择胃癌患者手术切除的大网膜动脉,旨在探讨吸入性麻醉药通过调节PI3K亚基和Rho激酶活性,对阻力血管平滑肌收缩的影响。本研究将为临床合理应用吸入性麻醉药提供更多理论依据,有助于改善患者预后。第一部分:七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2 α/Rho激酶调节大鼠主动脉血管平滑肌收缩目的探讨SEVO和ISO通过调节正常大鼠离体主动脉血管平滑肌中PI3K亚基和Rho激酶活性对KCl所致血管平滑肌收缩的影响。方法1.血管平滑肌组织制备。雄性Wistar大鼠（250-350g）用氟烷麻醉,通过颈总动脉放血实施安乐死。仔细解剖降主动脉,去除附着的脂肪和连接组织,切成3-4mm的动脉环。用不锈钢针轻轻摩擦内表面,去除内皮细胞。动脉环垂直安装在两个挂钩之间,上挂钩连接到等张力传感器的杠杆上。2.等张肌力收缩测量。用KCl（60mM）培养主动脉环,观察平滑肌细胞完整性其整体收缩反应性,并确认动脉环内皮细胞已去除。在加入KCl前先将每只大鼠（n=7）的6个主动脉环随机暴露于SEVO和ISO的0、1、2和3最小肺泡浓度（MAC）或 1mM LY294002（PI3K 抑制剂）或1μM Y27632（Rho 激酶抑制剂）环境中培养15min。使用等张肌力传感器测量KCl诱发的血管收缩张力。SEVO、ISO、LY294002和Y27632对KCl诱导的大鼠主动脉平滑肌收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力的百分比表示。3.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。从每只大鼠的降主动脉取一条去除内皮细胞的动脉条带（约3.5cm）,在实验开始前将其浸泡在含氧的KBS溶液中平衡60min。主动脉条分别在0（对照）、60 mM KCl、1 MAC-SEVO（1.7%）、2 MAC-SEVO（3.5%）、1 mM LY294002 和 1μM Y27632 或 0（对照）、60mM KCl、1MAC-ISO、2MAC-ISO、1mM LY294002 和 1μM Y27632 中培养。在有 KCl 的情况下培养15min,无KCl的情况下培养5min,用液氮快速冷冻,匀浆离心后使用Western blot分析测定MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化程度。实验中用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。磷酸化与总CPI-17、MLC和MYPT1的比值用作每种酶的活化指标,并表示为相对于基线对照水平的百分比。4.PI3K和Rho激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。为测定SEVO、ISO和激酶抑制剂对KCl刺激的PI3K和Rock Ⅱ转膜活化的剂量效应,主动脉条分别先用1.7%SEVO、3.5%SEVO、1.2%ISO、2.3%ISO、1 mM LY294002 和 1μM Y27632处理15min后,用KCl培养5min。使用Western blot分析测定PI3K和Rho激酶（RockII）转膜活化水平。实验中用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。PI3K-p85α、PI3K-C2 α和Rock Ⅱ的含量以总值的百分比表示（膜中含量/膜和胞质中总量）。结果1.等张肌力收缩测量。KCl诱导大鼠主动脉平滑肌快速而持续收缩,在约5min后达到最大水平,并在大鼠主动脉环中持续超过30min。SEVO和ISO均以浓度依赖的方式减弱KCl诱导的动脉平滑肌收缩,并且LY294002（1mM）和Y27632（1μM）对平滑肌收缩也起抑制作用。SEVO对KCl诱导的血管平滑肌收缩抑制作用与等效浓度的ISO 比较,无显着性差异。2.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。KCl诱导MLC磷酸化迅速增加,且在暴露于KCl约5min后达到峰值水平。SEVO和ISO也以浓度依赖的方式抑制 KCl 诱导的 MLC 磷酸化,LY294002（1mM）和 Y27632（1μM）对 MLC磷酸化也起到抑制作用。SEVO和ISO均以浓度依赖的方式抑制KCl引起的MYPT1/Thr853磷酸化,但均不影响MYPT1/Thr696和CPI-17/Thr38的磷酸化。3.PI3K 和 Rho 激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。LY294002（1mM）抑制 KCl诱导的PI3K-p85和PI3K-C2α转膜活化（分别为P<0.05和P<0.01）。Y27632（1uM）和LY294002（1mM）均能抑制KCl诱导的Rock Ⅱ转膜活化（P<0.01）。SEVO和ISO均抑制大鼠主动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rock Ⅱ转膜活化,但对PI3K-p85转膜活化无影响。结论1.SEVO和ISO均能通过抑制正常大鼠主动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rho激酶活性及MLC磷酸化,抑制血管收缩。2.LY294002可通过抑制MLC磷酸化和PI3K活性抑制血管收缩。3.吸入性麻醉药发挥抑制作用的细胞机制是通过PI3K-C2α/Rho激酶/MYPT1/MLC途径介导。意义SEVO和ISO可通过调节大鼠主动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rho激酶活性抑制血管平滑肌收缩。临床浓度的吸入性麻醉药与PI3K抑制剂合用可增强血管舒张作用。研究为使用PI3K抑制剂进行抗癌治疗的患者使用吸入性麻醉药时的循环管理提供一定临床指导。第二部分:七氟烷和异氟烷通过PI3K/Rho激酶调节糖尿病血管平滑肌收缩目的探讨SEVO和ISO对PI3K和Rho激酶参与的老年2型糖尿病大鼠血管平滑肌收缩的影响。方法1.实验动物。选择老年雄性OLETF大鼠（65～70周龄）和年龄匹配的非糖尿病LETO大鼠及幼年Wistar大鼠（6～8周龄）作为研究对象。OLETF大鼠是一种自发性的2型糖尿病（type 2 diabetesmellitus,T2DM）动物模型,具有先天性多食、轻度肥胖、迟发性高血糖、高胰岛素血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症的特点,与人类T2DM的病理生理过程相似。2.口服糖耐量试验。实验前对各组大鼠进行口服糖耐量试验（Oral glucose tolerance test,OGTT）。大鼠禁食8～14h,取尾静脉血测定空腹血糖。然后葡萄糖（2g/kg）灌胃,30、60、90、120min时分别测定负荷后血糖。各组大鼠符合入组标准后用于后续实验。3.血管平滑肌制备。三组大鼠腹腔注射戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉后,颈总动脉放血实施安乐死。仔细解剖降主动脉,切成3～4mm长的动脉环。用不锈钢针轻轻摩擦内表面,去除内皮细胞。动脉环垂直安装在两个挂钩之间,上挂钩连接到等张力传感器的杠杆上。4.等张肌力测量。等张力传感器测量KCl诱导的三组大鼠主动脉血管收缩张力。用KCl诱导动脉环后,将各组动脉环随机分别暴露于SEVO或ISO（MAC值为 0、1、2、3）、10μM LY294002 和 1μMY27632 的环境中培养 15min。SEVO和ISO通过校准的汽化器以2L/min的新鲜气流流量通入到气体混合物中,使用气相色谱仪监测和调整KBS溶液中的SEVO浓度。SEVO、ISO、LY294002和Y27632对KCl（60mM）诱导的三组大鼠动脉平滑肌收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力的百分比表示。结果1.葡萄糖耐量曲线变化。大鼠OGTT曲线变化表明,老年OLETF大鼠餐后血糖明显高于对照组同龄LETO大鼠及幼年Wistar大鼠,有显着差异（P<0.01）且在30min达到最高值。LETO大鼠及Wistar大鼠血糖峰值在10mmol/L以下,但峰值出现时间不同,老年LETO大鼠峰值在进食后30min,幼年Wistar大鼠峰值在餐后60min。2.KCl（60mM）对大鼠主动脉血管平滑肌收缩的影响。KCl诱导三组大鼠主动脉平滑肌快速而持续收缩,与LETO组及Wistar组相比,OLETF组大鼠主动脉收缩更明显,有显着性差异（P<0.05）,LETO组与Wistar组无显着性差异。3.SEVO和ISO对KCl诱导的大鼠主动脉平滑肌收缩的影响。SEVO和ISO对幼年和老年大鼠血管反应存在显着性差异,SEVO对幼年大鼠血管抑制作用较等效浓度ISO更强,其中2MAC和3MAC SEVO较等效浓度ISO有显着性差异（P<0.05）。老年大鼠组中,ISO 比等效浓度SEVO抑制作用更显着,且OLETF组比LETO组更明显,但两者没有显着性差异。三组间比较,1MAC SEVO对KCl诱导的幼年Wistar大鼠主动脉血管收缩抑制作用最强,且与OLETF组和LETO组相比,有显着差异（P<0.05）。2MAC SEVO对三组大鼠无显着性差异。3MAC SEVO对KCl诱导的OLETF组血管收缩抑制作用最强,与LETO组和Wistar组相比,有显着差异（P<0.05）。与SEVO不同,相比较OLETF组和LETO组,各浓度ISO对幼年Wistar大鼠主动脉血管收缩抑制作用最弱,有显着性差异（P<0.05）。4.LY294002（10μM）和Y27632（1μM）对KCl诱导的大鼠主动脉血管收缩的影响。LY294002和Y27632对三组大鼠主动脉血管收缩均有抑制作用。三组间LY294002和Y27632抑制程度比较,Wistar组与LETO组没有统计学差异（P>0.05）,OLETF大鼠组主动脉舒张程度明显高于LETO组和Wistar组,有显着性差异（P<0.01）。结论1.与正常血管相比,KCl诱导糖尿病血管平滑肌收缩显着增强。2.SEVO和ISO对幼年和老年大鼠主动脉血管平滑肌收缩抑制有显着差异,SEVO对幼龄血管抑制作用更明显,尤其是高浓度时。ISO对老年血管抑制作用更强。3.吸入性麻醉药对正常血管和糖尿病血管反应明显不同,提示糖尿病血管PI3K和Rho激酶活性异常。4.PI3K抑制剂LY294002和Rho激酶抑制剂Y27632对糖尿病血管收缩抑制作用更强,进一步提示糖尿病血管PI3K和Rho激酶活性异常。意义探明吸入性麻醉药调控糖尿病血管舒张的特异性反应,为糖尿病患者围术期合理选择麻醉药物,实现麻醉学向围术期医学转变,预防围术期急性心脑血管事件的发生提供理论依据。