一、抗猪大肠杆菌高免卵黄的研制及对实验感染病例的疗效观察（论文文献综述）
张迪[1]（2021）在《黑龙江省某奶牛场感染性犊牛腹泻病原鉴定及复合卵黄抗体预防效果》文中进行了进一步梳理腹泻是新生犊牛常患的致死率较高的疾病之一,给世界各地养牛业造成了重大的经济损失。犊牛腹泻的病因较为复杂,感染性因素是引起腹泻的主要因素,如牛轮状病毒（Bovine retrovirus,BRV）、牛冠状病毒（Bovine corona virus,BCV）、牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）、大肠杆菌（Escherichia coil,E.coil）、沙门氏菌（Salmonella）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）和隐孢子虫（Cryptosporidium）等。本研究通过对黑龙江省某规模化奶牛场感染性犊牛腹泻病原进行鉴定,并应用复合卵黄抗体开展犊牛腹泻预防试验,旨在为该牛场犊牛腹泻的防控提供试验依据和科学指导。本试验首先采集该牛场腹泻犊牛粪便样品20份,应用普通PCR技术检测粪样中BRV、BCV和BVDV,应用巢式PCR技术检测粪样中隐孢子虫,采用常规细菌分离鉴定、生化试验、致死性试验和普通PCR技术检测16S r RNA方法相结合确定致病菌;然后选择该牛场新生荷斯坦健康犊牛20头开展复合卵黄抗体预防试验,随机分为试验组和空白对照组,每组10头,试验期28 d,预防组犊牛出生6 h内一次性每头10 g口服复合卵黄抗体,空白对照组不做任何处理。分别于试验期第1 d、第7 d、第14 d、第21 d、第28 d晨饲前记录体重和计算平均日增重、粪便评分、腹泻率;于试验期第1 d、第3 d、第7 d晨饲前采集血液,检测血清生化指标及免疫指标。试验结果显示:该规模化奶牛场犊牛腹泻主要是由大肠杆菌和隐孢子虫单一病原菌感染引起,其中大肠杆菌的感染率为75%（15/20）,隐孢子虫的感染率为25%（5/20）,BRV、BCV、BVDV检测结果为阴性。试验期内,试验组与对照组相比,犊牛生长体重差异显着（P<0.05）,平均日增重无显着差异,但有增加趋势,试验组犊牛平均日增重为1.17 kg/头,对照组平均日增重为1.1 kg/头,平均日增重提高了6.36%。试验组犊牛的粪便评分和腹泻率数显着低于对照组（P<0.05）。试验组与对照组相比,血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量显着升高（P<0.05）,血清球蛋白（GLO）、血清白球比保持平稳水平,但是,对照组血清球蛋白在整个试验期呈显着下降趋势,血清白球比在整个试验期呈显着上升趋势。试验组与对照组相比,血清免疫球蛋白s Ig A、Ig G、Ig M水平极显着升高（P<0.01）,在整个试验期试验组犊牛血清slg A、Ig G、Ig M水平呈显着上升趋势（P<0.05）,对照组犊牛血清slg A、Ig G、Ig M水平变化差异不显着（P>0.05）。综上所述,该规模化奶牛场犊牛腹泻主要是由大肠杆菌和隐孢子虫单一病原菌感染引起的,其中大肠杆菌的感染率为75%（15/20）,隐孢子虫的感染率为25%（5/20）;复合卵黄抗体可以提高新生犊牛血清中TP、ALB、s Ig A、Ig G和Ig M含量,增强免疫功能,降低腹泻发病率。
李明亮[2]（2018）在《河南部分地区PCV2流行病学调查及卵黄抗体制备》文中研究表明猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）属于圆环病毒科（Circoviridae）中的圆环病毒属（Circovirus）,其基因组为单股环状DNA,其结构蛋白呈二十面体对称,病毒无囊膜包裹。PCV病毒主要有两个基因型,猪圆环病毒1型（Porcine circovirus type 1,PCV1）和猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）,但在2016年,美国分离出一株新的圆环病毒,基因型有别于PCV1与PCV2,该新基因型的圆环病毒被称为猪圆环病毒3型（Porcine circovirus type3,PCV3）[1]。但现阶段对养殖业影响最大的仍是PCV2,该病毒又细分为5个亚型,分别是PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d、PCV2e。该病毒单独感染对猪不造成严重疾病,但与其他病原交叉感染时,会加重病猪的病情,造成大量猪只死亡,给养殖业造成巨大损失。近年PCV2优势毒株不断演变,流行趋势愈加复杂。本研究采集了河南部分地区养殖场的病猪组织,利用PCR法进行多种病毒基因组检测,对于检测为PCV2阳性的病料,会进行PCV2病毒的全基因组测序,并进行病毒遗传进化分析。本研究中共检测25批病料,其中阳性病料15批,阳性率达到了60%,本研究共测得13株病毒的全基因组,其中4株为PCV2b亚型,其余均为PCV2d亚型,分析这些毒株出现时间,发现在2016年2017年9月期间,主要流行毒株为PCV2d亚型,但在2017年年末,连续出现了PCV2b亚型,所以预测PCV2优势毒株有重新向PCV2b亚型演变的趋势。卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,IgY）是指从免疫鸡（或禽类）卵黄中提取的针对特定抗原的抗体,是存在于卵黄中的最主要免疫球蛋白,具有较强的特异性,无任何毒副作用,与抗生素相比,IgY具有环境友好型、不引起不良反应、不产生毒性残留物、不引起抗药性等优点,在功能上,与哺乳动物的IgG不同,IgY不与哺乳动物的Fc受体和补体受体作用,不能激活哺乳动物的补体系统,同时,IgY也不与葡萄球菌蛋白A、葡萄球菌蛋白G和类风湿因子等结合,这些差异使得IgY在替代抗生素治疗、诊断和异种器官移植方面有较大的优势。本研究中还研制了特异性抗PCV2的IgY。选取8只健康产蛋鸡,随机分为2组,每组用不同的免疫程序免疫产蛋鸡。每天收集鸡蛋,每周通过翅下静脉采血,获取血清;将收集的鸡蛋通过水稀释-硫酸铵沉淀法与氯仿法两种方法分别纯化IgY,并比较两种方法的优劣。对获取的血清与纯化IgY用ELISA抗体检测试剂盒检测其抗体水平,获取抗体水平变化的数据。结果表明,两种纯化方法中,抗体的纯度接近,无明显差异,其抗体效价检测结果也没有明显区别。但是氯仿法提取的抗体,其特异性更好;两种免疫程序免疫的蛋鸡,其血清抗体的产生与持续时间没有明显的区别,在首免7 d后,几乎检测不到抗体,在第21 d时,抗体水平就以接近峰值,而IgY的效价提升滞后于血清抗体;在免疫程序结束后,IgY的效价可持续一个月不下降。
