一、骨、软骨组织工程种子细胞及其免疫学相关研究进展（论文文献综述）
张泽亚,潘博,蒋海越[1]（2021）在《诱导性多能干细胞在耳郭软骨重建中的研究进展》文中研究说明诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cell,i PSC）已成为治疗软骨缺损及软骨重建方面的热点。先天性小耳畸形以先天性耳郭软骨缺失为特点。耳郭软骨组织工程技术被赋予重望。而找寻合适的组织工程种子细胞至关重要。iPSC具有全能干细胞特性,可作为种子细胞在修复重建外科领域发挥着重要作用,同时可以建立疾病的细胞模型,更真实地还原疾病发生过程。现就iPSC的概况、耳郭的形成以及iPSC在耳郭重建领域的研究进展作一综述。
刘小刚,李甜,张舵[2]（2022）在《中药有效成分促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的作用与机制》文中指出背景:骨髓间充质干细胞是软骨组织工程中热门的种子细胞之一,随着医学研究的不断进步,诸多实验表明某些中药有效成分对骨髓间充质干细胞诱导成软骨细胞具有促进作用。目的:对不同类型的复方中药与单味中药有效成分促进骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨细胞的作用、中药调控的机制与存在的问题等方面进行综述,以期为中药有效成分促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞提供研究思路。方法:第一作者通过检索中国知网、万方、PubMed、Scopus和Web of Science数据库的相关文献,以"复方中药,单味中药,骨髓间充质干细胞,软骨细胞,组织工程"为中文检索词,以"compound Chinese medicine,single Chinese medicine,bone marrow mesenchymal stem cells,chondrocytes,tissue engineering"为英文检索词进行检索,最终选取符合标准的60篇文献进行综述。结果与结论:（1）某些复方中药与单味中药的有效成分对骨髓间充质干细胞诱导成软骨细胞具有促进作用,是中药应用于软骨组织工程研究的重要部分;（2）利用中药有效成分诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞,逐步应用于软骨组织工程进行软骨修复,已经成为祖国医学不断发展壮大的热门趋势,其中透骨消痛颗粒与人参皂苷、黄芪甲苷、川芎嗪均有较好的作用效果,可以展开更多的实验项目进行研究。
李思雨,刘凯楠,王思涵,李粤源,崔逸爽,王茜[3]（2021）在《间充质干细胞复合多孔钽治疗骨关节炎的研究进展》文中研究说明骨关节炎（osteoarthritis,OA）通常以关节透明软骨结构和功能的损伤、进行性退化的方式开始,进而影响所有关节结构。目前临床对其主要采取保守治疗缓解症状,症状严重时手术干预,但仍具有一定局限性和风险性。如今,组织工程学已广泛应用于关节软骨缺损的修复,并取得一定的进展。本文主要综述间充质干细胞以及金属材料多孔钽通过修复软骨缺损治疗OA的研究进展。
杜鹃[4]（2021）在《原位水热法合成二氧化钛纳米线及生物相容性研究》文中研究说明二氧化钛（TiO2）纳米线是一种典型的纳米无机材料,具有超高的比表面积、优良的光催化活性和较好的生物相容性,已经广泛用于工业和生物医学等领域。基质辅助水热法因操作简单、产物结构易于调控等优点已经成为当前最受欢迎的TiO2纳米线合成方法。传统的基质材料主要包括FTO玻璃及钛片,然而所制备的TiO2纳米线与基质材料之间的界面作用力往往较弱,导致TiO2纳米线易于从基质材料表面脱落,形态与结构难以控制。本研究拟以TiO2纳米颗粒片为基质材料,采用碱性水热反应法在TiO2纳米颗粒片表面原位生长TiO2纳米线膜,通过改变水热温度等参数对其结构与形态进行调控;进一步采用细胞培养方式初步探究了TiO2纳米线膜的生物相容性。本论文主要分为以下三个部分:（1）TiO2纳米线的合成及表征首先以TiO2纳米颗粒为基质材料水热合成TiO2纳米线。以钛酸异丙酯为原料,通过溶胶-凝胶法制备TiO2纳米颗粒;然后以所制备的TiO2纳米颗粒为原料,采用碱性水热法制备TiO2纳米线。利用SEM、EDS、TEM、XRD、FT-IR等对TiO2纳米颗粒和TiO2纳米线进行表征。结果表明,TiO2纳米颗粒呈现不规则颗粒状,尺寸约为50-200 nm;经碱性水热反应处理后,TiO2纳米颗粒（无定形）原位转化为直径约为10±4 nm的TiO2纳米线（锐钛矿相）。（2）TiO2纳米线膜的合成及表征接下来以TiO2纳米颗粒片为基质材料水热合成TiO2纳米线膜。以TiO2纳米颗粒为原料,利用圆柱形不锈钢模具和压片机等装置制备TiO2纳米颗粒片;随后以TiO2纳米颗粒片为基质材料,采用碱性水热法在TiO2纳米颗粒片表面原位生长TiO2纳米线膜。利用SEM、EDS、XRD等对制得的TiO2纳米颗粒片和TiO2纳米线膜进行表征。结果表明,水热反应导致TiO2纳米颗粒片表面形貌由颗粒状转变成纤维状,其表面所含TiO2纳米颗粒原位转化为TiO2纳米线。纳米线的直径随着水热反应温度的改变有显着变化,当水热反应温度从120℃提高至200℃,纤维直径由10 nm增加至1μm。同时随着水热过程的进行,TiO2纳米颗粒的晶体结构也发生了转变,由锐钛矿相逐步转化为钛酸。（3）TiO2纳米线膜的生物相容性研究最后以成纤维细胞L929为模型细胞评价了TiO2纳米线膜的生物相容性。将TiO2纳米线膜与L929细胞共培养,利用MTT法和活/死细胞染色法分别定量和定性评价了TiO2纳米线膜对于细胞活力的影响;同时利用SEM观察细胞在TiO2纳米线膜表面的生长状态。结果表明,TiO2纳米线膜利于细胞的黏附与增殖,具有优良的生物相容性;其生物相容性与纳米线直径有关,较小直径的纳米线更能促进细胞的黏附与增殖。