第三部分:七氟烷通过PI3K-C2 α/Rho激酶调节大网膜动脉血管平滑肌收缩目的研究SEVO通过调控PI3K-C2α和Rho激酶活性对KCl诱导的大网膜动脉血管平滑肌收缩的影响。方法1.组织制备。取患者腹腔镜胃切除后的大网膜动脉为研究样本。仔细解剖大网膜动脉,去除附着的脂肪和连接组织,并将备好的动脉切成3～4mm的动脉环。动脉环用棉签或针头轻轻摩擦,以机械方式去除内皮细胞,避免内皮衍生的血管舒张物质介导的影响。动脉环用苯肾上腺素（10-5mol/L）预收缩,对缓激肽（10-6mol/L）无舒张反应时,表明内皮细胞已完全去除。去除内皮细胞的动脉环垂直安装在两个挂钩之间,上挂钩连接到等张力传感器的杠杆上。2.等张肌力测量。等张力传感器测量KCl诱导的动脉血管收缩张力。在37℃的Krebs碳酸氢盐溶液（KBS）中通入95%（v/v）O2和5%（v/v）CO2的混合气（新鲜气体流量为2L/min）。动脉环在3g的静息张力下平衡60min,每隔20min更换一次培养液。随后用KCl（60mM）培养动脉环,观察平滑肌细胞的完整性及其整体收缩反应性。在加入KCl之前先将动脉环随机暴露于SEVO（MAC值为 0、1、2）或 10μM LY294002（PI3K 抑制剂）或 1μMY27632（Rho 激酶抑制剂）的环境中培养15min。SEVO通过校准的汽化器以2L/min的新鲜气流流量通入到气体混合物中,使用气相色谱仪监测和调整KBS溶液中的SEVO浓度。SEVO、LY294002和Y27632对KCl诱导的大网膜动脉平滑肌收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力收缩的百分比表示。4.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。在大网膜动脉样本中取一条内皮剥脱的血管条带（约3.5cm）,将其浸泡在含氧的KBS溶液中,平衡60min。将不同大网膜动脉条随机于 0（对照）、60mM KCl、1MAC-SEVO（1.7%）、2 MAC-SEVO（3.4%）、LY294002（10μM）或 Y27632（1μM）中培养。在无 KCl 的情况下培养15min,在KCl存在的情况下培养5min,随后用液氮进行快速冷冻。匀浆离心后使用Western blot分析MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化程度。实验用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。磷酸化与总CPI-17、MLC和MYPT1的比值用作每种酶的活化指标,并表示为相对于基线对照水平的百分比。5.PI3K和Rho激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。选取样本中己去除内皮细胞的大网膜动脉条,将其浸泡在含有20ml KBS溶液的器官浴槽中平衡60min,每20min更换一次KBS溶液。将平衡后的动脉条分别置于1MAC-SEVO（1.7%）、2MAC-SEVO（3.4%）、LY294002（10μM）和 Y27632（1μM）的环境中培养 15min。用KCl处理5min后,用液氮快速冷冻样品。使用Western blot方法测定PI3K和Rho激酶（RockⅡ）的转膜活化。实验用化学发光法检测免疫反应带的密度,用图像分析软件评估。PI3K-p85α、PI3K-C2α和Rock Ⅱ的含量以总值的百分比表示（即膜中含量/膜加胞质中总含量）。结果1.等张肌力测量。等张力传感器测量KCl诱导的动脉VSM收缩张力。SEVO、LY294002和Y27632对KCl诱导的大网膜动脉VSM收缩的等张力变化以相对于KCl（60mM）诱导的最大等张力的百分比表示。测量结果显示SEVO以浓度依赖的方式减弱KCl诱导的人离体大网膜动脉VSM收缩,LY294002（10μM）和Y27632（1μM）也可以对其起到抑制作用。2.MYPT1、CPI-17和MLC磷酸化测定。结果显示KCl诱导MLC磷酸化迅速增加,且在暴露于KCl约5min后达到峰值水平。SEVO以浓度依赖的方式抑制KCl引起的MLC和MYPT1/Thr853磷酸化。与第一部分结果一致,SEVO不影响KCl引起的大网膜动脉MYPT1/Thr696和CPI-17/Thr38磷酸化的增加;此外,LY294002（10μM）和Y27632（1μM）也可以抑制KCl诱导的MLC磷酸化。3.PI3K和Rho激酶（Rock Ⅱ）转膜活化测定。与第一部分结果一致,SEVO以浓度依赖的方式抑制人离体大网膜动脉血管平滑肌PI3K-C2α和Rock Ⅱ的转膜活化,但SEVO不会以浓度依赖的方式抑制PI3K-p85对KCl的反应。LY294002（10μM）可抑制 KCl 诱导的 PI3K-p85 和 PI3K-C2α 转膜活化。Y27632（1uM）和LY294002（10μM）均能抑制KCl诱导的Rock Ⅱ转膜活化。结论1.SEVO可通过调控大网膜动脉血管中PI3K-C2α和Rho激酶活性抑制血管收缩。2.低浓度PI3K抑制剂LY294002（10μM）可有效抑制PI3K活性和MLC磷酸化,舒张血管。3.SEVO对KCl诱导的血管收缩的抑制作用与调节MLCP的上游活化因子PI3K-C2α/Rho激酶活性有关。意义临床常用剂量的SEVO可通过调控大网膜动脉血管平滑肌中PI3K-C2α和Rho激酶活性抑制血管收缩。吸入性麻醉药对弹性储器血管和阻力血管均有浓度依赖性抑制作用。该研究为围术期使用PI3K抑制剂进行抗癌治疗的患者使用吸入性麻醉药时的循环管理提供重要理论依据。
张露云[4]（2021）在《SOCE调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中的作用及机制》文中研究指明第一部分探究SOCE激动剂CPA调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中的作用及机制目的:探究SOCE激动剂CPA调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中的作用及机制。方法:选取人体肠黏膜下微血管及18-22 g,6～8周C57BL/6健康雄性小鼠、结肠炎小鼠的肠系膜第2级微细动脉作为研究主体,通过丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统和美国Powerlab分析系统记录血管张力变化。首先观察SOCE激动剂CPA对人体肠黏膜下微血管的舒张反应,再通过L-NNA抑制NO,INDO抑制PGI2,探究NO、PGI2是否参与了CPA舒张人体肠黏膜下微血管的过程。其次因为人体组织不易获取,我们课题组通过前期实验发现,与人体肠黏膜下微血管管径接近的小鼠肠系膜第2级微细动脉能较好地模拟前者的功能特性,而且长期作为阻力血管的代表在文献中广泛应用,故之后实验均采用小鼠肠系膜2级动脉替代研究。接下来通过比较在有无血管内皮层时CPA引起小鼠肠系膜微细动脉的舒张情况,明确CPA产生血管舒张作用是否依赖于血管内皮层。分别应用L-NNA抑制NO,INDO抑制PGI2,探究CPA对小鼠肠系膜微细动脉舒张作用是否与NO和PGI2有关。进一步通过高钾收缩血管,探究钾通道是否参与了CPA舒张小鼠肠系膜微细动脉的过程。通过钙依赖性钾通道阻断剂TEA和激动剂SKA-31作用于小鼠肠系膜微细动脉,探究内皮依赖性超极化机制（endothelium-dependent hyperpolarization,EDH）是否参与了CPA舒张肠系膜微细动脉过程。通过ouabain以及0 K+液选择性抑制钠钾泵（Na+-K+ATPase,NKA）,探究在CPA引起的肠系膜微细动脉舒张过程中是否有钠钾泵的参与。通过钠钙交换体(Na+-Ca2+ATPase,NCX)的选择性抑制剂SN-6作用于血管,探究钠钙交换体是否参与CPA舒张肠系膜微细动脉的过程。通过SOCE拮抗剂SKF96365、FFA以及Orai选择性抑制剂GSK-7975A作用于肠系膜微细动脉,观察CPA舒张血管反应,明确CPA是否通过SOCE发挥舒张血管作用。另外,通过单细胞内Ca2+实时测定技术,检测分别在正常PSS液和0 Ca2+液条件下,CPA作用于血管内皮细胞HUVEC后Ca2+信号变化情况。最后通过DSS建立C57BL/6小鼠结肠炎模型后,比较CPA对正常小鼠和结肠炎模型小鼠肠系膜微细动脉的舒张情况,探究在结肠炎中CPA所引起的血管舒张作用是否受到损伤。进一步通过比较正常小鼠和结肠炎小鼠肠系膜微细动脉在L-NNA与INDO作用下,CPA引起的血管舒张反应,探究在结肠炎模型中CPA/EDH血管舒张作用是否受到损伤。结果:CPA可浓度依赖性舒张人体肠黏膜下微血管,最大舒张百分比Rmax为86.24±3.28%,L-NNA、INDO对CPA舒张人体肠黏膜下微血管无明显影响。CPA可浓度依赖性和内皮依赖性舒张小鼠肠系膜2级微细动脉,最大舒张百分比Rmax为91.46±5.09%,磨除血管内皮层后,最大舒张百分比Rmax降至18.29±2.33%。L-NNA和INDO对CPA舒张小鼠肠系膜微细动脉作用无明显影响。高钾收缩血管可明显抑制CPA舒张血管反应。TEA作用于肠系膜微细动脉后,可明显抑制CPA舒张作用,相反SKA-31可增强CPA舒张肠系膜微细动脉的作用。ouabain、0 K+液以及SN-6均可明显抑制CPA舒张血管反应。此外,SKF96365、FFA以及GSK-7975A也可明显抑制CPA引起的舒张反应。CPA可以通过内钙释放和外钙内流两条途径,使HUVEC细胞内Ca2+信号增加,并且CPA引起外钙内流产生的Ca2+信号可以被GSK-7975A抑制。最后在结肠炎小鼠中,CPA/EDH舒张血管的作用受损。结论:CPA激动血管内皮细胞SOCE/Ca2+信号介导的EDH机制通过使肠黏膜下微血管内皮依赖性舒张,可促进肠黏膜供血及其损伤后的修复。而SOCE/Ca2+/EDH机制在结肠炎中受损,可作为防治结肠炎的潜在靶标。第二部分探究SOCE在调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中作用的分子机制目的:进一步探究SOCE在调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中作用的分子机制。方法:选取人体肠黏膜下微血管及18-22 g,68周健康C57BL/6雄性小鼠、结肠炎小鼠肠系膜第2级微细动脉作为研究主体,通过丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统和美国Powerlab分析系统测定血管张力变化。首先观察细胞内质网钙螯合剂TPEN对人体肠黏膜下血管舒张作用,再通过L-NNA、INDO抑制NO、PGI2,探究NO和PGI2是否参与了TPEN舒张人体肠黏膜微下血管的过程。