陈海超[3]（2015）在《抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及其保护效力的研究》文中提出猪伪狂犬病在欧美一些发达国家已经根除,在中国,目前只能通过疫苗接种进行预防。自2011年末以来,华北大部分地区的已接种疫苗的猪场爆发了伪狂犬病,造成了严重的经济损失,而且,爆发伪狂犬病时没有有效的药物治疗该种疾病,因此,研制有效的治疗药物对于控制猪伪狂犬病的蔓延至关重要。特异性卵黄抗体（IgY）在控制传染性的细菌或病毒疾病方面正受到大量的关注,相对于哺乳动物的IgG,IgY具有廉价、方便、高产和生物安全性好等优势,但是,目前国内外并没有应用抗猪伪狂犬病IgY的报道。本课题旨在通过制备伪狂犬病毒（PRV）灭活疫苗免疫蛋鸡来得到较高水平的抗PRV的卵黄抗体,并对制备的IgY进行体内外效果的研究,为今后抗PRV卵黄抗体用于猪伪狂犬病的治疗上提供科学依据。本课题主要研究内容如下:1抗猪伪狂犬病毒（PRV）卵黄抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立选取24只40周龄健康的产蛋鸡（三黄鸡）,随机分成3组（A,B,C组）,每组8只。用制备的灭活疫苗免疫3组鸡群,免疫方案为:A组注射生理盐水,B组使用灭活的PRV Bartha-K61疫苗株与白油佐剂乳化后免疫鸡群,C组使用灭活的PRV Bartha-K61疫苗株与弗氏佐剂乳化后免疫鸡群。首免后间隔4周后进行第二次免疫,二免后间隔2周进行第三次免疫,共免疫3次,3次免疫接种量分别为1mL,2mL,3mL。收集免疫鸡群的鸡蛋,无菌分离蛋黄,采用水稀释、盐析和超滤法方法从蛋黄中提取和纯化IgY,SDS-PAGE检测IgY。用全病毒包被酶标板,纯化的IgY作为一抗,建立了针对抗PRV卵黄抗体的间接ELISA检测方法,用方阵滴定法确定各反应液的工作浓度及作用时间,并对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了评估。用该方法检测3组免疫鸡群IgY水平。结果表明:通过分离、提取和纯化各步骤,每10mL卵黄液可以得到IgY的浓度为4.6mg/mL;抗原最佳包被浓度为1:100,酶标二抗工作浓度为1:4000,临界值为0.170-0.200,建立的间接ELISA检测方法特异性强,敏感性高,重复性好;B组和C组都得到了较高水平的IgY,从整体来看,C组得到的IgY水平比B组要高。2抗PRV卵黄抗体的体内外中和试验IgY的毒性试验:将IgY倍比稀释成不同的浓度,加入到96孔细胞培养板中,加入长势良好的PK-15细胞,在荧光显微镜下观察细胞病变（CPE）情况,结果显示:IgY不会引起PK-15细胞产生CPE,具有较好的生物安全性。IgY细胞中和试验:将IgY倍比稀释成不同的浓度,加入到96孔细胞培养板中,加入200 TCID50的PRV在37℃中和1h后,再加入长势良好的PK-15细胞继续培养,观察细胞的病变情况,并提取细胞中病毒的DNA,用荧光定量PCR测定细胞中病毒的拷贝数。结果显示:IgY对PK-15细胞的半数保护PD50为0.04,说明IgY对PRV具有较强的中和活性;当IgY的浓度为575μg/mL时,阳性对照组和IgY处理组细胞中病毒的拷贝数差异显着,并且随着IgY浓度的增加,细胞中病毒的拷贝数逐渐降低。IgY小鼠体内中和试验:将36只清洁级（Balb/c）小鼠随机分成3组,每组12只。其中,阴性对照组:每只小鼠腹股沟皮下接种0.2mL生理盐水;阳性对照组:每只小鼠腹股沟皮下接种0.2mL PRV LA病毒株（TCID50为107）;试验组:将浓缩后的IgY（25.8mg/mL）与PRV病毒在37℃中和1h后,腹股沟皮下接种小鼠,0.2mL/只。于小鼠出现临床症状后采取3组小鼠血液,提取血清中DNA,用PCR检测小鼠有无发生病毒血症。当不再出现小鼠死亡后,分析小鼠的存活情况。剖杀所有小鼠,采集小鼠脑、肝脏、脾脏和肾脏,用PCR检测组织中的病毒。IgY小鼠体内中和试验表明:抗PRVIgY能为小鼠提供80%的保护率（8/10）,能有效地抑制小鼠组织中PRV的增殖。
郑逢梅[4]（2013）在《猪流行性腹泻流行毒株部分基因分子特征及防治措施研究》文中提出自2010年10月起，猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）在中国严重暴发流行。为了解该病暴发的原因，对2010～2012年12株猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV）华中地区流行毒株S基因进行克隆、测序及遗传进化分析。利用原核表达的PEDV河南流行毒株N基因蛋白建立了用于检测PEDV抗体的间接ELISA方法，为猪群PED疫情防控提供工具。另外，为控制此次PED疫情，研究制备PE D卵黄抗体并应用于临床，取得较好防控效果。1.2010～2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析自2010年底开始，PED在中国境内出现严重暴发。为探讨该病突然再次暴发的原因，对2010年10月至2012年6月收集于华中地区11个地市的12株PEDV流行毒株S基因进行RT-PCR扩增、克隆及测序，并对其序列变化、遗传进化关系、抗原位点、糖基化位点和多肽极性进行分析。结果显示，12株PEDV流行毒株S基因部分核苷酸及氨基酸的改变使其关键序列明显不同于以往毒株，其中有11株流行毒株的S基因比现用疫苗毒株CV777多9个核苷酸，而且在其S1区N′端存在大量的氨基酸突变。遗传进化分析显示，12株PEDV华中地区毒株与2007～2009年韩国毒株、2007～2008年泰国毒株、2009～2010年越南毒株、2011年日本毒株及2010～2012年中国其它地区流行毒株亲缘关系均较密切，而与欧洲株（CV777、Br1/87）、中国现用疫苗株（CV777）及2003～2007年中国分离株（LJB/03、JS-2004-2、DX、QH、LZC）亲缘关系均较远。与现用疫苗株（CV777）相比，流行毒株S蛋白的抗原位点、糖基化位点和跨膜螺旋均有明显改变，提示PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势。2.PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立用RT-PCR从腹泻仔猪样本中扩增获得了1段PEDV河南流行毒株N基因全长序列，根据对其氨基酸序列的抗原性分析结果，将N基因上两个大的抗原表位区（112～321位氨基酸）克隆至原核表达载体pET-32a，构建pET-32a-N重组质粒并转化至宿主菌BL2（1DE3）中。将重组菌在37℃的条件下加入IPTG进行诱导使该蛋白获得了高效表达，表达产物为融合蛋白，分子量约41.3kD。Western-blotting分析表明，所表达的蛋白可与PED小鼠阳性血清发生反应。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法，抗原最佳包被量0.226μg/孔，血清最佳稀释度为1:100，二抗最佳稀释度为1:2000，待检血清OD450值≥0.28判定为阳性。国内首次用该方法对临床猪血清样本进行了检测，母猪血清PED抗体阳性率为84.26%（166/197），仔猪血清阳性率为27.93%（31/111）。结果表明所建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好，可用于临床上PEDV抗体水平的监测和PED流行病学调查。3.猪流行性腹泻高免卵黄的制备及临床应用针对病毒变异、现有疫苗预防效果不佳等状况，为有效控制疫情的发生和流行，利用流行毒株制备了PED高免卵黄抗体，并对其防治效果进行了研究。以流行毒株制备PED灭活苗免疫产蛋母鸡，当卵黄抗体的琼扩效价达到1:128时收集鸡蛋制备PED高免卵黄液，通过人工感染治疗试验和临床治疗试验观察其效果。人工感染治疗试验结果表明，治疗组仔猪的死亡率为10%（1/10），而对照组死亡率高达100%；临床治疗试验结果表明，对不同地市5家规模化猪场1343头猪的治疗有效率为90%，预防有效率为91%。结果表明所制备的高免卵黄抗体对PED具有显着的防治效果。