刘云[5]（2021）在《hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析》文中指出目的:1.用pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞,流式细胞仪分析慢病毒对三种不同来源人间充质干细胞的转导效率。2.将成功标记绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续传代培养,分析传代培养对绿色荧光蛋白基因阳性的细胞形态及荧光表达的影响。3.测定荧光蛋白标记前后的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的增殖、分化及细胞表型,分析慢病毒介导的绿色荧光蛋白转导对人间充质干细胞增殖、分化及细胞表型的影响,为后续干细胞体内示踪奠定基础。方法:1.用相同MOI值pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞,流式细胞仪检测三种不同来源人间充质干细胞的慢病毒转导效率。2.将标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养传代,观察细胞形态的变化和绿色荧光蛋白基因的表达,流式细胞仪检测细胞增殖10代后绿色荧光蛋白阳性细胞的比例。3.对绿色荧光蛋白标记前后的细胞用CCK-8法测定细胞增殖情况,用定向诱导分化培养液进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,油红O、茜素红、阿利新蓝染色液分别对分化后的细胞染色,流式细胞仪测定标记前后细胞表面抗原CD73、CD90、CD105、CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR的表达。结果:1.p LVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的效率存在明显差异,且差异具有显着统计学意义（P<0.01）。结果显示,人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞慢病毒转导效率最高,其次是人脐带间充质干细胞,人脂肪间充质干细胞转导效率最低。2.标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养繁殖10代,倒置荧光显微镜下仍然可见几乎所有细胞均带有绿色荧光。自然光线下可见细胞贴壁成梭形,胞质丰富,细胞整体成漩涡状生长,均保持了正常良好的细胞形态,与同代数未转导干细胞比较无明显差异。3.标记有绿色荧光蛋白的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的增殖曲线和未标记细胞相近,在450nm波长下测得的OD值无统计学差异（P>0.05）,人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞和人脐带间充质干细胞标记绿色荧光蛋白基因后依然能分化成脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,流式细胞仪测定表面抗原CD73、CD90、CD105阳性比例均在95%以上,CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR几乎不表达（<0.2%）。与同代数未转导干细胞表面抗原表达结果一致。结论:1.p LVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的效率有显着差异（P<0.01）,分析可能与间充质干细胞来源的不同或细胞增殖力差异等有关。2.标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养繁殖10代后细胞形态正常,且绿色荧光蛋白的表达未衰减,提示绿色荧光蛋白基因可在细胞内长期稳定表达,适用于干细胞的长期标记。3.慢病毒GFP基因转导对人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的生长增殖、分化及细胞表型无不良影响,表明慢病毒介导的绿色荧光蛋白转导对细胞无毒害,且可在细胞内稳定表达,是一种理想的干细胞标记方法。
白宇鑫[6]（2021）在《Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉构建软骨组织工程支架最佳比例探索及理化性能初步研究》文中研究指明研究背景目前由交通事故、建筑事故、工伤、肿瘤及各种疾病所导致的软骨缺损病人数量日益增加,如何修复已损失的软骨一直是国内外科研团队研究的热门课题。目前修复方式主要分为两种:自体/异体移植与组织工程软骨。然而软骨自体/异体移植存在供体有限、可移植软骨数量过少、免疫排斥等问题,导致大面积软骨缺损的治疗效果非常有限。软骨组织工程的发现与研究,为软骨缺损的治疗提供了新的治疗方向。组织工程三大重要组成之一就是支架材料的选择,主要分为人工材料和天然材料。人工合成材料优点是价格低廉,力学性能及降解速度可控等,但也存在很多缺点:生物相容性差,有毒试剂残留,降解产物呈酸性从而导致炎症反应等;天然材料因其免疫原性低,降解产物可吸收,生物相容性好,相比人工合成材料具有不可替代的优势。牛煅烧骨粉是自然骨质经由煅烧而形成,与人骨成分相近,主要组成是羟基磷灰石,大量的孔隙通道是其自身结构特点,切具有良好的生物相容性及诱导细胞分化成骨性,其众多的优势使其成为理想的支架材料,是较早被应用于骨及软骨修复的生物材料之一;大颗粒煅烧骨粉相比普通煅烧骨粉,在保有原来优点的基础上,具有更大的孔径结构,更适宜细胞黏附和生长。胶原在人体内普遍存在,是软骨中主要的有机成分,易降解,免疫原性低且易与细胞结合,并且可以诱导软骨细胞向组织分化。因此本研究中,我们拟选用天然材料:I型胶原和大颗粒煅烧骨粉构建组织工程支架,探索胶原/大颗粒煅烧骨粉在支架中的最佳比例,旨在为组织工程软骨的最优支架提供选择。目的构建不同比例大颗粒TBC/Co LⅠ复合支架评价其理化性质及生物学性能,获得最优TBC/ColⅠ比例,为临床上软骨缺损的替代材料提供理论依据。方法（1）酸溶法溶解Ⅰ型胶原,加入大颗粒煅烧骨粉,通过改进后的真空冷冻干燥工艺,辅以交联剂,制备出符合要求的不同胶原/骨粉比例的成形支架。（2）通过在制备过程中的观测和对比,初步挑选出形态相对更好的胶原/骨粉不同比例支架,以进行下一步的详细检测及对比。（3）对选出的支架进行理化性能及生物相容性的测定,包括:支架形态大体观察,SEM微观结构观察,弹性模量及吸水率、孔隙率、密度、降解率的测定、DIO荧光染色观察、动物体内降解实验等。结果（1）Ⅰ型胶原溶解于乙酸中,经改良过的交联以及改良后的冻干工艺后,杂乱无序且较为致密的空间结构,转变为更为有序、孔隙更大、更为疏松的适合细胞附着及生长的结构。（2）通过实验对比不同胶原-骨粉比例所形成的支架,选定胶原浓度为6mg/ml,胶原-骨粉比例为1:7,1:9,1:11制备支架进行下一步对比试验。（3）孔隙率、吸水率、弹性模量、荧光染色观察及动物实验等结果,均显示胶原/骨粉比例为1:9时,支架性能最佳,生物相容性及理化性质更复合组织工程支架的要求。结论（1）成功构建不同比例Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉支架。（2）证明了以6mg/ml的胶原/乙酸溶液浓度,1:9配比是胶原/骨粉最佳比例。通过改进后的混合搅拌工艺及交联、冻干方法,可以获得孔隙率更高,生物相容性更好,降解率更低,弹性模量更强的支架,故更适宜作为一个理想组织工程支架。