进一步通过高钾收缩血管,探究钾通道是否参与了TPEN舒张人体肠黏膜下微血管的过程。通过IKCa、SKCa的选择性阻断剂TRAM-34,apamin作用于人体肠黏膜下微血管,探究TPEN舒张肠黏膜下微血管过程中,经IKCa和SKCa调控的内皮依赖性超极化机制。其次因为人体组织不易获取,我们课题组通过前期实验发现,与人体肠黏膜下微血管管径接近的小鼠肠系膜第2级微细动脉能较好地模拟前者的功能特性,而且长期作为阻力血管的代表在文献中广泛应用,故之后实验均采用小鼠肠系膜2级动脉替代研究。接下来通过比较在有无血管内皮层时TPEN引起小鼠肠系膜微细动脉舒张情况,明确TPEN是否依赖于血管内皮细胞产生舒张作用。分别用L-NNA、INDO抑制NO、PGI2,探究NO和PGI2是否参与了TPEN舒张小鼠肠系膜微细动脉的过程。进一步通过高钾收缩血管,探究钾通道是否参与了TPEN舒张小鼠肠系膜微细动脉的过程。通过IKCa、SKCa的选择性阻断剂TRAM-34,apamin和激动剂SKA-31作用于小鼠肠系膜微细动脉,探究TPEN舒张血管过程中内皮依赖性超极化机制的作用。此外,通过ouabain选择性抑制钠钾泵,探究在TPEN舒张肠系膜微细动脉过程中钠钾泵的作用。通过SN-6选择性抑制钠钙交换体,探究钠钙交换体是否参与了TPEN舒张肠系膜微细动脉的过程。同时,通过SOCE拮抗剂SKF96365作用于肠系膜微细动脉,观察TPEN引起的舒张反应,明确TPEN是否通过SOCE发挥舒张血管作用。进一步通过STIM选择性抑制剂ML-9及Orai选择性抑制剂GSK-7975A,蛋白转运抑制剂Brefeldin A（BFA）作用于肠系膜微细动脉,探究TPEN引起的血管舒张反应是否通过SOCE经典的分子STIM/Orai发挥作用。通过DSS建立C57BL/6小鼠结肠炎模型后,比较TPEN对正常小鼠和结肠炎模型小鼠肠系膜微细动脉舒张情况,探究在结肠炎中TPEN所引起的血管舒张作用是否受损。结果:TPEN可引起人体肠黏膜下微血管呈浓度依赖性舒张,最大舒张百分比Rmax为95.67±0.91%。高钾收缩人体组织肠黏膜下微血管,可明显抑制TPEN舒张血管反应。L-NNA、INDO对TPEN舒张人体肠黏膜下微血管无明显影响,但进一步通过TRAM-34和apamin抑制IKCa和SKCa后可明显抑制TPEN舒张血管反应。TPEN呈浓度依赖性及内皮依赖性舒张小鼠肠系膜2级微细动脉,小鼠血管最大舒张百分比Rmax为96.13±4.74%,磨除内皮细胞后,小鼠血管最大舒张百分比Rmax为11.33±2.91%。高钾收缩小鼠肠系膜微细动脉,可明显抑制TPEN引起的血管舒张反应。L-NNA和INDO不影响TPEN对小鼠肠系膜微细动脉舒张作用。TRAM-34和apamin选择性抑制IKCa和SKCa后,可显着抑制TPEN舒张小鼠肠系膜微细动脉的作用。相反,KCa的选择性激动剂SKA-31可增强TPEN舒张血管的作用。ouabain以及SN-6均可明显抑制TPEN舒张血管作用。此外,SKF96365、ML-9、GSK-7975A以及BFA也可明显抑制TPEN引起的血管舒张反应。在结肠炎小鼠中,TPEN舒张肠系膜微细血管的作用部分受损。结论:TPEN螯合内质网钙,通过激动血管内皮细胞SOCE经典的STIM/Orai分子及Ca2+信号介导EDH机制,促进肠黏膜供血及其损伤后的修复。尽管SOCE/Ca2+/EDH机制在结肠炎中受损,STIM/Orai可能作为防治结肠炎潜在的分子靶标,值得深入研究。
罗娟娟[5]（2021）在《妊娠糖尿病子代肠系膜小动脉血管反应性改变》文中进行了进一步梳理代谢重编程及流行病学研究发现糖尿病子代成年后肥胖、糖脂代谢障碍、高血压等代谢综合征的发病率明显增高。高血压的发生发展与阻力血管功能异常有关,包括对血管紧张性增强以及血管舒张功能障碍。血管的舒张功能包括内皮依赖性的舒张和非内皮依赖性舒张。前者分别由一氧化氮（Nitric oxide,NO）类,前列环素（Prostacyclin,PG）类以及内皮源性超极化因子（Endothelium-derived hyperpolarizing factor,EDHF）介导,后者与平滑肌上扩血管活性物质的效应有关。目前关于糖尿病子代NO源和PG源的血管内皮损伤的研究较为广泛,而EDHF源的内皮舒张功能异常的研究数量有限。既往研究表明C型利尿肽（C-type natriuretic peptide,CNP）介导EDHF源的内皮舒张功能,且作用随着血管直径的缩小而增强。而我们前期关于妊娠糖尿病子代胰腺的表观遗传学改变的研究提示Npr2基因存在高甲基化改变,该基因编码平滑肌细胞上的B型CNP受体（NPRB）,那么糖尿病子代血管反应性异常除了内皮源性舒张功能受损,是否涉及平滑肌上CNP等血管活性物质的受体表达或活性异常有待进一步的研究。本研究旨在通过孕0天一次性腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）建立糖尿病孕鼠模型,然后将妊娠糖尿病子代子代（Offspring of Gestational Diabetes,DMO）与正常血糖孕鼠的子代（Offspring of Control Mothers,CMO）,进行长程高脂饮食干预（16 w）,加速内皮损伤的进展,观察DMO是否较CMO更容易出现糖耐量、动脉血压及微血管功能异常。通过血压以及糖耐量检测,分别比较CMO和DMO成年后高脂饮食诱导下血压调控、糖代谢表型的变化趋势;通过体外微血管环张力检测技术,分别比较CMO和DMO肠系膜动脉的第三级分支小动脉对苯肾上腺素（Phennylephrine,Phen）、乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）、硝普钠（Sodium Nitroprusside,SNP）及外源性CNP的反应性。本课题旨在通过微血管反应性研究,明确高脂饮食是否加剧糖尿病子代EDHF源的血管内皮功能损伤和CNP介导的平滑肌舒张功能障碍,从而为表观遗传因素及成年后二次不良因素暴露对子代血管损伤提供实验依据,为倡导健康饮食有利于维护子代血管功能提供理论支持。目的:探讨DMO和CMO高脂饮食诱导后血管收缩和舒张功能改变,为宫内高血糖暴露诱发的表观遗传学改变对子代血管功能的损伤,特别是EDHF源的舒张功能异常及外源性CNP介导的平滑肌舒张功能改变提供的实验支持,为糖尿病心血管病变的代系传递研究提供理论依据。方法:（1）将雄性DMO及CMO随机分组,进行高脂饮食诱导,分别为:高脂饮食喂养的DMO子代（DMO+HFD）、高脂饮食喂养的CMO子代（CMO+HFD）;（2）通过尾动脉血压监测、主动脉插管血压检测以及腹腔注射糖耐量实验（Intraperitoneal Glucose Tolerance Test,IPGTT）,分别比较DMO和CMO血压和糖耐量差异;（3）通过微血管张力检测技术比较两组子代大鼠肠系膜小动脉Phen介导的收缩功能;（4）内皮完整的肠系膜小动脉有或无抑制剂硝基-L-精氨酸甲酯（NG-nitro-L-arginine Methyl Ester,L-NAME）和吲哚美辛（Indomethacin,Indo）预处理后ACh介导的内皮依赖性舒张功能;（5）去内皮的肠系膜小动脉SNP和CNP介导的平滑肌依赖性血管舒张功能。结果:与CMO+HFD组相比,DMO+HFD组:（1）血压相对增高;（2）糖耐量明显减弱;（3）Phen诱发差异的肠系膜小动脉收缩无明显差异;（4）内皮源性血管舒张效应:（1）无抑制剂（L-NAME+Indomethacin）预处理下,肠系膜小动脉ACh诱发的血管舒张功能减弱,最大舒张效应无明显差异。（2）抑制剂（LNAME+Indomethacin）预处理后EDHF源的内皮舒张效应减弱,最大效应明显降低;（5）平滑肌依赖性血管舒张效应:（1）SNP介导的去内皮的肠系膜小动脉舒张功能无明显差异;（2）外源性CNP介导的去内皮的肠系膜小动脉舒张功能明显减弱。结论:与CMO雄性子代相比,DMO雄性子代更不耐受高脂饮食,高脂饮食可导致DMO雄性子代糖耐量受损,动脉血压出现上升趋势;阻力血管EDHF源的内皮舒张功能以及外源性CNP介导的平滑肌依赖性血管舒张功能均受损。
张英展[6]（2021）在《自发性高血压大鼠血压发展过程中血管内皮依赖性收缩的变化及机制研究》文中进行了进一步梳理背景和目的血管内皮细胞释放的一系列具有血管活性的小分子物质是调节血管张力和维持心血管稳态的关键。在高血压和衰老等的病理生理状态下,血管内皮细胞功能障碍可损害血管结构和功能。而内皮源性血管活性因子失衡是内皮功能障碍的主要原因之一,其中,环氧合酶催化花生四烯酸代谢所生成的前列腺素类起重要作用。前列环素是花生四烯酸在内皮细胞中代谢的主要产物之一,长期以来被认为是一种内皮依赖性舒张因子,其通过作用于前列环素（I prostaglandin,IP）受体诱发血管舒张效应。然而,越来越多的研究表明,前列环素（prostaglandin I2,PGI2）也可以作为血管内皮依赖性收缩因子,通过作用于血管收缩受体,如血栓素A2（thromboxane-prostaglandin,TP）受体和/或前列腺素E2受体3亚型（E prostaglandin receptor-3,EP3）受体诱发血管收缩效应。同时,在衰老和/或血管疾病状态下血管内皮依赖性收缩（endothelium-dependent contractions,EDCs）可以增强,部分原因是环氧化酶产物的增加和/或其下游受体的表达和/或功能发生改变。自发性高血压大鼠（SHR）作为人类高血压模型一直以来被广泛研究,其在4周龄的血压仍与Wistar-Kyoto大鼠（WKY）相当,而大约在6周龄时可产生高血压,在3-4月龄则为高血压确立期。SHR的血压和血管在幼年到成年的转变中发生了很大的改变,然而EDCs在此期间的变化及其潜在机制目前仍不清楚。髂动脉主要为盆腔器官和腿部输送血液,是一些老年相关疾病的临床干预靶标。因此,本研究主要阐明SHR高血压发展过程中髂动脉及其它血管的EDCs的变化及其内在机制,以期为控制此时期血压的升高提供血管生物学方面的实验依据。此外,舒张血管和/或抑制血管收缩是预防和治疗高血压的方法之一。我们之前的研究表明,拮抗TP受体可以抑制PGI2在某些动脉中诱发的血管收缩作用,从而改善血管舒张效应。并且,进一步阻断EP3受体可以更好地改善血管张力。在大鼠肠系膜动脉等血管中,EP3受体拮抗剂L-798106不仅与TP受体拮抗剂SQ29548有协同作用,而且比TP受体拮抗剂SQ29548更好地抑制PGI2血管张力效应。因此,迫切需要探究L-798106对髂动脉内皮依赖性收缩的影响,以及在体给药后其对SHR高血压发展的影响。本研究通过分离不同年龄段（幼年:4周龄;成年:12-16周龄）的WKY和SHR髂动脉、肾动脉和主动脉进行生化和/或功能分析,以解决上述问题。