杜季梅[5]（2013）在《仔猪病毒性腹泻流行病学调查及卵黄抗体在PEDV防治中的应用》文中指出2010年11月至今，仔猪腹泻在全国范围内暴发。本次腹泻疫情以发病急、传播速度快、发病率高、死亡率高、波及面积广、造成的经济损失严重等特点，主要感染1周龄以内的产房仔猪，发病率90%以上，死亡率100%。为查明河南省新生仔猪急性腹泻疫情的主要病因，本研究分别应用RT-PCR和PCR方法对98个猪场送检的181份发病仔猪病料进行了猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PoRV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪伪狂犬病毒（PRV）的分子检测。结果显示，PEDV阳性检出率高达71.27%，与TGEV、PoRV、CSFV和PRV的混合感染阳性检出率分别为2.76%、2.21%、56.91%和17.13%，与CSFV、PRV的三重混合感染阳性检出率为17.10%，而与TGEV、PoRV的三重混合感染阳性检出率仅为0.55%；TGEV、PoRV、CSFV和PRV的阳性检出率分别为5.52%、2.21%、69.06%和44.20%，CSFV和PRV的混合感染阳性检出率为32.04%；腹泻病原检测阳性猪场在河南省分布较为均匀，但以豫北、豫南养猪密集区发病猪场比例较大。秋、冬季节比例较多，但春、夏季季节呈逐步上升趋势，规模化猪场阳性场所占比例远高于中小型猪场。研究结果证实新生仔猪急性腹泻疫情在河南全省猪场感染和流行极为普遍且季节性已日趋不明显，PEDV是引起此次疫情的最主要病因，但CSFV和PRV扮演着推波助澜的重要角色，TGEV、PoRV感染比例比较小。虽然大部分猪场使用目前市场上流通的胃流轮三联弱毒疫苗进行4次/年的预防，但均未起到保护效果，发病仔猪使用抗生素、抗病毒药、均无法控制该病。本研究利用发病仔猪肠道，制备组织灭活苗，定期免疫产蛋母鸡，制备抗PEDV特异性高免卵黄抗体。经实验室和临床试验证明卵黄抗体对新生仔猪的预防保护率达90%，保护率高，对2～3日龄发病仔猪的治疗效果不明显，但随着日龄的增大，卵黄抗体的治愈率逐渐增高。临床试验结果表明预防保护率达到90%以上的猪场34家，占65.38%，保护率在50%～90%的猪场有5家，占9.62%，预防效果理想。其中卵黄抗体预防保护率在50%以下有13家，占25.00%，通过病原检测结果分析，这些猪场均存在猪瘟病毒或伪狂犬病毒混合感染，所以单纯使用抗PEDV卵黄抗体效果较差，应根据猪场的病原检测结果分析原因，采取综合控制措施。
江馗语[6]（2012）在《猪瘟病毒四种不同抗原卵黄抗体中和效力评价》文中提出猪瘟（Classical Swine Fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引起的一种急性、接触性传染病。临床表现为高热和全身多发性小点出血,以内脏器官多发性出血、梗塞和坏死为主要病理特征。该病流行广泛,发病率和死亡率高,给养猪业造成了严重的经济损失。有人曾经用干扰素、中草药制剂来预防及治疗猪瘟,但均未取得成功。目前,对该病的预防主要采用免疫接种猪瘟兔化弱毒疫苗,但接种猪瘟疫苗后经常出现免疫失败的现象,不能对猪瘟进行全面有效的预防。卵黄抗体作为一种高效生物制剂在传染病的紧急预防中显示出了明显的效果,也为该病的紧急预防开辟了新的途径。本研究克隆了猪瘟病毒E2基因中抗原指数较高且含有中和性抗原域的A1/A2区以及B、C区中抗原性较高的一段区域,该区域位于E2基因上754～880氨基酸残基位置,命名为tE2,又合成了两段猪瘟病毒线性中和表位核苷酸序列,表位CKEDYRYAISSTNEIGLLGAGGLT位于E2基因上693～716氨基酸残基位置,命名为P1,表位QTAVSPTTLRTEVVK位于E2基因上828～842氨基酸残基位置,命名为P2。利用同尾酶串联技术将P1和P2两个中和表位分别在克隆载体pUC57上,重复串联4次,酶切后连接表达载体在大肠杆菌中表达,分别获得了具有中和抗原表位的tE2重组蛋白、4P1和4P2串联重组蛋白,经Western blot鉴定均具有抗原性。将上述3种重组蛋白和猪瘟活疫苗分别用白油佐剂混合乳化,分组免疫9月龄海兰蛋鸡,共进行3次免疫,每次间隔两周。其中,tE2重组蛋白免疫组的一免剂量为0.50mg/只,二免剂量为1.00mg/只,三免剂量为1.50mg/只；4P1和4P2串联重组蛋白免疫组一免剂量均为0.40mg/只,二免剂量为0.60mg/只,三免剂量为0.80mg/只；猪瘟活疫苗免疫组三次免疫的剂量均为10头份/只。二免后一周开始收蛋,用氯仿法抽提卵黄抗体,用建立的间接ELISA法检测抗体效价。以猪瘟活疫苗和tE2重组蛋白作为免疫原获得的卵黄抗体用tE2重组蛋白作为包被抗原,ELISA效价最高值分别为1:1024和1:4096；以4P1重组蛋白作为免疫原获得的卵黄抗体用4P1重组蛋白作为包被抗原,ELISA效价最高值为1:4096；以4P2重组蛋白作为免疫原获得的卵黄抗体用4P2重组蛋白作为包被抗原,ELISA效价最高值为1:1024。体外免疫荧光中和试验结果显示,抗猪瘟活疫苗卵黄抗体、抗tE2重组蛋白卵黄抗体、抗4P1重组蛋白卵黄抗体和抗4P2重组蛋白卵黄抗体均可不同程度中和猪瘟病毒。其中,抗猪瘟活疫苗卵黄抗体和J抗4P1重组蛋白卵黄抗体中和作用相对较强,抗体和病毒混合后接种PK-15细胞,培养24h和48h进行免疫荧光试验均无特异性荧光出现：而抗tE2重组蛋白卵黄抗体和抗4P2重组蛋白卵黄抗体和病毒混合后接入PK-15细胞,在24h和48h进行免疫荧光试验均有少量特异性荧光出现,但明显少于阳性接毒对照出现的荧光数量。兔体中和试验结果显示,抗猪瘟活疫苗卵黄抗体和抗4P1重组蛋白卵黄抗体能够延缓和降低兔体发热,说明对猪瘟病毒有一定的中和作用。本研究结果表明,以tE2、4P1、4P2重组蛋白和猪瘟活疫苗为免疫原制备的四种抗猪瘟病毒卵黄抗体,对猪瘟病毒均有不同程度中和作用。其中抗猪瘟活疫苗卵黄抗体和抗4P1重组蛋白卵黄抗体中和作用相对较强。该研究进一步证明了所选中和表位能够诱导机体产生中和抗体,在表位疫苗研究及有中和效力的卵黄抗体的制备上具有潜在的应用价值。
索江华,吴玉臣,唐光武,郭爽,张桂云[7]（2010）在《猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的研制与应用》文中研究说明为制备猪圆环病毒2型（porcine circovirus serotype2,PCV-2）高免卵黄抗体,并对其治疗效果进行研究,通过自制猪圆环病毒2型（PCV-2）灭活苗,免疫SPF产蛋鸡,收集高免蛋,制备PCV-2高免卵黄抗体,对高免卵黄抗体进行无菌检验、活体动物安全性检测,用琼脂扩散方法进行效价检验和人工感染保育猪治疗试验,并将其应用于临床实践,观察其治疗效果。结果抗体效价达到1∶64;人工感染治疗试验治愈率达100%;临床试验治愈率为96%,应用效果良好。
刘文鑫[8]（2010）在《大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用》文中进行了进一步梳理仔猪黄痢、仔猪白痢是由产肠毒素性大肠杆菌引起的新生仔猪常见的传染病,主要表现为严重的腹泻、脱水,并导致大批仔猪死亡,严重影响仔猪的成活率。目前,对该病的防治主要采用大肠杆菌多价苗免疫和抗生素治疗,但防治效果均不理想。卵黄抗体作为一类可替代抗生素的高效生物防治制剂在防治新生仔猪大肠杆菌性腹泻中显示出明显的效果,为该病的防治开辟了新的途径。目前制备仔猪黄、白痢卵黄抗体多以天然菌毛为免疫原,然而,天然菌毛提取和纯化的产量不能满足大量制备卵黄抗体的需要。本研究旨在利用基因工程技术,构建表达菌毛蛋白的重组载体,并使其在大肠杆菌中高效表达,为仔猪黄、白痢卵黄抗体的免疫原的大量制备提供一种新的方法。实验分别提取了产肠毒素大肠杆菌F4、F5天然菌毛,构建并高效表达了具有良好免疫原性的F4、F5融合蛋白。以上述天然菌毛和表达蛋白作为免疫原对9月龄海兰蛋鸡进行免疫。将鸡分为A（F4菌毛）、B（F4蛋白）、C（F5菌毛）、D（F5蛋白）4组,每组9个笼,每笼3-4只。A组又分为A1、A2、A3 3组,每组3笼,按照0.25mg／只、0.5mg／只、0.75mg／只三个免疫剂量分别对A1、A2、A3组进行肌注免疫。首免2周后进行第二次加强免疫。