季雨伟[7]（2021）在《胎盘间充质干细胞制剂不同给药途径治疗树鼩OPF的疗效研究》文中认为[目的]探讨胎盘间充质干细胞（placenta-derived mesenchymal stem cells,PMSCs）制剂治疗树鼩骨质疏松性骨折的疗效,以及不同给药途径对树鼩骨质疏松性骨折疗效的影响。[方法]将雌性树鼩随机分为手术组和假手术组,手术组用于建立骨质疏松症（osteoporosis,OP）树鼩模型。手术组通过切除双侧卵巢和子宫模拟绝经后骨质疏松症,假手术组仅切除与子宫和卵巢等体积的大网膜,6个月成模,通过DXA检测证实造模成功。对OP树鼩进行右后肢胫骨骨折术,建立骨质疏松性骨折（osteoporotic fracture,OPF）树鼩模型。将24只OPF树鼩随机分为4组,每组6只,PMSCs经生理盐水重悬,细胞浓度调整为1×106/mL,A组PMSCs尾静脉注射1 mL,B组PMSCs伤口和尾静脉各注射0.5mL,C组PMSCs腹腔和尾静脉各注射0.5 mLPMSCs,D组尾静脉注射等量生理盐水。于骨折术后第3d起,每周注射1次,连续注射3周,一共注射3次。首次治疗10周后,检测每组树鼩体重、骨密度（bone mineral density,BMD）、三点骨生物力学,HE染色观察骨组织病理变化,ELISA试剂盒检测各组树鼩血清雌激素、骨碱性磷酸酶（BALP）、骨钙素（osteocalcin,OCN）和抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）表达水平,实时荧光定量 PCR（quantitative real time polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测骨痂相关指标骨形态发生蛋白质-2（bone morphogenetic protein-2,BMP2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB 受体激活物配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）的 mRNA 表达水平。[结 果]四组树鼩相比较,与B组、C组和D组相比,A组体重明显减轻,但只有D组与A组差异有统计学意义（P<0.05）。A组较C、D组BMD明显增加,B组较D组BMD明显增加,差异均具有统计学意义（P<0.05）。股骨三点骨生物力学的检测方面,A组较B、C、D组最大载荷显着提升;A组较C、D组,B组较D组结构刚度显着提升;A、B组较D组能量吸收显着提升,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。HE染色结果显示,D组树鼩的骨小梁基本结构不完整、断裂且出现网状结构消失现象;B组和C组树鼩的病理变化较D组有所改善,但骨小梁仍有明显断裂现象;A组树鼩病理变化有明显改善,骨小梁结构较为完整且排列有序。血清学检测结果显示,雌激素、BALP水平检测中,A组较B、C、D组均有明显增高,B组较D组增高;OCN水平检测中,A组较B、D组不同程度增高;而在TRAP水平检测中,A组较B、C、D三组均不同程度降低;差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。此外,A、B、C三组较D组OPG、BMP2mRNA水平不同程度提高,其中B组显示出最高;A、B、C三组RANKL mRNA水平较D组不同程度降低,其中B组显示出最低,差异均有统计学意义（P<0.01）;A、B、C组VEGF水平与D组相比有所提高,但差异无显着性（P>0.05）。[结 论]PMSCs移植能增加OPF树鼩模型BALP、OCN、OPG等骨形成指标,降低TRAP等骨吸收指标,改善树鼩体重、BMD、雌激素等相关指标,PMSCs可能通过调节骨形成和骨吸收过程,以及调节旁分泌作用共同发挥治疗作用。尾静脉全剂量注射PMSCs对于树鼩OPF模型的全身骨强度改善最为显着,可能与干细胞经尾静脉直接进入体循环,而发挥全身作用有关。其次为尾静脉联合伤口注射疗效较好,其中骨痂改善更加显着,可能与PMSCs直接接触骨折部位有关。而尾静脉联合腹腔注射疗效较差。
周建国[8]（2021）在《microRNA-1286调控BMSCs成骨分化在骨质疏松骨重建作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:骨质疏松（Osteoporosis,OP）是一种全身性代谢性骨病,以骨量减少、骨微结构破坏、骨脆性增加及容易引起脆性骨折为典型特征,预防与治疗一直是临床医师所需解决的问题。骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）是成骨细胞及脂肪细胞的共同前体,其在骨代谢中发挥了重要作用。miRNAs可通过靶向调控干细胞、成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞中各种转录因子参与骨形成和血管形成。miRNAs作为OP新的潜在治疗靶点或生物标志物,迅速得到了临床关注,越来越多研究表明miRNAs在OP成骨分化起重要作用,如miR-346、miR-20a、miR-29b、miR-433等。目前已有报道发现micro RNA-1286（miR-1286）被证实与癌症及骨关节炎发生与进展有关,但还没有研究探讨其在OP的作用。我们预实验发现OP患者血清过表达miR-1286,在诱导h MSCs成骨分化不同阶段miR-1286的表达逐渐降低,推测miR-1286可能与OP进展有关。相关研究提示miR-1286可能经某些信号通路（如NF-k B、Wnt/β-catenin、氧化应激）参与成骨分化进程,但miR-1286是否参与OP发生发展尚无相关研究证实。卷曲相关蛋白4（Frizzled related protein 4,FZD4）可经不同信号通路（如氧化应激、甲基化、Wnt/β-catenin信号通路）参与细胞的增殖、分化过程,影响BMSCs的细胞分化方向及分化进程。从Starbase3.0网站上查询miR-1286与FZD4存在结合位点,但关于miR-1286与FZD4在BMSCs成骨分化的调控机制是否存在关联尚无相关报道。