材料与方法本研究采用4周龄及12-16周龄的雄性无特定病原体（SPF）级的WKY和SHR髂动脉、肾动脉和主动脉进行生化实验和功能分析。无创血压测量系统检测L-798106处理前后SHR的收缩压和心率;血管环张力检测系统检测WKY和SHR离体髂动脉、肾动脉和主动脉的血管反应性;高效液相色谱质谱联用法检测成年WKY和SHR的离体髂动脉PGI2代谢产物6-keto-PGF1α、Tx A2代谢产物Tx B2、PGE2、PGF2α和PGD2的生成;酶联免疫吸附法检测内皮胆碱能受体激动剂乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）在幼年和成年WKY和SHR离体髂动脉中诱导产生的PGI2代谢产物6-keto-PGF1α的水平;免疫印迹法检测幼年和成年WKY及同年龄段的SHR的髂动脉的EP3受体和TP受体的蛋白表达;实时定量PCR法检测幼年和成年WKY和SHR髂动脉的IP受体m RNAs水平;称量L-798106处理前后SHR的体重及心脏的重量并计算心脏体重比。结果1.在有一氧化氮（nitric oxide,NO）合酶抑制剂L-NAME存在的情况下,ACh诱发幼年SHR髂动脉强烈的血管收缩效应,该效应在去内皮处理后基本消失,因此该效应为EDCs。ACh诱发幼年WKY和SHR的髂动脉程度相当的EDCs（P>0.05）,但该EDCs在成年动物血管中减弱（P<0.01）,并且成年SHR的髂动脉的EDCs随年龄增长而减弱的幅度较小（P<0.05）。2.高效液相色谱质谱联用方法检测到成年WKY和SHR的髂动脉主要生成6-keto-PGF1α。与基础状态（仅在PSS,未加入ACh刺激）相比,ACh刺激后的幼年和成年WKY的髂动脉及同年龄段的SHR的髂动脉产生的6-keto-PGF1α均增加（P<0.01）;并且,基础状态下和ACh刺激后的6-keto-PGF1α水平均随年龄的增加而减少（P<0.01）。另外,PGI2、TP受体激动剂U46619或EP3受体激动剂硫前列酮在成年的髂动脉中诱发的血管收缩效应比在幼年的髂动脉中明显减弱（P<0.01）。3.幼年和成年WKY及相应年龄段的SHR髂动脉均表达TP和EP3受体蛋白。其中,幼年WKY和SHR髂动脉的TP受体蛋白表达水平无明显差异（P>0.05）,其在成年大鼠中均下调（P<0.01）,并且成年SHR髂动脉的TP受体蛋白表达水平高于同年龄段的WKY髂动脉（P<0.05）。与此不同,幼年WKY髂动脉的EP3受体蛋白表达水平高于幼年SHR髂动脉（P<0.05）,并且EP3受体的蛋白表达在成年中均下调（P<0.01）,然而成年WKY和SHR髂动脉的EP3受体蛋白表达无差异（P>0.05）。不同年龄段的WKY髂动脉的IP受体m RNA水平无明显差异（P>0.05）,而成年SHR髂动脉的IP受体m RNA水平高于幼年髂动脉（P<0.01）。4.在有L-NAME存在的情况下,ACh、PGI2诱发幼年SHR髂动脉血管收缩效应,其可被SQ29548或L-798106减弱（P<0.01）。并且,L-798106的抑制作用比SQ29548更大（P<0.01）。同时,PE收缩后,ACh诱发幼年SHR髂动脉的血管舒张效应被一双相收缩反应所减弱。给予SQ29548预处理后,该双相收缩反应有减弱的趋势（P>0.05）。而L-79810预6处理能够消除ACh诱发的这一双相收缩反应,从而只表现为血管舒张反应,并且舒张程度比SQ29548处理后更强（P<0.01）。与此一致,PE收缩后,PGI2诱发幼年和/或成年SHR髂动脉的血管收缩效应仅在SQ29548预处理后有减弱的趋势（P>0.05）,而L-798106预处理后将其逆转为血管舒张效应（P<0.01）。5.在有L-NAME存在的情况下,TP受体激动剂U46619可引起幼年SHR髂动脉强烈的浓度依赖性血管收缩效应,而L-798106处理明显减弱该收缩效应（P<0.01）。6.在有L-NAME存在的情况下,ACh诱发幼年SHR肾动脉或主动脉EDCs,该效应在成年SHR肾动脉中明显减弱（P<0.01）。与此一致,与幼年相比,成年WKY肾动脉或主动脉的EDCs亦明显减弱（P<0.01）。7.SHR的收缩压随着年龄的增长而逐渐升高。然而,L-798106给药组可抑制给药期内（15天）血压的上升（P<0.01）;对照组和L-798106给药组的体重、心率和心脏体重比无差异（P>0.05）;此外,在L-798106处理前,两组幼年SHR大鼠体重、心率无差异（P>0.05）。结论1.幼年WKY和SHR髂动脉存在程度相当的EDCs,且其在幼年向成年转变中随年龄的增长及SHR血压的升高而降低。2.与WKY髂动脉相比,由于TP、EP3受体下调程度的不同,SHR髂动脉的EDCs随年龄的增长而降低的幅度较小,从而表现为成年SHR的EDCs比成年WKY的要强。3.在幼年向成年转变过程中,其它血管中的肾动脉与主动脉,EDCs亦存在与髂动脉相类似的变化规律。4.L-798106除可拮抗EP3受体外,还能部分阻断TP受体的功能,但保留具有舒张作用的IP受体功能,从而抑制幼年SHR高血压的发展。
谢媛[7]（2021）在《KCNQ通道开放剂QO-83对心血管功能的影响》文中研究说明KCNQ基因编码的Kv7型钾离子通道,在神经、心血管系统分布广泛,QO-83是一个对Kv7通道有很强开放活性的小分子化合物,有望开发成治疗癫痫、疼痛等的药物。本课题重点观察QO-83在治疗神经精神疾病时对心血管系统可能的影响。目的:观察QO-83对大鼠和犬血压、心率的影响,分析对离体血管的作用,探讨其作用机制。方法:1.SD大鼠随机分成5组,腹腔注射分别给予溶媒、QO-83化合物四个剂量0.25 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg和2 mg/kg,比较麻醉大鼠血压、心率的变化。2.Beagle犬麻醉后静脉注射QO-83化合物0.2 mg/kg,0.4 mg/kg、0.8mg/kg,观察给药前后动物血压、心率、心电图的变化。3.SD大鼠吸入麻醉后,腹腔注射QO-83化合物1 mg/kg,用小动物超声观察心功能参数和血管内径给药前后的变化。4.麻醉大鼠分别给予神经节阻断剂六甲胺和胆碱受体阻断剂阿托品后,观察QO-83在0.5 mg/kg和1 mg/kg时对血压、心率和心电的影响。5.取大鼠主动脉、肠系膜小动脉,观察在离体用KCl、PE和4-AP预收缩血管后,在去内皮与内皮完整的情况下,QO-83在1μmol/L～100μmol/L浓度范围内对血管张力的影响并与RTG的舒血管作用进行比较。结果:1.QO-83在0.25 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg呈剂量依赖性的降低SD大鼠血压和心率,0.5、1、2 mg/kg给药后收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均脉压（MBP）下降有显着差异（P<0.05、0.01、0.01）,心率下降有显着差异（P<0.05、0.01、0.01）,2 mg/kg时心电图R-R间期明显延长并且有显着差异（P<0.05）。2.QO-83在0.2 mg/kg、0.4 mg/kg、0.8 mg/kg呈剂量依赖性的降低beagle犬血压和心率,给药后SBP（0.2、0.4、0.8 mg/kg）、DBP（0.4、0.8mg/kg）、MBP（0.4、0.8 mg/kg）下降有显着差异（P<0.05、0.05、0.01）,心率（0.8 mg/kg剂量）下降有显着差异（P<0.05）,心电图无明显差异。3.超声结果显示,SD大鼠按照1 mg/kg剂量腹腔注射给药30 min后,对大鼠的心率（HR）、射血分数（EF）、每搏输出量（SV）有显着抑制作用（P<0.01、0.05、0.05）,雌性大鼠比雄性大鼠表现更明显;对大鼠胸主动脉、肺动脉、腹主动脉和右侧颈动脉,血管内径无明显影响。4.提前用六甲铵阻断神经节和阿托品阻断M受体后可显着减轻QO-83（0.5 mg/kg、1 mg/kg剂量）对血压和心率的抑制（P<0.01、0.05）。5.QO-83在1～30μmol/L浓度范围内对KCl、4-AP、PE所引起的大鼠离体主动脉、肠系膜小动脉,无论是去内皮与不去内皮的血管收缩均无明显缓解。100μmol/L时对PE所诱导的肠系膜小动脉预收缩有舒缓作用,并且有明显差异（P<0.05）。结论:QO-83作为新型Kv7钾通道开放剂有一过性降压作用,其降压作用并不是通过直接激活KCNQ4通道来扩张血管,而是与开放SCG神经元上的M-电流,导致交感神经张力下降有关。
何承晋[8]（2020）在《合胞滋养细胞NEP经细胞外囊泡转运调控内皮依赖性血管舒张在子痫前期发病中的作用研究》文中研究说明研究背景:子痫前期（PE）是胎盘源性疾病,胎盘来源物质造成的胎盘发育异常和外周血管内皮功能障碍是其重要的病理基础,胎盘来源细胞外囊泡（PL-EVs）可能在对胎盘发育和外周血管内皮功能调控过程中发挥重要的物质转运功能。本研究旨在探究胎盘经PL-EVs调控滋养细胞、血管内皮细胞功能的分子机制,为PE防治提供新的思路和实验证据。方法:（1）超速离心法提取正常妊娠（NPL-EVs）及PE妊娠胎盘来源EVs（PEPL-EVs）,经尾静脉向CD1孕鼠注射肝素和/或PL-EVs;利用小动物无创血压仪监测小鼠血压,统计胎鼠出生体重和胎盘重量,ELIZA法检测小鼠尿液白蛋白,对小鼠肾脏组织进行PAS染色;利用PKH67、R-18标记PL-EVs,与细胞进行共培养或经尾静脉向孕鼠注射,随后通过共聚焦显微镜观察靶细胞对PL-EVs的摄取和质膜融合。（2）利用微血管张力测定系统检测小鼠子宫动脉由Ach介导的内皮依赖性血管舒张功能;将小鼠胎盘进行免疫荧光染色;利用肝素和PL-EVs处理HTR8/SVneo细胞,随后分别利用EdU染色、CCK-8法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡情况,通过Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力;使用肝素和PL-EVs处理HUVEC细胞后,分别通过管腔成型实验、CCK-8法、Western blot法检测细胞血管生成和增殖能力,通过Griess Reagent法和Western blot法检测细胞NO合成能力。（3）利用label free相对定量蛋白质组学方法检测PL-EVs中蛋白质;通过Western blot法和SDS-PAGE凝胶银染检验PL-EVs中Neprilysin的表达;胎盘免疫荧光染色检测Neprilysin的细胞定位;小鼠子宫动脉免疫荧光染色检测Neprilysin的细胞定位及表达水平;使用肝素和PL-EVs处理HUVEC细胞后,通过Western blot法检测细胞内Neprilysin表达水平;经尾静脉向CD1孕鼠注射重组Neprilysin蛋白;利用小动物无创血压仪监测小鼠血压,统计胎鼠出生体重和胎盘重量,对小鼠肾脏组织进行PAS染色,利用微血管张力测定系统检测小鼠子宫动脉由Ach介导的内皮依赖性血管舒张功能;利用分子间相互作用系统测定Neprilysin与ANP、CNP、AngⅡ、ET-1、缓激肽间亲和力。