将A1组的3个笼（A1-1、A1-2、A1-3）按照0.25mg／只、0.5mg／只、0.75mg／只三个免疫剂量分别进行免疫,A2、A3组的分组与免疫剂量和方法同A1组。二免后2周收集鸡蛋并提取卵黄抗体用试管凝集试验和ELISA检测特异性抗体效价,选择效价最高的1组进行第3次加强免疫,剂量为1.00mg／只。根据检测结果确定收蛋时机。B、C、D组的分组与免疫剂量和方法同A组。实验对氯仿法、盐酸水稀释法、辛酸-硫酸铵沉淀法和聚乙二醇沉淀法提取的卵黄抗体进行了效价比较,确定了大量制备仔猪黄、白痢卵黄抗体的提取方法,并根据《中国兽药典》要求对提取的卵黄抗体进行了相关检测。用提取的卵黄抗体对3日龄仔猪的小肠上皮细胞进行了吸附和吸附抑制试验。取新生仔猪6窝,分别灌服K88ab菌毛、K88ab蛋白、K99菌毛、K99蛋白、K88ab菌毛+K99菌毛、K88ab蛋白+K99蛋白六种卵黄抗体。每窝仔猪平均分成两组：一半灌服1：9稀释的卵黄液,另一半灌服粗提的卵黄抗体,每只每天灌服5m1,从仔猪出生时开始连灌三周,每周前三天灌服。ELISA和试管凝集试验检测结果显示,以天然菌毛和表达蛋白作为免疫原均可产生高效价的卵黄抗体。三免后第3周效价达到最高,ELISA效价最高可达1：10240,试管凝集效价可达1：5120,该卵黄抗体高水平效价可维持5周。安全性实验结果显示,该卵黄抗体达到《中国兽药典》对兽医生物制品的标准。特异性实验结果显示,该卵黄抗体可与其相应大肠杆菌发生特异性凝集,而与其它大肠杆菌则无凝集现象。体外试验结果显示,将该卵黄抗体和大肠杆菌（K88ab+、K99+）按1：1的体积比混合作用30min后,能够抑制大肠杆菌（K88ab+、K99+）对仔猪小肠上皮细胞的吸附,而未用卵黄抗体处理的大肠杆菌（K88ab+、K99+）可紧密的吸附于仔猪小肠上皮细胞表面。临床实验显示,灌服该卵黄抗体后仔猪精神状态良好。灌服抗K99蛋白1：9稀释卵黄液的仔猪只有少数发生轻微腹泻,出生后1-3周的腹泻率分别为2.86%、11.4%、0%,其余各灌服组均未发生腹泻,对照组的腹泻率分别为3.57%、10.71%、3.57%,灌服抗K99菌毛1：9稀释卵黄液和抗K99菌毛卵黄抗体组与对照组的平均体重差异显着,其他实验组与对照组的平均体重差异不显着。结果表明,以表达蛋白作为免疫原也可以制备出高效价的卵黄抗体。本实验所制备的卵黄抗体对仔猪黄、白痢具有较好的预防和治疗效果,可以进行临床应用。
李宇琴[9]（2010）在《鸭肝炎病毒分离株的鉴定及其卵黄抗体的制备》文中认为鸭病毒性肝炎（Duck Virus Hepatitis,DVH）是由小RNA病毒科肠病毒属的鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus,DHV）引起雏鸭的一种急性、高度致死性、烈性传染病。其特征为病鸭痉挛、头向背部后仰、呈角弓反张特异姿势。主要病变特点为肝脏肿大,有大小不等的出血斑、出血点。鸭肝炎病毒有血清型Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,三个型之间没有抗原相关性。以往在我国流行的主要是Ⅰ型鸭肝炎病毒,但近几年来,不断有使用I型鸭肝炎弱毒疫苗或高免卵黄抗体进行预防或治疗无效的鸭群爆发疑似鸭肝炎,怀疑为新型鸭肝炎。本病在国内雏鸭群中频频发生,给养殖户带来了极大的经济损失。本试验对临床患病鸭分离的一株疑似鸭肝炎病毒进行了生物学鉴定、血清型鉴定和毒力测定。利用Ⅰ型和新型鸭肝炎病毒鉴别引物对提取的病毒RNA进行了RT-PCR扩增。将分离病毒分别与Ⅰ型和新型鸭肝炎病毒阳性血清进行中和试验。根据测定的病毒ELD50、LD50,进行了雏鸭攻毒和鸭胚肝细胞接毒试验并用病变肝脏、脾脏制作石蜡切片,观察其组织病理特征。结果显示:电镜可观察到40nm左右的圆形无囊膜病毒颗粒,该分离毒可耐受37℃30min、氯仿,pH4.0pH9.0均不能使其丧失活性。RT-PCR扩增出了705bp条带与预期相符,分离病毒不能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清中和,新型鸭肝炎病毒阳性血清对该病毒的中和效价是1:200,该毒株的ELD50为10-5.7/0.1mL,LD50为10-6.9/0.5mL。能引起攻毒鸭与临床病例一致的症状和病变以及显着的组织病理学变化和肝细胞病变,可作为新型鸭肝炎病毒的疫苗候选株开发应用。用该毒株接种易感雏鸭,取病死鸭肝脏,制备组织灭活苗,按不同免疫程序免疫高产蛋鸡,提取卵黄抗体。对不同免疫程序、不同卵黄抗体的提取方法以及卵黄抗体的保存方法进行了探讨。试验结果表明,最佳免疫程序是,首免颈部皮下注射2 mL/只,首免一周后于左侧腹股沟皮下注射2.5 mL/只,首免二周后于右侧腹股沟皮下注射2.5 mL/只;抗体效价从首免后第5周开始上升至1:126持续到第9周开始下降。最适合生产的卵黄抗体提取方法是生理盐水法,保存方法可以-20℃冻存和冻干保存。将提取的卵黄抗体进行了易感鸭被动治疗试验,包括对卵黄抗体最小免疫效价、最佳注射途径,以及对同居感染雏鸭的保护效果等。结果表明:我们制备的卵黄抗体对易感鸭的最低保护中和效价为27,可以使4日龄雏鸭免于死亡,并可以保护雏鸭渡过DVH易感期。最佳途径是腿部肌肉注射。最佳治疗时间为24h内。此外,卵黄抗体对同居感染鸭具有良好保护效果。本实验从临床上常发鸭病毒性肝炎病例出发,为疫苗和卵黄抗体的研制奠定基础,为有效地预防和控制鸭肝炎病毒引起地方性疾病提供了一些技术手段和理论依据。
谢燕燕[10]（2010）在《功能性卵黄粉的制备及其对仔猪生长性能的影响》文中研究指明本研究以猪致病性大肠杆菌（ETEC）为抗原免疫蛋鸡,获得特异性卵黄抗体（egg yolk immunoglobulins,IgY）,制备成功能性卵黄粉。在探讨功能性卵黄粉制备及其喷雾干燥工艺参数筛选的基础上,开展功能性卵黄粉的组分特性、贮存稳定性以及其对小白鼠和仔猪生长性能的影响研究。得到如下主要研究结果:1.IgY的制备以猪ETEC为抗原免疫蛋鸡,测定首免40d后收集的鸡蛋中IgY效价均已达到1:12800以上时,可开始收集鸡蛋制备功能性卵黄粉;其后每隔60d再加强免疫一次,即可得到持续高效价IgY的鸡蛋。2.功能性卵黄粉喷雾干燥工艺参数的筛选以功能性卵黄粉的IgY效价、产品得率及感官性状等为评价指标,筛选出的功能性卵黄粉最佳喷雾干燥工艺参数。喷雾干燥温度应控制在进口温度140℃～160℃、出口温度78℃～83℃之间,在加工过程中应及时清理附积在机器干燥塔内的粉末,以保证功能性卵黄粉的高效价、高生产效率和低生产成本。3.功能性卵黄粉的稳定性试验经检测功能性卵黄粉平均水分1.5%、细菌总数156 CFU/g、大肠杆菌数0 CFU/g,符合GB 2749-2003蛋制品卫生标准要求;在60℃干热环境中贮存5d其效价不受影响;在湿热敞开环境中贮存2d即变质,4d其效价即开始下降;在常温密闭环境中贮存1年仍能维持其高效价。功能性卵黄粉应在常温、干燥、密闭的环境中保存,其保质期为1年。4.小白鼠的饲养试验小白鼠饲养试验结果表明,IgY对ETEC有明显的体外抑菌作用;制备的功能性卵黄粉对小白鼠具有促进生长、调节机体免疫功能的作用,对ETEC诱导的小白鼠肠道感染具有显着的预防和治疗作用,试验组小白鼠的死亡率比对照组的低52.3% （P<0.05）。5.仔猪饲养试验选（32±2）日龄断奶5d后的杜长大仔猪90头,公母各半,随机分成3组,每组3个重复,每个重复10头仔猪。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ组和Ⅱ组在对照组日粮的基础上分别添加0.1%和0.2%的功能性卵黄粉,试验期28d。结果表明,试验Ⅰ组和Ⅱ组仔猪的日均增重分别显着高于对照组14.4%（P<0.05）和15.3%（P<0.05）;日均采食量分别提高11.70%（P>0.05）和6.86%（P>0.05）;料重比分别下降5.55%（P>0.05）和6.50%（P>0.05）;腹泻率分别极显着降低54.8%（P<0.01）和84.3%（P<0.01）,且降低了仔猪的死亡率和粪便中致病性大肠杆菌的总数;试验Ⅱ组的心脏指数比对照组提高29%（P<0.05）;3组仔猪的血液生化指标和肠绒毛形态无差异,但试验组的肠绒毛高度有增高趋势;每头仔猪的经济效益分别极显着提高67.76%（P<0.01）和86.42% （P<0.01）。表明功能性卵黄粉能有效地提高仔猪生长性能,对仔猪因ETEC而引起的消化道疾病具有防治作用,可提高仔猪养殖的经济和生态效益,具有广阔的应用前景。