为此,本研究探讨分析miR-1286与OP的关联性,阐明miR-1286参与BMSCs成骨分化调控OP骨重建作用及相关机制,旨在为OP的防治提供新的治疗思路。方法:第一部分:（1）选取正常健康成人50例,OP患者50例,抽取5m L血液EDTA抗凝处理,采用实时定量聚合酶链反应（Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR）检测OP患者血清miR-1286的表达差异。（2）将OP患者的BMSCs细胞体外培养,给予间充质干细胞-成骨分化培养基（Mesenchymal Stem Cell-Osteogenic Differentiation Medium,MODM）培养,观察细胞生长、存活与分化状况,采用碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）染色及茜素红染色表征OP患者的BMSCs分化过程。（3）采用q RT-PCR检测OP患者的BMSCs细胞分化过程中的miR-1286表达情况。第二部分:（1）将50例OP患者的BMSCs细胞作为研究对象,传代培养至3-4代后经MODM培养基诱导成骨分化,并分为过表达miR-1286组（miR-1286-mimic组）、对照组（miR-NC组）、低表达miR-1286（miR-1286-Inhibitor组）,每例OP患者的BMSCs标本作3个复孔。（2）miR-1286-mimic组转染miR-1286,形成miR-1286过表达的BMSCs细胞分化环境;miR-NC组转染Anti-miR-NC行对照研究;miR-1286-Inhibitor组转染miR-1286抑制,形成miR-1286低表达的BMSCs细胞分化环境,每2-4d更换MODM培养基,培养14d。（3）采用q RT-PCR检测ALP、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2,RUNX2）、骨钙素（Osteocalcin,OCN）、成骨相关转录因子抗体（Osterix）的m RNA表达水平;采用Western blotting法检测RUNX2、OCN、FZD4、Osterix蛋白表达水平;采用q RT-PCR检测卷曲相关蛋白4野生型（Frizzled related protein 4 wild type,FZD4 WT）、卷曲相关蛋白4突变型（Frizzled related protein 4 mutant,FZD4 MUT）、FZD4的m RNA表达水平;荧光素酶报告基因检测miR-1286表达对FZD4的影响;采用ALP染色检测ALP活性和含量;采用茜素红染色评估细胞钙化情况。第三部分:（1）将50例OP患者的BMSCs细胞作为样本,将传代至5代的BMSCs细胞经MODM培养诱导成骨分化,并分为过表达FZD4组（pc DNA-FZD4组）、空白对照组（pc DNA-NC组）、对照组（miR-NC组）过表达miR-1286组（miR-1286-mimic组）、过表达miR-1286及FZD4组（miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4组）,每例OP患者BMSCs标本作3个复孔。（2）pc DNA-FZD4组转染pc DNA-FZD4模拟FZD4过表达,pc DNA-NC组转染pc DNA-NC行对照组,miR-NC组转染Anti-miR-NC行对照,miR-1286-mimic组转染miR-1286模拟miR-1286过表达,miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4组转染pc DNA-FZD4及miR-1286模拟pc DNA-FZD4和miR-1286同时过表达。每2-4d更换MODM培养基,培养14d。（3）采用q RT-PCR检测ALP、RUNX2、OCN、Osterix的m RNA表达水平;采用Western blotting法检测RUNX2、OCN、Osterix蛋白表达水平;采用ALP染色检测ALP活性和含量;采用茜素红染色评估细胞钙化情况。结果:第一部分:（1）OP患者血清中miR-1286的表达明显高于正常健康人群,差异有统计学意义（p<0.01）。（2）OP患者的BMSCs细胞传代4-6h后,贴壁生长,逐渐有伪足伸出,贴壁细胞轮廓清晰,呈现梭形排列;传代培养7d后,细胞数量逐渐增加,细胞出现了进一步的融合生长,形态呈现蝌蚪、草束样,排列紧密,部分区域可见有旋涡样。成骨诱导7d后,ALP阳性细胞染色呈现深蓝色;茜素红染色呈现桔红色,钙化结节明显。（3）诱导BMSCs成骨分化后第3d、第7d及第14d的miR-1286表达水平低于第1d;诱导BMSCs成骨分化后的第7d及第14d的miR-1286表达水平低于第3d;诱导BMSCs成骨分化后的第14d的miR-1286表达水平低于第7d,差异有统计学意义（p<0.01）。第二部分:（1）miR-1286-mimic组的ALP、RUNX2、OCN、Osterix的m RNA表达水平均低于miR-NC组,miR-1286-Inhibitor组ALP、RUNX2、OCN、Osterix的m RNA表达水平均高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。（2）miR-1286-mimic组的ALP活性低于miR-NC组;miR-1286-Inhibitor组ALP活性高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。miR-1286-mimic组的ALP染色显示ALP含量较miR-NC组显着降低,茜素红染色显示矿化结节的形成较miR-NC组明显减少;miR-1286-Inhibitor组的ALP染色显示ALP含量较miR-NC组增加,茜素红染色显示矿化结节的形成较miR-NC组明显增加。（3）miR-1286-mimic组的RUNX2、OCN、Osterix蛋白水平低于miR-NC组,miR-1286-Inhibitor组的RUNX2、OCN、Osterix蛋白水平高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。荧光素酶报告基因实验表明miR-1286的过表达显着猝灭了野生型FZD4（FZD4 WT）的荧光;miR-1286-mimic组的突变型FZD4（FZD4MUT）表达水平与miR-NC组比较无统计学差异（p>0.05）;miR-1286-mimic组的FZD4 WT表达水平低于miR-NC组;miR-1286-Inhibitor组的FZD4 WT表达水平高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。