结果:（1）PEPL-EVs引起孕鼠动脉收缩压、尿液白蛋白水平显着升高,胎儿出生体重、胎盘重量明显降低,肾脏出现糖原聚集、肾小球肿胀等形态学改变,肝素可以部分逆转这些异常;PL-EVs主要被滋养细胞和血管内皮细胞摄取,肝素能有效抑制靶细胞对PL-EVs的摄取,但不能抑制靶细胞与PL-EVs进行质膜融合。（2）PEPL-EVs引起小鼠胎盘连接层相对面积显着减小,抑制小鼠子宫动脉由乙酰胆碱介导的内皮依赖性血管舒张,肝素可部分逆转这些异常;PEPL-EVs显着抑制滋养细胞侵袭功能,肝素可部分恢复细胞侵袭能力;PL-EVs可促进血管内皮细胞eNOSser1177磷酸化,诱导NO生成。（3）PEPL-EVs、PE胎盘组织中Neprilysin的含量明显高于正常;胎盘Neprilysin主要表达于合胞滋养细胞;PL-EVs携带NEP可进入血管内皮细胞引起细胞内NEP水平上升;重组Neprilysin蛋白显着削弱小鼠子宫动脉由Ach介导的内皮依赖性血管舒张,引起孕鼠动脉收缩压显着上升,但对胎儿出生体重、胎盘重量、小鼠肾脏无明显影响;在Neprilysin的常见底物（ANP、CNP、AngⅡ、ET-1、缓激肽）中,NEP与CNP的亲和力最高。结论:（1）PEPL-EVs可通过硫酸乙酰肝素蛋白多糖途径被滋养细胞和血管内皮细胞摄取,引起小鼠PE样表型;（2）PEPL-EVs通过抑制滋养细胞侵袭导致胎盘发育异常;（3）PEPL-EVs抑制小鼠子宫动脉由Ach介导的内皮依赖性血管舒张,但不依赖于内皮细胞的NO合成;（4）合胞滋养细胞NEP异常升高,经PL-EVs运输进入外周血管内皮细胞,可能通过优先结合并降解CNP抑制血管舒张功能,引起母体血压升高。
张晓东[9]（2019）在《桑色素在血管内皮细胞功能中的作用及机制研究》文中指出高血压是我国最常见的心血管疾病,其本质是微循环障碍。血压的升高是以外周阻力的增加为基础,其中阻力血管功能的改变促进了高血压的发生和发展。血管中的内皮细胞对维持血管功能尤为重要,内皮损伤导致血管功能障碍,引起血压升高。目前高血压患者主要通过服用降压药来控制血压,但是这些药物在维持血压的平稳性中具有局限性。研究发现,黄酮类化合物具有降血压的作用,桑色素被报道具有抗炎、抗氧化、抗凋亡的作用。但是,桑色素在血管内皮细胞功能中的作用还有待深入探究。本研究从桑色素在阻力血管内皮细胞功能和炎症诱导的内皮细胞损伤中的作用及机制两方面来探究其在高血压中的作用。主要结果如下:1、通过血管张力实验检测桑色素对离体大鼠肠系膜动脉血管功能的影响发现,桑色素可浓度梯度性的引起大鼠肠系膜动脉血管的舒张。在N-硝基-L-精氨酸甲酯（N?-Nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride,L-NAME）诱导的高血压大鼠动物模型中,桑色素也可浓度梯度性引起模型大鼠肠系膜动脉血管舒张。并且,桑色素与离体的模型大鼠肠系膜动脉血管共孵育,显着提高模型大鼠肠系膜动脉血管对乙酰胆碱（Acetylcholine,ACh）介导的血管舒张的能力。通过对大鼠血压的测量,发现,在给定的桑色素喂食量下可降低模型大鼠的血压,并可提高模型大鼠肠系膜动脉血管对乙酰胆碱介导的血管舒张能力。2、阻力血管对血压的控制起着重要作用。内皮衍生的超极化因子（Endothelium-derived hyperpolarizing factor,EDHF）通过引起内皮细胞超极化介导血管舒张,是介导阻力血管舒张的关键途径。内皮细胞中瞬时受体电位香草素亚家族4（Transient receptor potential vanilloid,TRPV4）通道的激活引起Ca2+内流可介导EDHF的产生。通过对离体大鼠肠系膜动脉血管进行血管张力实验发现,桑色素可内皮依赖性引起大鼠肠系膜动脉血管舒张。随后,在离体血管和细胞水平证明了桑色素通过激活TRPV4通道诱导内皮细胞中Ca2+内流介导血管舒张。由于TRPV4通道激活引起的细胞内Ca2+浓度的升高可激活参与EDHF机制的小电导钙激活的钾离子通道(small conductance Ca2+activated K+channels,SK)通道。通过对离体大鼠肠系膜动脉血管进行血管张力实验发现,SK通道参与桑色素介导的内皮依赖性的血管舒张。通过对原代内皮细胞中K+和细胞极化状态变化的研究发现,桑色素通过激活TRPV4和SK通道引起原代内皮细胞发生K+外流和细胞超极化。3、由于高血压的发生常伴有炎症水平的升高,炎症可使内皮细胞发生损伤,影响内皮细胞正常的功能。由于桑色素具有抗炎抗氧化的作用,因此,本研究在体外细胞水平探究桑色素对炎症引起的内皮细胞损伤的作用。细胞活力检测显示,氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）可显着降低人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的细胞活力,桑色素作用下可显着提高细胞活力。ox-LDL通过抑制HUVECs的细胞迁移能力、提高细胞氧化应激和细胞炎症因子水平引起HUVECs的损伤;桑色素作用下可显着缓解ox-LDL对HUVECs造成的损伤,说明桑色素对HUVECs起到保护作用。4、自噬是应激状态下的一种细胞保护机制,研究发现,天然化合物可以通过诱导内皮细胞产生自噬,起到心血管保护作用。本研究通过对自噬相关蛋白的表达和介导自噬产生的信号通路的分析来探究桑色素对内皮细胞的保护作用。结果显示:桑色素作用于ox-LDL处理的HUVECs可显着提高细胞内LC3蛋白和降低p62蛋白的表达,提高了HUVECs的自噬水平。自噬抑制剂氯喹（chloroquine phosphate,CQ）作用下,显着抑制HUVECs的细胞迁移能力、提高细胞氧化应激和提高细胞炎症因子水平。通过CQ抑制细胞自噬可以逆转桑色素对HUVECs的保护作用。对诱导自噬产生的信号通路的探究发现,在桑色素的作用下,细胞中p-AMPK的表达提高、p-mTOR的表达降低,说明AMPK信号通路被激活。在AMPK抑制剂Compoud C（CC）的作用下,AMPK信号通路被抑制、桑色素诱导的自噬水平的升高被抑制、桑色素对HUVECs起到保护作用被逆转。说明,桑色素通过激活AMPK信号通路诱导自噬产生介导对HUVECs的保护作用。
汤纳平[10]（2018）在《模拟微重力效应对肺微血管内皮细胞的影响及其机制研究》文中研究说明目的内皮细胞（endothelial cell）作为血管壁的组成部分,参与血管功能的调节。动物机体微血管极其丰富,其内壁所覆盖的内皮细胞所占有面积约为大血管内皮细胞总和的50倍。因此,微血管内皮细胞异常会对血管系统功能产生巨大影响。本实验以人肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cell,PMEC）作为研究对象,观察模拟微重力效应对人PMEC的影响;分析模拟微重力效应下人PMEC的miRNA表达谱,验证差异表达的miRNAs;并对差异表达最显着的miR-503-5p在微重力条件下对人PMEC的作用及其机制展开研究;最后通过大动物（比格犬）实验确认模拟微重力效应对犬PMEC的影响以及对犬血压和心电图的影响,旨在从分子、细胞和整体动物水平,研究模拟微重力效应对微血管内皮细胞的影响,揭示模拟微重力环境下的心血管效应,为航天飞行安全提供实验依据。方法以人PMECs为模型,采用旋转培养器旋转培养72小时模拟微重力效应。采用Annexin-V Fluoresceine Isothiocyanate（FITC）和Propidium Iodide（PI）双染法检测细胞凋亡情况,采用JC-1荧光探针法检测模拟微重力效应对细胞线粒体膜电位的影响,采用Caspase-Glo?3/7试剂盒检测凋亡执行因子Caspase 3/7活性。并通过透射电镜检测模拟微重力效应对人PMEC超微结构的影响。通过Agilent human miRNA（8*60K）V19.0芯片分析模拟微重力条件下人PMEC miRNAs的表达谱,并通过实时定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）验证miRNAs的差异表达。采用TargetScan 7.1、TarBase v7.0、miRDB 2016在线预测软件预测差异表达miRNAs的靶基因,通过在线软件GeneCoDis3分析靶基因所涉及的生物过程和信号通路。通过采用HiPerFect Transfection Reagent将miR-503-5p模拟物（miR-503-5p mimic）和抑制剂（LNA-antimiR-503-5p）转染到细胞以高表达或沉默miR-503-5p。采用qRT-PCR和Western blot分析miR-503-5p靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况以及靶基因IGF-1R和AKT（总AKT和磷酸化AKT）蛋白的表达情况。以比格犬为实验动物,穿戴马甲尾吊7天模拟微重力效应。第8天解剖2只尾吊组动物和2只正常重力对照组动物,取肺组织用于透射电镜检查。同时,剩余动物解除尾吊进入恢复期。实验期间称量动物体重和摄食量,采用血球仪和全自动生化分析仪分别检测动物血液学和血清生化指标,并通过透射电镜观察尾吊模拟微重力对犬PMEC的影响,通过DSI遥测系统检测动物血压和心电图的改变情况。结果旋转培养模拟微重力效应72小时后,人PMEC凋亡率显着高于正常对照组（P<0.01）,线粒体膜电位出现显着下降（P<0.05）,Caspase 3/7的活性显着升高（P<0.01）。细胞透射电镜观察结果显示,旋转培养72小时后细胞出现典型的凋亡改变特征,包括染色质边集、线粒体出现破坏、凋亡小体形成。按筛选标准（改变倍数>2,P值<0.05,且Flag值/Call值显示为P）,芯片分析共筛选出8个差异表达的miRNAs,其中miR-503-5p、miR-424-5p、miR-4485、miR-630、miR-5703和miR-937-5p表达上调（与对照组相比,上调倍数分别为6.92、2.07、2.28、3.08、2.41和2.44）,miR-1973和miR-4430表达下调（与对照组相比,下调倍数分别为0.39和0.48）。qRT-PCR验证结果与芯片结果一致。miR-503-5p为表达上调最显着的miRNA。通过软件预测,这些差异表达miRNAs共涉及9186个靶基因,主要涉及DNA依赖性转录调控、信号转导、多细胞脏器发育、跨膜转运、细胞凋亡过程、从RNA聚合酶II转录调控启动子区转录的正向调控、离子运输、细胞粘附等生物过程,并涉及癌症信号通路,MAPK信号通路、局部粘附、细胞因子-受体相互作用、内吞、肌动蛋白细胞骨架调控、神经活性配体-受体相互作用、趋化因子信号转导通路、Wnt信号通路、钙信号通路等。