二、抗猪大肠杆菌高免卵黄的研制及对实验感染病例的疗效观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、抗猪大肠杆菌高免卵黄的研制及对实验感染病例的疗效观察（论文提纲范文）
（1）黑龙江省某奶牛场感染性犊牛腹泻病原鉴定及复合卵黄抗体预防效果（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 牛病毒性腹泻 |
| 1.1 牛病毒性腹泻病毒 |
| 1.1.1 流行病学 |
| 1.1.2 发病机理及临床症状 |
| 1.1.3 实验室诊断 |
| 1.1.4 防控措施 |
| 1.2 牛冠状病毒 |
| 1.2.1 流行病学 |
| 1.2.2 发病机理和临床症状 |
| 1.2.3 实验室诊断 |
| 1.2.4 防治措施 |
| 1.3 牛轮状病毒 |
| 1.3.1 流行病学 |
| 1.3.2 发病机理和临床症状 |
| 1.3.3 实验室诊断 |
| 1.3.4 防控措施 |
| 2 牛细菌性腹泻 |
| 2.1 牛大肠杆菌 |
| 2.1.1 流行病学 |
| 2.1.2 发病机理和临床症状 |
| 2.1.3 实验室诊断 |
| 2.1.4 防控措施 |
| 2.2 牛沙门氏菌 |
| 2.2.1 流行病学 |
| 2.2.2 发病机理和临床症状 |
| 2.2.3 实验室诊断 |
| 2.2.4 防控措施 |
| 2.3 牛产气荚膜梭菌 |
| 2.3.1 流行病学 |
| 2.3.2 发病机理和临床症状 |
| 2.3.3 实验室诊断 |
| 2.3.4 防控措施 |
| 3 牛寄生虫性腹泻 |
| 3.1 牛隐孢子虫 |
| 3.1.1 流行病学 |
| 3.1.2 发病机理和临床症状 |
| 3.1.3 实验室诊断 |
| 3.1.4 防控措施 |
| 4 犊牛腹泻的防控 |
| 5 卵黄抗体治疗胃肠道疾病研究进展 |
| 5.1 卵黄抗体的特异性 |
| 5.2 卵黄抗体在肠道感染免疫中的应用 |
| 6 本研究目的与意义 |
| 第二章 黑龙江省某规模化奶牛场犊牛腹泻病原鉴定 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 病料来源 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 细菌检测 |
| 2.1.1 细菌分离及镜检 |
| 2.1.2 细菌生化试验 |
| 2.1.3 细菌致病性试验 |
| 2.1.4 细菌基因组DNA提取 |
| 2.1.5 细菌16S rRNA PCR扩增 |
| 2.1.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2 病毒检测 |
| 2.2.1 病料的采集与样品预处理 |
| 2.2.2 病毒总RNA提取与反转录 |
| 2.2.3 病毒PCR扩增 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.3 寄生虫检测 |
| 2.3.1 粪便总RNA提取与反转录 |
| 2.3.2 隐孢子虫巢氏PCR扩增 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 细菌检测结果 |
| 3.1.1 细菌分离培养与鉴定结果 |
| 3.1.2 细菌生化试验鉴定结果 |
| 3.1.3 细菌致病性试验结果 |
| 3.1.4 细菌16S r RNA PCR扩增结果 |
| 3.2 病毒检测结果 |
| 3.3 寄生虫检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 复合卵黄抗体对犊牛腹泻预防试验效果 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验药物 |
| 1.3 主要试剂与仪器设备 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 试验设计及饲养管理 |
| 2.2 生长性能测定 |
| 2.3 血清样品采集与保存 |
| 2.4 血清样品的检测 |
| 2.4.1 血清蛋白代谢指标测定 |
| 2.4.2 血清肝功指标测定 |
| 2.4.3 血清免疫指标测定 |
| 2.5 数据统计分析 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 生长性能测定结果 |
| 3.2 血清蛋白代谢指标测定结果 |
| 3.3 血清肝功指标测定结果 |
| 3.4 血清免疫球蛋白测定结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 复合卵黄抗体对犊牛生长性能的影响 |
| 4.2 复合卵黄抗体对犊牛血清生化指标的影响 |
| 4.3 复合卵黄抗体对犊牛血清免疫球蛋白含量的影响 |
| 5 小结 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）河南部分地区PCV2流行病学调查及卵黄抗体制备（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 PCV研究进展 |
| 1 PCV2的病原学 |
| 1.1 猪圆环病毒的发现及分类 |
| 1.2 猪圆环病毒2型的理化性质 |
| 1.3 猪圆环病毒2型病毒的传染性 |
| 1.4 猪圆环病毒的分子生物学特征 |
| 1.4.1 猪圆环病毒基因组结构 |
| 1.4.2 猪圆环病毒2型基因组编码的蛋白 |
| 1.4.3 猪圆环病毒2型的致病机理 |
| 2 PCV2引起的相关疾病 |
| 2.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征 |
| 2.2 猪皮炎肾病综合征 |
| 2.3 猪呼吸道疾病综合征 |
| 2.4 繁殖障碍 |
| 2.5 仔猪先天性震颤 |
| 3 诊断方法 |
| 3.1 临床诊断 |
| 3.2 病理学检查 |
| 3.3 病原学和血清学检查 |
| 3.3.1 间接免疫荧光试验(IFA) |
| 3.3.2 免疫组织化学方法技术 |
| 3.3.3 聚合酶链式反应 |
| 3.3.4 原位杂交 |
| 3.3.5 酶联免疫吸附试验 |
| 4 PCV2疫苗研究现状 |
| 第二章 IgY综述 |
| 1 IgY的发现与优势 |
| 1.1 IgY的发现 |
| 1.2 IgY的优势 |
| 2 IgY的应用 |
| 2.1 IgY在人类疾病防治中的应用 |
| 2.2 IgY在禽病防治中的应用 |
| 2.2.1 新城疫 |
| 2.2.2 传染性法氏囊病 |
| 2.2.3 禽流感 |
| 2.2.4 小鹅瘟 |
| 2.2.5 鸭肝炎 |
| 2.2.6 鸭坦布苏病毒 |
| 2.3 IgY在猪病防治中的应用 |
| 2.3.1 大肠杆菌 |
| 2.3.2 沙门氏菌 |
| 2.3.3 猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻 |
| 2.3.5 轮状病毒 |
| 2.3.6 猪圆环病毒2型 |
| 2.3.7 猪繁殖与呼吸综合征 |
| 2.3.8 猪瘟 |
| 3 IgY的提取纯化方法 |
| 3.1 聚乙二醇6000沉淀法 |
| 3.2 硫酸葡聚糖沉淀法 |
| 3.3 氯仿法 |
| 3.4 有机溶剂法 |
| 3.5 水稀释法 |
| 3.6 表面活性剂法 |
| 3.7 辛酸法 |
| 第二部分 研究内容 |
| 第一章 CV2全基因组测序及分析 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器设备 |
| 2.2 主要试剂及配置方法 |
| 2.3 引物设计及合成 |
| 2.4 病毒核酸纯化 |
| 2.5 检测收集的病料 |
| 2.6 PCV2基因组测序 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 部分病料检测结果 |
| 3.2 PCV2全基因组扩增结果 |
| 3.3 阳性菌株鉴定 |
| 3.4 PCV2全基因组同源性分析 |
| 3.5 PCV2ORF1序列及编码蛋白分析 |
| 3.6 PCV2ORF2序列及编码蛋白分析 |
| 3.7 PCV2的遗传进化分析 |
| 4 讨论 |
| 第二章 PCV2特异性IgY的研制 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 常用试剂的配置 |
| 2.2 蛋鸡的饲养与免疫 |
| 2.3 鸡蛋的收集及血清采集 |
| 2.4 血清抗体的制备 |
| 2.5 IgY的制备 |
| 2.6 IgY纯度检测 |
| 2.7 两种方法纯化样品的抗体水平检测 |
| 2.8 不同免疫方案中血清抗体变化规律 |
| 2.9 不同免疫方案中IgY变化规律 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 抗体纯化效果 |
| 3.2 纯化方法对抗体水平的影响 |
| 3.3 血清抗体与IgY变化规律 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
（3）抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及其保护效力的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 部分缩略词中英文对照 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪伪狂犬病毒的研究进展 |
| 1.1 伪狂犬病毒的发现与命名 |
| 1.2 PRV的分子生物学特性 |
| 1.3 疫苗研究 |
| 1.4 猪伪狂犬病的治疗性研究 |
| 1.5 中国猪伪狂犬病发病情况 |
| 1.6 PRV根除策略 |
| 1.7 展望 |
| 2 卵黄抗体的研究进展 |
| 2.1 卵黄抗体的发展简史 |
| 2.2 卵黄抗体的结构及生物学特性 |
| 2.3 卵黄抗体的优势 |
| 2.4 卵黄抗体的提取、分离与纯化 |
| 2.5 IgY在生物学研究,人类和动物医学领域的应用 |
| 2.6 总结和展望 |
| 第二章 抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂、器材和实验动物 |
| 1.2 试剂配制 |
| 1.3 试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 卵黄抗体SDS-PAGE检测 |
| 2.2 间接ELISA检测方法的建立 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体保护效力的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要试验试剂 |
| 1.2 主要试验器材 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.5 试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 卵黄抗体对PK-15细胞的毒性 |
| 2.2 病毒TCID_(50)的测定 |
| 2.3 中和试验结果 |
| 2.4 PCR鉴定和重组质粒的鉴定 |
| 2.5 荧光定量PCR检测 |
| 2.6 血清PCR检测 |
| 2.7 组织PCR检测 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）猪流行性腹泻流行毒株部分基因分子特征及防治措施研究（论文提纲范文）
| 致谢 摘要 文献综述 |
| 1. 猪流行性腹泻病毒研究进展 |
| 1.1 PEDV 的一般生物学特征 |
| 1.2 PEDV 的基因组成及其特点 |
| 1.3 PEDV 的变异 |
| 2. 猪流行性腹泻防治研究进展 |
| 2.1 猪流行性腹泻的危害 |
| 2.2 猪流行性腹泻的诊断 |
| 2.3 猪流行性腹泻的免疫预防 |
| 2.4 猪流行性腹泻的卵黄抗体防治 |
| 3. 本研究的目的和意义 试验一 2010～2012 年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 试验二 PEDV 流行株 N 基因主要抗原表位原核表达及 ELISA 方法的建立 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 试验三猪流行性腹泻高免卵黄抗体的制备及临床应用 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 全文总结 参考文献 英文摘要 附：作者读研期间已发表文章 |
（5）仔猪病毒性腹泻流行病学调查及卵黄抗体在PEDV防治中的应用（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| 文献综述 |
| 文献综述（一）引起仔猪腹泻的病毒性疾病概述 |
| 文献综述（二）卵黄抗体研究进展 |
| 试验一 猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状病毒病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒RT-PCR、PCR 方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 试验二 河南省规模化猪场猪 PEDV、TGEV、PoRV、CSFV、PRV 的流行病学调查 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 试验三 抗猪流行性腹泻病毒高免卵黄的制备及临床应用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
（6）猪瘟病毒四种不同抗原卵黄抗体中和效力评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1. 引言 |
| 1.1 猪瘟概述 |
| 1.2 猪瘟病毒研究进展 |
| 1.2.1 猪瘟病毒 |
| 1.2.2 猪瘟病毒的基因组结构 |
| 1.2.3 猪瘟病毒E2蛋白 |
| 1.3 猪瘟的防治 |
| 1.3.1 疫苗免疫 |
| 1.3.2 中草药辅助治疗 |
| 1.3.3 卵黄抗体防治 |
| 1.4 卵黄抗体研究进展 |
| 1.4.1 卵黄抗体的结构 |
| 1.4.2 卵黄抗体的优缺点 |
| 1.4.3 卵黄抗体的提取方法 |
| 1.4.4 卵黄抗体的应用 |