miR-1286-mimic组的ALP染色显示ALP含量显着降低,茜素红染色显示矿化结节的形成明显减少。第三部分:（1）pc DNA-FZD4组的ALP、RUNX2、OCN及Osterix的m RNA表达水平均高于pc DNA-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。pc DNA-FZD4组的ALP活性高于pc DNA-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。此外,Western blotting分析还显示pc DNA-FZD4组的RUNX2、OCN、Osterix蛋白水平均高于pc DNA-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。ALP染色显示pc DNA-NC组的ALP含量显着增加,茜素红染色显示矿化结节形成明显增加。（2）miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4与miR-1286-mimic组的ALP、RUNX2、OCN及Osterix m RNA表达水平均低于miR-NC组;且miR-1286-mimic组的ALP、RUNX2、OCN及Osterix m RNA表达水平低于miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4组,差异有统计学意义（p<0.01）;在对成果分化相关的ALP活性及成骨相关蛋白水平检测后发现,ALP活性、RUNX2蛋白、OCN蛋白、Osterix蛋白亦呈现了相同变化。结论:（1）OP患者血浆中的miR-1286的表达明显高于健康正常人群,且在诱导BMSCs成骨分化1d、3d、7d、14d后,miR-1286的表达逐渐降低,这提示miR-1286与OP成骨分化负性相关,可能与OP的发生发展有关。（2）本研究从OP患者提取的BMSCs经细胞培养后发现,传代效果良好,细胞生长能力旺盛,功能状态良好,可满足细胞形态学观察研究,可作为后续体外实验成骨分化的实验标的。（3）miR-1286的过表达抑制了OP患者BMSCs的成骨分化能力,引起了成骨分化下游的关键酶及蛋白表达下调;而miR-1286低表达,促进了OP患者BMSCs的成骨分化能力,引起了成骨分化下游的关键酶基因与蛋白表达的上调,这说明miR-1286可能介导参与了OP成骨分化相关过程。（4）miR-1286可直接与FZD4 m RNA靶向结合,进而影响了FZD4的表达,FZD4的过表达促进了OP患者的BMSCs成骨分化作用,加速了OP骨的生成;miR-1286能够通过与FZD4相互作用而调控抑制h BMSCs的成骨分化,这表明miR-1286与FZD4存在靶向结合特性,能靶向结合FZD4,经Wnt/FZD4途径介导参与OP的BMSCs成骨分化过程,从而调控影响OP的发生发展。
徐燕梅[9]（2021）在《兔胫骨骨膜细胞膜片体外构建研究》文中指出颌面部骨组织因其结构的复杂性,其缺损的修复再生一直是当前临床研究的难点与热点。组织工程技术的出现为实现理想的颌面部骨缺损修复带来了希望。细胞膜片技术（cell sheet technology,CST）可完整保留细胞外基质（extracellular matrix,ECM）,克服骨组织工程支架材料的缺点,在骨缺损修复中具有很大的应用前景。目的体外分离培养兔胫骨骨膜细胞（periosteal cells,PCs）,构建兔胫骨PCs膜片,对膜片形成过程中PCs的生物学特点进行研究。方法1.采用酶消化结合组织块法分离培养兔胫骨PCs,CCK-8（cell counting kit-8）检测兔胫骨PCs增殖能力。集落形成试验检测兔胫骨PCs克隆形成能力。采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及茜素红染色检测兔胫骨PCs的成骨分化能力。油红O染色检测兔胫骨PCs的成脂分化能力。阿利辛蓝染色检测兔胫骨PCs成软骨诱导后的成软骨分化能力。2.采用维生素C诱导法构建兔胫骨PCs膜片,通过HE及Masson染色对细胞膜片的组织形态进行观察;通过细胞活死荧光染色检测细胞膜片的活性。3.通过ALP染色、ALP活性检测以及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR）检测膜片形成过程中兔胫骨PCs的成骨分化能力和ECM形成能力。4.采用CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、流式细胞术以及Real-time PCR对膜片形成过程中兔胫骨PCs的增殖活性、衰老及凋亡情况进行检测。结果1.体外成功分离培养兔胫骨PCs。所培养的细胞具有较好的增殖能力、克隆形成能力;成骨诱导培养7 d及21 d,ALP染色呈深蓝色,茜素红染色显示大小不一、红色的钙结节;成脂诱导21 d,脂滴油红O染色呈阳性;成软骨诱导21 d,阿尔辛蓝染色阳性。2.采用维生素C可成功构建兔胫骨PCs膜片,所构建的膜片呈乳白色半透明膜片样物质,HE及Masson染色显示膜片由细胞及丰富的细胞外基质构成,存在良好的细胞间连接;细胞活死荧光染色结果显示膜片内兔胫骨PCs保持较好的活性。3.ALP染色及ALP活性检测结果显示膜片构建过程中兔胫骨PCs表达较高的ALP活性;Real-time PCR结果显示成骨相关基因骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、ALP及Runt转录相关因子2（runt-related transcription factor 2,Runx2）,ECM相关基因Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,COL-Ⅰ）及纤维连接蛋白（fibronectin,FN）的表达也增加。4.CCK-8结果显示膜片构建过程中兔胫骨PCs具有较好的增殖活性;β-半乳糖苷酶染色显示膜片构建过程中兔胫骨PCs中β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数相对较少;流式细胞术检测结果显示膜片构建过程中兔胫骨PCs的凋亡率较低;Real-time PCR结果显示膜片构建过程中兔胫骨PCs中p21、p53、半胱氨酸蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3）、Bax等衰老、凋亡相关基因表达较低,而抗凋亡基因Bcl2表达较高。结论1.采用酶消化结合组织块法可体外分离培养兔胫骨PCs,所培养的细胞具有较好的增殖能力和克隆形成能力,并具有多向分化潜能。2.采用维生素C能成功诱导构建兔胫骨PCs膜片,所构建的细胞膜片由大量活细胞及丰富的细胞外基质构成,有望应用于颌面部骨组织的再生。