在正常重力条件下,miR-503-5p mimic（模拟物）转染人PMEC后,细胞凋亡率显着高于miR-503-5p mimic NC组（阴性对照组）（P<0.01）和仅培养基对照组（Control组）（P<0.01）。在转旋培养模拟微重力效应72小时后,miR-503-5p mimic组细胞凋亡率显着高于miR-503-5p mimic NC组（P<0.01）和仅进行旋转培养组（P<0.01）。在转旋培养72小时后,LNA-miR-503-5p（miR-503-5p抑制剂）组细胞凋亡率显着低于LNAmiR-503-5p-NC（阴性对照）组（P<0.01）和仅进行旋转培养组（P<0.01）。旋转培养72小时后（miR-503-5p高表达）,人PMEC中Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于正常重力对照组细胞（P<0.01）。而在转旋培养72小时后,LNA-miR-503-5p组（miR-503-5p沉默）Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均显着高于LNA-miR-503-5p-NC组（P<0.05和P<0.01）和仅进行旋转培养组（P<0.01）。另外,Western blot分析结果还显示,旋转培养72小时后,人PMEC中IGF-1R和pAKT蛋白的表达量均低于正常重力对照组细胞（P<0.01）。而在转旋培养72小时后,LNA-miR-503-5p转染组细胞中IGF-1R和pAKT蛋白表达水平高于LNA-miR-503-5p-NC转染组细胞（P<0.01和P<0.05）和仅进行旋转培养组细胞（P<0.01）。与尾吊前相比,比格犬自尾吊第3天开始体重出现略微下降,至第7天下降最为明显,停止尾吊后动物体重逐渐恢复。动物摄食量下降要早于体重改变,其中第3天摄食下降作为明显,第7天起摄食量逐渐恢复,解除尾吊后摄食量恢复至对照组水平。尾吊对动物血液学和血清生化指标无显着影响。尾吊7天后,犬肺微血管内皮可见凋亡早期改变,包括内皮肿胀,核内染色质边集,并可见线粒体肿胀。同时,在尾吊早期阶段（第1天内）可致动物血压（收缩压、舒张压和平均动脉压）升高和心率加快,第3天起尽管无统计学差异,但仍可见尾吊组动物血压低于正常重力对照组。在去除尾吊0.5小时后可见动物收缩压、舒张压、平均动脉压出现一过性下降,尽管与正常重力对照相比无统计学差异,但其下降程度明显,同时可见心率略有升高趋势。该现象于去除尾吊后约1-2小时即恢复。结论在模拟微重力效应下,离体人PMEC可出现凋亡改变。该过程中涉及多个miRNAs的差异表达,其中miR-503-5p上调最为显着,在该过程中起到关键作用;其机制可能涉及对靶基因Bcl-2表达的调控以及IGF-1R/AKT信号通路的调节。尾吊7天模拟微重力效应可导致比格犬PMEC损伤,主要表现为凋亡早期改变,包括内皮肿胀、核内染色质边集、线粒体肿胀。此外,尾吊3天可见比格犬血压、心率可出现明显升高,而随后血压出现轻微下降趋势;在去除尾吊后,动物出现短时的血压下降,并很快即可恢复。
二、血管平滑肌细胞的内皮依赖性超极化(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管平滑肌细胞的内皮依赖性超极化(英文)（论文提纲范文）
（1）大鼠冠状动脉对细胞外酸中毒收缩性增强与其血管平滑肌细胞TMEM16A/ANO1高活性有关（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 钙激活氯通道在细胞外酸中毒收缩大鼠冠状动脉中的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同程度的酸化对不同状态下的大鼠不同动脉肌张力的影响 |
| 2.2 去氯对细胞外酸中毒收缩RCA的影响 |
| 2.3 氯通道抑制剂对细胞外酸中毒收缩RCA的影响 |
| 2.4 L-型电压门控钙通道抑制剂对细胞外酸中毒收缩RCA的影响 |
| 2.5 细胞内钙释放抑制剂对细胞外酸中毒收缩RCA的影响 |
| 2.6 ANO1 抗体对细胞外酸中毒收缩RCA的影响 |
| 3 结论 |
| 第二部分 细胞外酸中毒对大鼠动脉平滑肌细胞钙激活氯电流的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞外酸中毒对大鼠不同ASMCs钙激活氯电流的影响 |
| 2.2 CaCC抑制剂对细胞外酸中毒增大RCA ASMC钙激活氯电流的影响 |
| 2.3 去氯对细胞外酸中毒增大RCA ASMC钙激活氯电流的影响 |
| 2.4 L-型电压门控钙通道抑制剂对细胞外酸中毒增大 钙激活氯电流的影响 |
| 2.5 细胞内钙释放抑制剂对细胞外酸中毒增大RCA ASMC钙激活氯电流的影响 |
| 2.6 ANO1 抗体对细胞外酸中毒增大RCAASMC钙激活氯电流的影响 |
| 2.7 细胞外酸中毒对大鼠不同ASMCs膜电位的影响 |
| 2.8 ANO1 抗体对细胞外酸中毒去极化RCAASMC膜电位的影响 |
| 3 结论 |
| 第三部分 细胞外酸中毒对大鼠动脉平滑肌细胞内Ca~(2+)和Cl~-浓度的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞外酸中毒对大鼠不同ASMCs的细胞内Cl~-浓度的影响 |
| 2.2 去氯对RCA ASMC 内 Cl~-浓度,以及细胞外酸中毒引起RCA ASMC 内 Cl~-浓度改变的影响 |
| 2.3 CaCC抑制剂对细胞外酸中毒引起RCA ASMC内 Cl~-浓度改变的影响 |
| 2.4 细胞外酸中毒对RCA ASMC内钙释放和外钙内流的作用,以及相应抑制剂对其的影响 |
| 2.5 ANO1 抗体对细胞外酸中毒引起RCA ASMC内 Cl~-和Ca~(2+)浓度改变的影响 |
| 3 结论 |
| 第四部分 TMEM16A/ANO1 在大鼠不同动脉及其平滑肌细胞中的表达差异 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠不同动脉平滑肌层上ANO1 蛋白的分布和含量的差异 |
| 2.2 大鼠不同ASMCs ANO1 蛋白的分布和含量的差异 |
| 2.3 大鼠不同动脉平滑肌层上TMEM16A m RNA的表达差异 |
| 2.4 大鼠不同动脉平滑肌层上ANO1 蛋白的表达差异 |
| 3 结论 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Ca~(2+)和 Cl~-通道在阻力动脉血管张力调节中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）前列腺素类物质参与了肾内动脉平滑肌细胞内向整流K+通道的调节（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 影响BaCl_2收缩大鼠肾内动脉的因素 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同类型的K~+通道阻滞剂对肾内动脉的收缩作用 |
| 2.2 内皮、NOS 和 COX 抑制剂对BaCl_2诱导RIRAs 收缩的影响 |
| 2.3 各种血管收缩剂对BaCl_2诱导的RIRAs 收缩的影响 |
| 2.4 TPR 拮抗剂对 BaCl_2诱导 RIRAs 收缩的影响 |
| 第二部分 Kir通道在大鼠肾内动脉平滑肌细胞中的表达及功能 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 BaCl_2 对 RIASMCs 钙浓度的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Kir通道在调节血管张力中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（3）七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节血管平滑肌收缩（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节大鼠主动脉血管平滑肌收缩 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分 七氟烷和异氟烷通过PI3K/Rho激酶调节糖尿病大鼠主动脉血管平滑肌收缩 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第三部分 七氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节大网膜动脉血管平滑肌收缩 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 吸入性麻醉药调控血管平滑肌张力的细胞机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
（4）SOCE调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中的作用及机制（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分:通过CPA探究SOCE调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中的作用及机制 |
| 1.组织层面探究CPA/SOCE对肠黏膜下微血管的舒张作用 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 2.细胞层面探究CPA/SOCE对肠黏膜下微血管舒张机制 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 小结 |
| 3.组织层面探究CPA/SOCE对结肠炎小鼠肠系膜2 级微细动脉舒张作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第二部分:探究SOCE在调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中作用的分子机制 |
| 1.在组织层面探究TPEN/SOCE对肠黏膜下微动脉舒张机制 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 2.组织层面探究TPEN/SOCE对结肠炎小鼠肠系膜微细动脉舒张作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 SOCE 调控肠黏膜下微血管收缩舒张功能及其在结肠炎中的作用及机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