| 1.5 研究的目的与意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 毒株、菌株、质粒、实验动物及细胞系 |
| 2.1.2 PCR扩增引物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 猪瘟病毒tE2基因的克隆及表达 |
| 2.2.2 猪瘟病毒重复中和表位的串联及表达 |
| 2.2.3 卵黄抗体的制备 |
| 2.2.4 卵黄抗体效价ELISA检测 |
| 2.2.5 卵黄抗体效力评价 |
| 3. 结果 |
| 3.1 猪瘟病毒tE2基因的克隆及表达 |
| 3.1.1 tE2基因片段的克隆 |
| 3.1.2 tE2重组克隆质粒的PCR及酶切鉴定 |
| 3.1.3 tE2重组表达质粒的PCR及酶切鉴定 |
| 3.1.4 tE2重组蛋白的表达、纯化及Western blot鉴定 |
| 3.2 猪瘟病毒重复中和表位的串联及表达 |
| 3.2.1 人工合成质粒的鉴定 |
| 3.2.2 串联重组克隆质粒的双酶切鉴定 |
| 3.2.3 串联重组表达质粒的双酶切鉴定 |
| 3.2.4 串联重组蛋白的表达、纯化及Western blot鉴定 |
| 3.3 卵黄抗体效价检测 |
| 3.4 卵黄抗体效力评价 |
| 3.4.1 猪瘟病毒在猪肾细胞上的增殖培养鉴定 |
| 3.4.2 卵黄抗体与猪瘟病毒的特异性结合荧光检查 |
| 3.4.3 免疫荧光中和试验结果 |
| 3.4.4 兔体中和试验结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 卵黄抗体在预防猪瘟方面的应用前景 |
| 4.2 重复表位串联策略 |
| 4.3 密码子偏好性对外源蛋白表达的影响 |
| 4.4 不同免疫原制备的卵黄抗体效力比较 |
| 5. 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（8）大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 大肠杆菌性哺乳仔猪腹泻概述 |
| 1.2 致仔猪腹泻大肠杆菌的主要毒力因子 |
| 1.2.1 肠毒素性大肠杆菌菌毛 |
| 1.2.2 肠毒素 |
| 1.3 大肠杆菌性仔猪腹泻的防治 |
| 1.3.1 疫苗免疫 |
| 1.3.2 药物防治 |
| 1.3.3 卵黄抗体防治 |
| 1.4 卵黄抗体的研究进展 |
| 1.4.1 卵黄抗体的结构 |
| 1.4.2 卵黄抗体的特点 |
| 1.4.3 卵黄抗体的优越性 |
| 1.4.4 卵黄抗体的应用 |
| 1.4.5 卵黄抗体应用中存在的问题 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株和实验动物 |
| 2.1.2 PCR扩增引物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大肠杆菌K88ab、K99天然菌毛的提取 |
| 2.2.2 大肠杆菌K88ab及K99菌毛蛋白的表达 |
| 2.2.3 K88ab蛋白、菌毛Western blot鉴定 |
| 2.2.4 K99蛋白、菌毛Western blot鉴定 |
| 2.2.5 免疫程序设定 |
| 2.2.6 卵黄抗体的提取 |
| 2.2.7 卵黄抗体安全检验 |
| 2.2.8 卵黄抗体效价的检测 |
| 2.2.9 卵黄抗体特异性检验 |
| 2.2.10 卵黄抗体效力评价 |
| 2.2.11 保存期实验 |
| 3 结果 |
| 3.1 K88ab、K99菌毛的鉴定 |
| 3.1.1 K99菌毛的提取 |
| 3.1.2 K99菌毛浓度测定 |
| 3.1.3 K88ab菌毛的提取 |
| 3.1.4 K88ab菌毛浓度测定 |
| 3.2 K88ab及K99菌毛蛋白的表达与鉴定 |
| 3.2.1 K88ab、K99基因的克隆 |
| 3.2.2 K88ab、K99重组质粒的PCR及双酶切鉴定 |
| 3.2.3 K88ab、K99重组表达质粒的构建和鉴定 |
| 3.2.4 K88ab、K99重组菌毛蛋白的表达 |
| 3.2.5 K88ab、K99重组菌毛蛋白的纯化 |
| 3.2.6 K88ab菌毛和K88ab重组蛋白的Western blot检测 |
| 3.2.7 K99菌毛和K99重组蛋白的Western blot检测 |
| 3.3 卵黄抗体效价的检测 |
| 3.3.1 间接ELISA方法的建立 |
| 3.3.2 不同方法提取的卵黄抗体效价比较 |
| 3.3.3 第三次免疫后卵黄抗体效价 |
| 3.4 卵黄抗体特异性检验 |
| 3.5 卵黄抗体安全检验 |
| 3.5.1 物理性状检验 |
| 3.5.2 无菌检验 |
| 3.5.3 支原体检验 |
| 3.5.4 安全检验 |
| 3.6 体外吸附与吸附抑制实验 |
| 3.6.2 体外吸附抑制实验 |
| 3.7 预防试验 |
| 3.8 治疗试验 |
| 3.9 保存期实验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 卵黄抗体在预防仔猪腹泻方面的应用前景 |
| 4.2 不同免疫原的比较 |
| 4.3 卵黄抗体各种提取方法的优缺点比较 |
| 4.4 高免卵黄液和粗提卵黄抗体比较 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（9）鸭肝炎病毒分离株的鉴定及其卵黄抗体的制备（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 文献综述（一）鸭肝炎病毒的研究进展 |
| 文献综述（二）卵黄抗体研究进展 |
| 第一章：鸭肝炎病毒分离株的鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 第二章：鸭肝炎卵黄抗体的制备 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（10）功能性卵黄粉的制备及其对仔猪生长性能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 前言 |
| 2 卵黄抗体(IgY) |
| 2.1 IgY 的形成 |
| 2.2 IgY 的分子结构 |
| 2.3 IgY 的功能 |
| 2.4 IgY 的特点 |
| 3 IgY 在仔猪养殖中的应用 |
| 3.1 IgY 防治仔猪腹泻的机理 |
| 3.2 IgY 在防治仔猪ETEC 上的应用 |
| 4 本课题的目的意义和主要研究内容 |
| 4.1 本课题的目的意义 |
| 4.2 本课题研究的主要内容 |
| 第二章 功能性卵黄粉制备和贮存稳定性研究 |
| 第一部分 IgY 制备和功能性卵黄粉制备工艺优化 |
| 1 材料 |
| 1.1 制备抗原 |
| 1.2 培养基和试剂 |
| 1.3 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 鸡群的选择 |
| 2.2 免疫程序及鸡蛋抗体效价监测 |
| 2.3 IgY 效价检测方法 |
| 2.4 功能性卵黄粉的制备和效价检测 |
| 2.5 功能性卵黄粉在干燥塔内存留时间对其效价影响 |
| 2.6 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉效价的影响 |
| 2.7 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉生产效率的影响 |