唐文宝[10]（2021）在《OCS-OHA复合COL Ⅱ构建仿生软骨凝胶及其体外研究》文中认为[目的]用氧化硫酸软骨素（OCS）、氧化透明质酸（OHA）复合Ⅱ型胶原（COLⅡ）构建仿生软骨凝胶（BCG）;将人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）与BCG混合后构建细胞—凝胶,为体内软骨修复奠定组织工程方面基础。[方法]第一部分 COLⅡ提取、OCS及OHA制备通过去除蛋白多糖、酶解、盐析、离心、透析等一系列步骤从贵州小香猪离体膝关节软骨中提取COL Ⅱ,并用盐酸溶液进行保存。用高碘酸钠（NaI04）分别对硫酸软骨素（CS）及透明质酸（HA）进行氧化;用傅里叶变换红外光谱（FTIR）分析对OCS及OHA中醛基进行表征,用碱消耗法测定OCS及OHA氧化度。第二部分制备凝胶将COLⅡ调节pH值至7.5,分别加入CS-HA溶液、CS-OHA溶液、OCS-HA溶液及 OCS-OHA 溶液制备凝胶,比较 COLⅡ-CS-HA、COLⅡ-OCS-HA、COLⅡ-CS-OHA、COL Ⅱ-OCS-OHA抗压强度;对COL Ⅱ-OCS-OHA进行吸水溶胀率测定、FTIR分析、组织学评估（HE染色、Masson染色、阿尔新蓝染色）。第三部分COLⅡ-OCS-OHA与人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）复合培养培养hUCMSCs,将第五代细胞与COL Ⅱ-OCS-OHA进行复合培养28天。对刚制作的细胞-凝胶固定脱水后进行石蜡切片,并进行HE染色、Masson染色及阿尔新蓝染色;对培养第1天、第3天、第5天及第7天细胞-凝胶固定脱水后进行石蜡切片,进行HE染色;对培养第14天、21天及第28天细胞-凝胶固定脱水后进行石蜡切片,进行HE染色、Masson染色及阿尔新蓝染色。[结果]第一部分 COLⅡ提取、OCS及OHA制备从贵州小香猪猪离体膝关节软骨片中提取的COLⅡ溶于0.15mol/l盐酸中,最终质量分数为10%;OCS及OHA氧化后分子中含醛基,且氧化度分别为51.62±0.49%、61.63±1.56%。第二部分 制备凝胶COL Ⅱ与OCS/CS-OHA/HA在混合后可以形成凝胶（COL Ⅱ-CS-HA除外）,凝胶呈乳白色,圆饼状,抗压强度测试后所有凝胶均未产生裂缝。COLⅡ-CS-HA无法成胶。COL Ⅱ-OCS-OHA抗压强度明显大于COL Ⅱ-CS-HA、COLⅡ-OCS-HA及 COL Ⅱ-CS-OHA。COL Ⅱ-OCS-OHA 吸水溶胀率为 91.75%±4.53%;FTIR 提示COL Ⅱ-OCS-OHA中COLⅡ三螺旋结构仍存在,OCS与OHA中醛基消失,三种物质已发生反应。组织学切片提示COL Ⅱ-OCS-OHA中含COL Ⅱ与GAG,COL Ⅱ-OCS-OHA形成网状结构,各成分在其中分布均匀。第三部分 COL Ⅱ-OCS-OHA与hUCMSCs复合培养细胞在接种过夜后完成贴壁,细胞呈多边形、短梭形不规则形等,排列紊乱;培养第3-4天时,细胞可排列呈环状;当培养到5-7天时,细胞多呈长梭形,呈簇状排列,细胞融合度高;在模具中细胞-凝胶能成型,在进行固定及脱水后细胞-凝胶皱缩,HE染色可见细胞较为均匀分布于BCG中;Masson染色细胞外基质为蓝色,且整体颜色较为均一;阿尔新蓝染色提示细胞外基质中染色为浅蓝色,表明所含GAG分布均匀。当细胞-凝胶培养到14天、21天及28天时,细胞-凝胶边缘无规整,HE染色中可见细胞-凝胶中仍有细胞存在;Masson染色呈蓝色,阿尔新蓝染色可见较为均一浅蓝色,提示凝胶中含COLⅡ及GAG。[结论]第一部分 COLⅡ提取、OCS及OHA制备1贵州小香猪离体膝关节软骨经酶解可以提取COLⅡ。2 CS/HA经NaIO4氧化可生成含醛基的OCS/OHA。第二部分制备凝胶COL Ⅱ-OCS-OHA可形成具有一定抗压强度的凝胶,且抗压强度显着大于COL Ⅱ-CS-HA、COL Ⅱ-OCS-HA 及 COL Ⅱ-CS-OHA,COL Ⅱ-OCS-OHA 内形成网状结构,主要成分为COLⅡ及GAG类物质。第三部分COL Ⅱ-OCS-OHA与人脐带间充质干细胞复合培养可一步完成细胞-凝胶制作,BCG具有一定细胞相容性,为体内软骨修复奠定组织工程方面基础。
二、骨、软骨组织工程种子细胞及其免疫学相关研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、骨、软骨组织工程种子细胞及其免疫学相关研究进展（论文提纲范文）
（1）诱导性多能干细胞在耳郭软骨重建中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 i P S C的发现及应用 |
| 2 体内正常耳郭软骨形成的分子机制 |
| 2.1 神经嵴细胞与耳郭胚胎发育 |
| 2.2 与神经嵴细胞相关的分子机制 |
| 3 i P S C来源神经嵴细胞的临床应用 |
| 4 i P S C与耳郭重建 |
| 5 展望 |
（2）中药有效成分促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的作用与机制（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 质量评估 |
| 2 结果Results |
| 2.1 复方中药有效成分 |
| 2.1.1 补肾活血汤 |
| 2.1.2 透骨消痛颗粒 |
| 2.1.3 益气汤 |
| 2.1.4 复方丹参注射液 |
| 2.1.5 龟鹿二仙胶汤 |
| 2.1.6 消痹灵 |
| 2.1.7 复元胶囊 |
| 2.1.8 右归饮 |
| 2.1.9 左归丸 |
| 2.2 单味中药有效成分 |
| 2.2.1 人参皂苷 |
| 2.2.2 黄芪甲苷 |
| 2.2.3 鹿茸多肽 |
| 2.2.4川芎嗪 |
| 2.2.5 淫羊藿苷 |
| 2.2.6 骨碎补总黄酮 |
| 2.2.7 梓醇 |
| 2.3 中药有效成分促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的机制探讨与存在的问题 |
| 2.3.1 机制探讨 |
| 2.3.2 存在的问题 |
| 3 小结与展望Conclusions and prospects |