（5）妊娠糖尿病子代肠系膜小动脉血管反应性改变（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验仪器 |
| 1.2 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 妊娠糖尿病孕鼠模型制备 |
| 2.2 子代大鼠血压监测 |
| 2.3 经腹腔注射葡萄糖耐量试验(Intraperitoneal Glucose Tolerance Test,IPGTT) |
| 2.4 肠系膜动脉三级分支血管环张力检测 |
| 3.数据处理方法 |
| 结果 |
| 1.妊娠糖尿病孕鼠模型制备和鉴定 |
| 2.高脂饮食干预后不同子代血压和糖耐量的变化 |
| 2.1 安静状态下无创尾动脉血压及麻醉状态下颈动脉插管血压改变 |
| 2.2 糖耐量变化 |
| 3.高脂饮食诱导后不同子代肠系膜小动脉对KCL和 Phen引起的血管反应性比较 |
| 3.1 高脂饮食诱导后不同子代内皮完整和去内皮肠系膜小动脉对KCL反应性比较 |
| 3.2 高脂饮食诱导后不同子代内皮完整和去内皮肠系膜小动脉对Phen反应性比较 |
| 4.高脂饮食诱导后不同子代内皮完整肠系膜小动脉ACh介导的内皮依赖性血管舒张功能 |
| 4.1 ACh介导的内皮依赖性血管舒张功能 |
| 4.2 L-NAME+Indomethacin预处理对ACh介导的内皮依赖性血管舒张影响 |
| 5.高脂饮食诱导下不同子代去内皮肠系膜小动脉对SNP和 CNP介导的平滑肌依赖性血管舒张功能 |
| 5.1 一氧化氮供体(SNP)的舒张作用 |
| 5.2 EDHF抑制剂(CNP)的舒张作用 |
| 讨论 |
| 1.妊娠糖尿病与胎儿编程 |
| 2.妊娠糖尿病子代血管功能变化 |
| 3.利尿肽 |
| 4.DMO血压性别差异 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 妊娠糖尿病子代血管功能障碍 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）自发性高血压大鼠血压发展过程中血管内皮依赖性收缩的变化及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 花生四烯酸代谢通路 |
| 1.2 环氧化酶代谢通路 |
| 1.3 前列腺素及其受体 |
| 1.4 前列环素与内皮依赖性收缩 |
| 1.5 前列环素与高血压、年龄 |
| 1.6 本课题的目的和研究意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂及仪器 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物购买及饲养 |
| 2.2.2 血管舒缩反应性检测 |
| 2.2.3 高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)检测不同前列腺素的水平 |
| 2.2.4 酶联免疫法(ELISA)测定环氧化酶代谢产物水平 |
| 2.2.5 蛋白质免疫印迹法检测 |
| 2.2.6 实时定量PCR反应 |
| 2.2.7 尾套法无创血压测量系统检测SHR大鼠血压和心率 |
| 2.2.8 L-798106 口服给药监测幼年SHR血压变化 |
| 2.2.9 统计分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 SHR血压发展过程中髂动脉的EDCs及其变化规律 |
| 3.1.1 乙酰胆碱在髂动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.1.2 COX抑制剂或NO对乙酰胆碱诱发的血管效应的影响 |
| 3.2 PGI2 的生成及血管舒缩作用 |
| 3.2.1 乙酰胆碱诱导髂动脉PGI_2的生成 |
| 3.2.2 WKY和 SHR髂动脉PGIS的表达 |
| 3.2.3 PGI_2在WKY和 SHR髂动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.3 TP或EP3 受体对髂动脉的血管舒缩反应的影响 |
| 3.3.1 TP或EP3 受体激动剂诱发髂动脉的血管舒缩反应 |
| 3.3.2 WKY和 SHR髂动脉TP、EP3和IP受体的表达 |
| 3.3.3 TP受体拮抗剂或EP3 受体拮抗剂对乙酰胆碱诱发幼年SHR髂动脉的血管效应的影响 |
| 3.3.4 TP受体拮抗剂或EP3 受体拮抗剂对PGI_2诱发SHR髂动脉的血管效应的影响. |
| 3.3.5 TP受体拮抗剂或EP3 受体拮抗剂对PGI_2诱发幼年SHR肾动脉的血管效应的影响 |
| 3.4 L-798106 处理对U46619 诱发的血管效应的影响 |
| 3.5 其它血管的EDCs效应 |
| 3.5.1 乙酰胆碱在肾动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.5.2 乙酰胆碱在主动脉所引起的血管舒缩反应 |
| 3.6 L-798106 处理对幼年SHR血压进程的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 SHR血压发展过程中血管EDCs变化 |
| 4.2 PGI_2的生成及血管舒缩功能变化 |
| 4.3 TP、EP3 受体参与血管EDCs作用 |
| 4.4 L-798106 对TP受体的拮抗作用 |
| 4.5 L-798106 处理抑制幼年SHR高血压的发展 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 内皮源性收缩因子调节血管张力的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）KCNQ通道开放剂QO-83对心血管功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 综述 Kv7通道的表达和在血管平滑肌中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）合胞滋养细胞NEP经细胞外囊泡转运调控内皮依赖性血管舒张在子痫前期发病中的作用研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 PE胎盘来源EVs诱导孕鼠高血压、尿蛋白、FGR等 PE样表型 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 PE胎盘来源EVs参与调控小鼠子宫动脉舒张功能及胎盘发育 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 合胞滋养细胞NEP经胎盘来源EVs转运调控子宫动脉舒张功能 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（9）桑色素在血管内皮细胞功能中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 血管内皮细胞与高血压 |
| 1.1.1 血管内皮细胞 |
| 1.1.2 高血压 |
| 1.1.3 内皮细胞功能障碍与高血压 |
| 1.2 黄酮类化合物 |
| 1.2.1 黄酮类化合物概述 |
| 1.2.2 桑色素简介 |
| 1.2.3 桑色素与高血压 |
| 1.3 瞬时电位离子通道 |
| 1.3.1 TRP通道概述 |
| 1.3.2 TRPV4 通道简介 |
| 1.3.3 TRPV4 通道与高血压 |
| 1.4 自噬 |
| 1.4.1 自噬概述 |
| 1.4.2 自噬在内皮细胞中的作用 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 |
| 1.5.1 研究背景及立题依据 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第二章 桑色素对L-NAME诱导的高血压的作用研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 动物 |
| 2.2.2 实验试剂和仪器 |
| 2.2.3 试剂和溶液的配制 |
| 2.2.4 Wire myography血管张力检测 |
| 2.2.5 Pressure myography血管张力检测 |
| 2.2.6 血压检测 |
| 2.2.7 高血压大鼠造模 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 桑色素对离体大鼠肠系膜动脉血管功能的影响 |
| 2.3.2 桑色素通过体外作用对离体高血压大鼠肠系膜动脉血管功能的影响 |
| 2.3.3 桑色素对高血压大鼠血压的影响 |
| 2.3.4 桑色素喂食对高血压大鼠肠系膜动脉血管功能的影响 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 桑色素在肠系膜动脉血管舒张中的作用机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 动物、质粒和细胞 |
| 3.2.2 实验试剂和仪器 |
| 3.2.3 试剂和溶液的配制 |
| 3.2.4 Wire myography血管张力检测 |
| 3.2.5 Pressure myography血管张力检测 |
| 3.2.6 肠系膜原代动脉内皮细胞分离与培养 |
| 3.2.7 免疫荧光染色 |
| 3.2.8 Western Blot分析 |
| 3.2.9 细胞内Ca~(2+)检测 |
| 3.2.10 细胞培养和转染 |
| 3.2.11 细胞内K+检测 |
| 3.2.12 细胞膜电位检测 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 内皮细胞对桑色素介导的血管舒张功能的影响 |
| 3.3.2 NO通路对桑色素介导血管舒张作用的影响 |
| 3.3.3 PGI2 通路对桑色素介导血管舒张作用的影响 |
| 3.3.4 H2O2 通路对桑色素介导血管舒张作用的影响 |
| 3.3.5 TRPV4 通道对桑色素介导的血管舒张作用的影响 |
| 3.3.6 TRPV4 通道对桑色素介导的肠系膜原代动脉内皮细胞Ca~(2+)内流的影响 |