| 2.8 卵清粉的制备和效价检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 IgY 产生规律 |
| 3.2 功能性卵黄粉在干燥塔内的存留时间对其效价的影响 |
| 3.3 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉效价的影响 |
| 3.4 喷雾干燥温度对功能性卵黄粉生产效率的影响 |
| 3.5 卵清粉的ELISA 检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 影响IgY 产生的主要因素 |
| 4.2 IgY 产生规律 |
| 4.3 功能性卵黄粉生产工艺的优化 |
| 5 小结 |
| 第二部分 功能性卵黄粉贮存稳定性的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 功能性卵黄粉 |
| 1.2 培养基和试剂 |
| 1.3 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 功能性卵黄粉组分的检测方法 |
| 2.2 不同喷雾干燥温度对功能性卵黄粉组分的影响 |
| 2.3 功能性卵黄粉的细菌总数检测方法 |
| 2.4 高温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 2.5 高温高湿环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 2.6 常温条件下对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 2.7 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 不同喷雾干燥温度对功能性卵黄粉组分的影响 |
| 3.2 功能性卵黄粉的细菌总数检测 |
| 3.3 高温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 3.4 高温高湿环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 3.5 常温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 不同喷雾干燥温度对功能性卵黄粉组分的影响 |
| 4.2 功能性卵黄粉的细菌总数的检测 |
| 4.3 高温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 4.4 高温高湿环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 4.5 常温干燥环境对功能性卵黄粉贮存稳定性的影响 |
| 5 小结 |
| 第三章 动物试验研究 |
| 试验一 小白鼠试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 功能性卵黄粉 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 培养基和试剂 |
| 1.5 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 小白鼠致死剂量测定 |
| 2.2 IgY 的体外抑菌试验 |
| 2.3 IgY 的动物保护试验 |
| 2.4 功能性卵黄粉对小白鼠的饲养研究 |
| 2.5 数据的分析处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 小白鼠致死量的确定 |
| 3.2 IgY 的体外抑菌试验 |
| 3.3 IgY 的动物保护试验 |
| 3.4 功能性卵黄粉对小白鼠的饲养效果研究 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小白鼠最小致死量确定 |
| 4.2 IgY 的体外抑菌试验 |
| 4.3 IgY 的动物保护试验 |
| 4.4 功能性卵黄粉对小白鼠饲养研究 |
| 5 小结 |
| 试验二 功能性卵黄粉对仔猪生长性能的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 功能性卵黄粉 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 培养基和试剂 |
| 1.4 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 试验设计、试验猪的选择、分组和日粮组成 |
| 2.2 饲养管理 |
| 2.3 试验仔猪平均日增重、平均日采食量和料重比的测定 |
| 2.4 试验仔猪腹泻率和死亡率的测定 |
| 2.5 粪便细菌总数检测 |
| 2.6 血液生化指标检测 |
| 2.7 脏器指数的测定 |
| 2.8 肠绒毛高度、隐窝深度和V/C 比值的测定 |
| 2.9 试验各组经济效益比较 |
| 2.10 数据分析处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 功能性卵黄粉对仔猪平均日增重、平均日采食量和料重比的影响 |
| 3.2 功能性卵黄粉对仔猪腹泻率、腹泻指数和死亡率的影响 |
| 3.3 功能性卵黄粉对仔猪粪便细菌总数的影响 |
| 3.4 仔猪血液生化指标的检测结果 |
| 3.5 功能性卵黄粉对仔猪脏器指数的影响 |
| 3.6 功能性卵黄粉对仔猪肠绒毛高度、隐窝深度和V/C 比值的影响 |
| 3.7 试验各组经济效益比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 功能性卵黄粉对仔猪生长性能的影响 |
| 4.2 功能性卵黄粉对控制仔猪腹泻的作用 |
| 4.3 功能性卵黄粉对仔猪血液生化指标的影响 |
| 4.4 功能性卵黄粉对仔猪脏器指数的影响 |
| 4.5 功能性卵黄粉对仔猪肠组织结构的影响 |
| 4.6 各组经济效益的比较 |
| 5 小结 |
| 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、抗猪大肠杆菌高免卵黄的研制及对实验感染病例的疗效观察（论文参考文献）
- [1]黑龙江省某奶牛场感染性犊牛腹泻病原鉴定及复合卵黄抗体预防效果[D]. 张迪. 黑龙江八一农垦大学, 2021(10)
- [2]河南部分地区PCV2流行病学调查及卵黄抗体制备[D]. 李明亮. 河南农业大学, 2018(02)
- [3]抗猪伪狂犬病毒卵黄抗体的制备及其保护效力的研究[D]. 陈海超. 南京农业大学, 2015(06)
- [4]猪流行性腹泻流行毒株部分基因分子特征及防治措施研究[D]. 郑逢梅. 河南农业大学, 2013(04)
- [5]仔猪病毒性腹泻流行病学调查及卵黄抗体在PEDV防治中的应用[D]. 杜季梅. 河南农业大学, 2013(05)
- [6]猪瘟病毒四种不同抗原卵黄抗体中和效力评价[D]. 江馗语. 东北农业大学, 2012(03)
- [7]猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的研制与应用[J]. 索江华,吴玉臣,唐光武,郭爽,张桂云. 中国畜牧兽医, 2010(06)
- [8]大肠杆菌F4、F5天然菌毛及表达蛋白鸡卵黄抗体的制备及初步应用[D]. 刘文鑫. 东北农业大学, 2010(04)
- [9]鸭肝炎病毒分离株的鉴定及其卵黄抗体的制备[D]. 李宇琴. 扬州大学, 2010(02)
- [10]功能性卵黄粉的制备及其对仔猪生长性能的影响[D]. 谢燕燕. 福建农林大学, 2010(04)