（3）间充质干细胞复合多孔钽治疗骨关节炎的研究进展（论文提纲范文）
| 1 软骨缺损修复的组织工程 |
| 1.1 种子细胞 |
| 1.2 生物材料支架 |
| 2 MSCs复合PT在软骨组织工程中的应用 |
| 3 结语 |
（4）原位水热法合成二氧化钛纳米线及生物相容性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 组织再生材料 |
| 1.2.1 组织工程学 |
| 1.2.2 组织再生材料的种类 |
| 1.3 TiO_2材料 |
| 1.3.1 结构与特点 |
| 1.3.2 TiO_2纳米材料的种类 |
| 1.3.3 TiO_2纳米线 |
| 1.4 选题意义及研究内容 |
| 1.4.1 选题意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第2章 以TiO_2纳米颗粒为基质合成TiO_2纳米线 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂及仪器 |
| 2.2.2 TiO_2纳米颗粒的制备 |
| 2.2.3 以TiO_2纳米颗粒为基质制备TiO_2纳米线 |
| 2.2.4 测试与表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 TiO_2纳米颗粒片辅助水热合成TiO_2纳米线膜 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂及仪器 |
| 3.2.2 以TiO_2纳米颗粒片为基质制备TiO_2纳米线膜 |
| 3.2.3 以钛片为基质制备TiO_2纳米线膜(Ti@TiO_2 NW MB) |
| 3.2.4 测试与表征 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 形貌与组分分析 |
| 3.3.2 机理分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 TiO_2纳米线膜的体外生物相容性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂及仪器 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.2.3 生物相容性评价 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 MTT分析 |
| 4.3.2 Live/dead染色分析 |
| 4.3.3 SEM分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒载体的构建及转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒的包装 |
| 2.2 慢病毒转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC的情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒载体的构建 |
| 3.2 慢病毒转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC的转导效率 |
| 4 结论 |
| 第二部分 GFP+MSCs细胞系的建立及培养与传代 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 GFP+MSCs的形态观察和GFP表达情况 |
| 2.2 GFP+MSCs的培养和传代 |
| 3 讨论 |
| 3.1 GFP+MSCs细胞系的建立 |
| 3.2 GFP+MSCs的传代和培养 |
| 4 结论 |
| 第三部分 hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC标记GFP基因前后特性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 MSCs标记GFP基因前后增殖力比较 |
| 2.2 MSCs标记GFP基因前后体外诱导分化情况 |
| 2.3 MSCs标记GFP基因前后细胞表型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 MSCs标记GFP基因前后增殖力比较 |
| 3.2 MSCs标记GFP基因前后体外诱导分化能力评估 |
| 3.3 MSCs标记GFP基因前后细胞表型的表达情况 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 荧光蛋白法标记在间充质干细胞中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉构建软骨组织工程支架最佳比例探索及理化性能初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 综述 |
| 1.2.1 组织工程及组织工程支架 |
| 1.2.2 软骨支架材料的分类及其特点 |
| 1.2.3 软骨组织工程修复研究进展 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验设备与材料 |
| 2.1.1 实验设备 |
| 2.1.2 主要材料及试剂 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 胶原溶液的制备 |
| 2.2.2 胶原-骨粉支架的制备 |
| 2.2.3 种子细胞的提取 |
| 2.2.4 软骨细胞的荧光染色(DIO 染色) |
| 2.2.5 支架植入小鼠背部 |
| 2.2.6 相关检测(每种比例均选取三个相同形态支架测量后取平均值) |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 外观及微观结构 |
| 3.1.1 纯胶原支架大体观察 |
| 3.1.2 ColⅠ-大颗粒TBC支架大体观察 |
| 3.1.3 ColⅠ-TBC支架SEM扫描结果 |
| 3.2 密度和孔隙率 |
| 3.3 吸水率和弹性模量 |
| 3.4 失重率 |
| 3.5 软骨细胞的形态学观测 |
| 3.6 细胞在支架上的生长凋亡状况 |
| 3.7 小鼠体内支架变化情况 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 研究意义 |
| 4.2 实验难点分析 |