| 3.3.7 桑色素对TRPV4 基因敲除小鼠肠系膜原代动脉内皮细胞中Ca~(2+)内流的影响 |
| 3.3.8 桑色素对过表达TRPV4的HEK293 细胞中Ca~(2+)内流的影响 |
| 3.3.9 SK通道对桑色素介导的血管舒张作用的影响 |
| 3.3.10 桑色素对肠系膜原代动脉内皮细胞K+外流的影响 |
| 3.3.11 桑色素对肠系膜原代动脉内皮细胞膜电位变化的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 桑色素在ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中的作用研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 细胞株 |
| 4.2.2 实验试剂和仪器 |
| 4.2.3 试剂和溶液的配制 |
| 4.2.4 细胞活力检测(台盼蓝染色计数法) |
| 4.2.5 细胞迁移(transwell) |
| 4.2.6 细胞活性氧(ROS)检测 |
| 4.2.7 SOD和 MDA检测 |
| 4.2.8 qRT-PCR分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 桑色素对ox-LDL处理的HUVECs细胞活力变化的影响 |
| 4.3.2 桑色素对ox-LDL处理的HUVECs细胞迁移变化的影响 |
| 4.3.3 桑色素对ox-LDL处理的HUVECs细胞氧化应激水平的影响 |
| 4.3.4 桑色素对ox-LDL处理的HUVECs细胞炎症因子变化的影响 |
| 4.3.5 桑色素对ox-LDL处理的HUVECs细胞粘附分子变化的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 桑色素在内皮细胞损伤中的作用机制探究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 细胞株 |
| 5.2.2 实验试剂和仪器 |
| 5.2.3 试剂和溶液的配制 |
| 5.2.4 Western Blot分析 |
| 5.2.5 细胞迁移(transwell) |
| 5.2.6 细胞活性氧(ROS)检测 |
| 5.2.7 qRT-PCR分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 桑色素对HUVECs细胞自噬水平的影响 |
| 5.3.2 桑色素介导的自噬对HUVECs细胞迁移的影响 |
| 5.3.3 桑色素介导的自噬对HUVECs细胞氧化应激水平变化的影响 |
| 5.3.4 桑色素介导的自噬对HUVECs细胞炎症水平的影响 |
| 5.3.5 AMPK信号通路对桑色素介导的HUVECs自噬水平的影响 |
| 5.3.6 桑色素介导的AMPK信号通路对HUVECs细胞迁移的影响 |
| 5.3.7 桑色素介导的AMPK信号通路对HUVECs氧化应激水平的影响 |
| 5.3.8 桑色素介导的AMPK信号通路对HUVECs细胞炎症水平的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 |
（10）模拟微重力效应对肺微血管内皮细胞的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 微重力与模拟微重力效应 |
| 1.2 内皮细胞在血管功能调节中的作用 |
| 1.3 微重力效应对血管功能的影响 |
| 1.3.1 微重力效应对脑血管的影响 |
| 1.3.2 微重力效应对颈部血管的影响 |
| 1.3.3 微重力效应对胸部血管的影响 |
| 1.3.4 微重力效应对腹部血管的影响 |
| 1.3.5 微重力效应对下肢/后肢血管的影响 |
| 1.4 微重力效应对血管内皮细胞功能影响研究进展 |
| 1.4.1 微重力效应对大血管内皮细胞的影响 |
| 1.4.2 微重力效应对微血管内皮细胞的影响 |
| 1.4.3 机械信号感受器在微重力效应对血管内皮细胞影响中的作用 |
| 1.5 miRNA的发现、产生及作用特点 |
| 1.5.1 miRNA的发现 |
| 1.5.2 miRNA的产生 |
| 1.5.3 miRNA的作用方式 |
| 1.6 miRNA对血管内皮细胞的作用 |
| 1.6.1 miRNA对内皮细胞结构和完整性的影响 |
| 1.6.2 miRNA对内皮细胞表达分子的调节作用 |
| 1.6.3 miRNA对内皮细胞凋亡的影响 |
| 1.7 研究目的和意义 |
| 1.8 研究方案和内容 |
| 第二章 模拟微重力效应对人肺微血管内皮细胞的影响 |
| 2.1 材料和设备 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞复苏、培养、传代及冻存 |
| 2.2.2 旋转培养器模拟微重力效应 |
| 2.2.3 细胞凋亡检测 |
| 2.2.4 线粒体膜电位检测 |
| 2.2.5 Caspase3/7活性检测 |
| 2.2.6 电镜检测 |
| 2.2.7 实验分组 |
| 2.2.8 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 模拟微重力效应对人PMEC凋亡的影响 |
| 2.3.2 模拟微重力效应对人PMEC线粒体膜电位的影响 |
| 2.3.3 模拟微重力效应对人PMEC Caspase-3/7 活性的影响 |
| 2.3.4 模拟微重力效应对人PMEC超微结构的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 模拟微重力条件下人肺微血管内皮细胞中miRNAs表达谱研究 |
| 3.1 材料和设备 |
| 3.1.1 细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 旋转培养器模拟微重力效应 |
| 3.2.3 RNA抽提和纯化 |
| 3.2.4 miRNA芯片分析 |
| 3.2.5 实时定量PCR验证miRNA表达情况 |
| 3.2.6 miRNAs靶基因预测 |
| 3.2.7 实验分组 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 芯片分析 |
| 3.3.2 实时定量PCR扩增效率和特异性 |
| 3.3.3 实时定量PCR验证芯片结果 |
| 3.3.4 靶基因预测 |
| 3.3.5 预测靶基因功能富集分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 miR-503-5p在模拟微重力效应诱导人肺微血管内皮细胞凋亡中的作用及机制研究 |
| 4.1 材料和设备 |
| 4.1.1 细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 旋转培养器模拟微重力效应 |
| 4.2.3 细胞凋亡检测 |
| 4.2.4 RNA抽提和纯化 |
| 4.2.5 逆转录 |
| 4.2.6 实时定量PCR |
| 4.2.7 细胞转染 |
| 4.2.8 Western blot检测靶基因蛋白表达 |
| 4.2.9 实验分组 |
| 4.2.10 统计分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 在正常重力条件下miR-503-5p高表达可导致人PMEC凋亡 |
| 4.3.2 miR-503-5p高表达加重微重力效应所导致的人PMEC凋亡 |
| 4.3.3 沉默miR-503-5p减轻微重力效应所导致的人PMEC凋亡 |
| 4.3.4 miR-503-5p对靶基因Bcl-2 表达的影响 |
| 4.3.5 miR-503-5p对 IGF-1R和 AKT蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 尾吊模拟微重力效应对比格犬肺微血管内皮细胞及心血管系统指标的影响研究 |
| 5.1 材料和设备 |
| 5.1.1 动物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 遥测系统介绍 |
| 5.2.2 动物手术 |
| 5.2.3 动物分组 |
| 5.2.4 比格犬尾吊模拟微重力效应 |
| 5.2.5 体重和摄食量检测 |
| 5.2.6 心电图和血压检测 |
| 5.2.7 血液学指标检测 |
| 5.2.8 血清生化指标检测 |
| 5.2.9 电镜检测 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 尾吊模拟微重力效应对动物体重的影响 |
| 5.3.2 尾吊模拟微重力效应对动物摄食量的影响 |
| 5.3.3 尾吊模拟微重力效应对动物血液学的影响 |
| 5.3.4 尾吊模拟微重力效应对动物血清生化指标的影响 |
| 5.3.5 尾吊模拟微重力效应对动物PMEC的影响 |
| 5.3.6 尾吊模拟微重力效应对动物心电图和动脉血压的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文和参加科研情况 |
四、血管平滑肌细胞的内皮依赖性超极化(英文)（论文参考文献）
- [1]大鼠冠状动脉对细胞外酸中毒收缩性增强与其血管平滑肌细胞TMEM16A/ANO1高活性有关[D]. 郭鹏美. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]前列腺素类物质参与了肾内动脉平滑肌细胞内向整流K+通道的调节[D]. 王野. 山西医科大学, 2021(01)
- [3]七氟烷和异氟烷通过PI3K-C2α/Rho激酶调节血管平滑肌收缩[D]. 杨绍忠. 山东大学, 2021(11)
- [4]SOCE调控肠黏膜下微血管舒张及其在结肠炎中的作用及机制[D]. 张露云. 重庆医科大学, 2021(01)
- [5]妊娠糖尿病子代肠系膜小动脉血管反应性改变[D]. 罗娟娟. 福建医科大学, 2021(02)
- [6]自发性高血压大鼠血压发展过程中血管内皮依赖性收缩的变化及机制研究[D]. 张英展. 汕头大学, 2021
- [7]KCNQ通道开放剂QO-83对心血管功能的影响[D]. 谢媛. 河北医科大学, 2021(02)
- [8]合胞滋养细胞NEP经细胞外囊泡转运调控内皮依赖性血管舒张在子痫前期发病中的作用研究[D]. 何承晋. 重庆医科大学, 2020
- [9]桑色素在血管内皮细胞功能中的作用及机制研究[D]. 张晓东. 江南大学, 2019(05)
- [10]模拟微重力效应对肺微血管内皮细胞的影响及其机制研究[D]. 汤纳平. 西北工业大学, 2018(02)