| 4.3 结果分析 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间科研成果 |
| 后记和致谢 |
（7）胎盘间充质干细胞制剂不同给药途径治疗树鼩OPF的疗效研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 胎盘间充质干细胞治疗骨骼疾病的应用进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）microRNA-1286调控BMSCs成骨分化在骨质疏松骨重建作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分:人骨髄间充质干细胞体外培养与成骨分化诱导 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验设备及方法 |
| 2.2 研究方法与步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 2.4 研究技术路线图 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSCs体外诱导成骨分化及ALP、茜素红染色 |
| 3.2 miR-1286在OP患者血清和正常健康人群血清的表达及miR-1286在hBMSCs成骨分化过程中的表达 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:miR-1286对BMSCs成骨分化作用及其与FZD4 结合特性 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验设备及方法 |
| 2.2 实验方法及步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 2.4 研究技术路线图 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-1286 过表达抑制人骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 3.2 miR-1286 靶向结合FZD4 并调控其表达 |
| 4 讨论 |
| 第三部分:miR-1286 通过介导FZD4 调控OP骨重建中BMSCs成骨分化作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验设备及方法 |
| 2.2 实验方法及步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 2.4 研究技术路线图 |
| 3 结果 |
| 3.1 FZD4 高表达促进人骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 3.2 miR-1286 通过介导FZD4 调控人骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 4 讨论 |
| 结论与展望 |
| 1 结论 |
| 2 本研究特色创新之处 |
| 3 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 论文综述 卷曲受体蛋白在内分泌代谢疾病、肿瘤及诱导骨分化的研究进展 |
| 参考文献 |
（9）兔胫骨骨膜细胞膜片体外构建研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 兔胫骨骨膜细胞的体外培养、鉴定及膜片构建 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 兔胫骨骨膜细胞膜片生物学功能的初步研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 骨组织工程种子细胞研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）OCS-OHA复合COL Ⅱ构建仿生软骨凝胶及其体外研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 COL Ⅱ提取、OCS及OHA制备 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 制备凝胶 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 COL Ⅱ-OCS-OHA与hUCMSCs复合培养 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附录 |
| 综述 软骨在体外构建的组织工程研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
四、骨、软骨组织工程种子细胞及其免疫学相关研究进展（论文参考文献）
- [1]诱导性多能干细胞在耳郭软骨重建中的研究进展[J]. 张泽亚,潘博,蒋海越. 中国美容整形外科杂志, 2021(12)
- [2]中药有效成分促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的作用与机制[J]. 刘小刚,李甜,张舵. 中国组织工程研究, 2022(01)
- [3]间充质干细胞复合多孔钽治疗骨关节炎的研究进展[J]. 李思雨,刘凯楠,王思涵,李粤源,崔逸爽,王茜. 解放军医学院学报, 2021
- [4]原位水热法合成二氧化钛纳米线及生物相容性研究[D]. 杜鹃. 太原理工大学, 2021(01)
- [5]hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析[D]. 刘云. 山西医科大学, 2021(01)
- [6]Ⅰ型胶原/大颗粒煅烧骨粉构建软骨组织工程支架最佳比例探索及理化性能初步研究[D]. 白宇鑫. 吉林大学, 2021(01)
- [7]胎盘间充质干细胞制剂不同给药途径治疗树鼩OPF的疗效研究[D]. 季雨伟. 昆明医科大学, 2021(01)
- [8]microRNA-1286调控BMSCs成骨分化在骨质疏松骨重建作用及机制研究[D]. 周建国. 南昌大学, 2021(01)
- [9]兔胫骨骨膜细胞膜片体外构建研究[D]. 徐燕梅. 福建医科大学, 2021
- [10]OCS-OHA复合COL Ⅱ构建仿生软骨凝胶及其体外研究[D]. 唐文宝. 昆明医科大学, 2021