一、Enhancement of FALL-39 mRNA expression and antibacterial activity of human pulmonary gland epithelial cells induced by BCG（论文文献综述）
李明,陈伟强,李岩,罗少洪,简玲敏[1]（2010）在《CpG ODN通过活化p38 MAPK上调A549细胞β防御素-2的表达》文中提出目的研究含CpG基序的寡核苷酸（unmethylated CpG motif containing oligodeoxynucleotide,CpG ODN）对人肺腺上皮细胞A549β防御素-2（humanβ-defensin 2,hBD-2）的表达及p38 MAPK磷酸化水平的影响。方法培养A549细胞,加或不加p38特异性抑制剂SB203580情况下用不同浓度CpG ODN进行干预。用RT-PCR法检测刺激后A549细胞hBD-2 mRNA表达变化,用Western Blot法检测细胞内p38MAPK蛋白磷酸化水平的变化。结果 CpG ODN刺激可以促进A549细胞内磷酸化p38 MAPK含量的增加,活化p38 MAPK途径,从而诱导hBD-2的表达,与对照组比较,P<0.05;用特异性阻断剂SB203580阻断p38 MAPK磷酸化可抑制CpG ODN的诱导作用。结论 CpG ODN通过p38 MAPK途径诱导hBD-2在呼吸道上皮细胞的表达,增强呼吸道对外界微生物的抵抗作用。
韩艳[2]（2007）在《中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ原核表达及其多克隆抗体的制备》文中进行了进一步梳理抗菌肽是天然免疫的主要组成部分,是动物体液免疫系统中具有广谱杀菌、抑制病毒、抑杀肿瘤细胞等作用的一类膜活性多肽。抗菌肽因为分子量小而且不具备抗原性、耐热、对原核生物细胞具有很高的生物学活性,而对真核生物的正常细胞没有明显的毒副作用而受到广泛关注。为了避免目的产物对工程菌的毒性作用,保证表达产物的稳定性,可以更简便的获得大量的表达产物以及在后续实验中能有效的对表达产物进行检测,本研究进行了中国鲎抗菌肽TachyplesinⅠ原核表达及其多克隆抗体的制备。本研究从中国鲎抗菌肽真核表达载体pPIC9-KRY中PCR扩增抗菌肽TachyplesinⅠ基因（标记为TPⅠ）,插入pQE-40中,切下带有运载蛋白DHFR的融合蛋白DHFR- TPⅠ,构建到pQE-80L中,构建中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ的大肠杆菌表达系统,表达中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ基因的融合蛋白DHFR-TPⅠ。SDS-PAGE检测表达并优化表达条件;利用改进的透析袋电洗脱回收蛋白的方法纯化表达产物,经体外抑菌活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌具有抑菌作用。利用纯化的蛋白免疫成年獭兔,免疫4次后制备DHFR-TPⅠ的多克隆抗体,间接ELISA检测血清效价,SPSS软件分析融合蛋白DHFR-TPⅠ与DHFR之间的关系,Western-blotting检测表达产物与抗体的特异性。本研究抗菌肽TachyplesinⅠ的原核表达及多抗的制备为以后亲和层析提取中国鲎抗菌肽、建立抗菌肽检测方法、抗菌肽异源表达水平的检测奠定基础。
唐博[3]（2007）在《蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）表达的研究》文中研究说明内源性抗微生物肽是生物体内先天性免疫的重要组成成分,防御素（defensins）是其中一大家族。β-防御素是防御素家族中的的重要成员,它主要分布于哺乳动物和鸟类的粘膜上皮组织内,已被确认为黏膜表面抗微生物屏障的组成成分。因目前未见有关羊雌性生殖道防御素的研究报道。也未见生殖道防御素表达和雌激素、孕激素关系的研究报道。本文系统研究了蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）的表达情况,并系统研究了生殖道β-防御素的表达和雌激素、孕激素的关系。结果如下:1运用RT-PCR技术,首次从蒙古绵羊雌性生殖道各器官中证实,β-防御素（sBD-1）在蒙古绵羊输卵管、子宫、子宫颈、阴道粘膜上皮内均有表达。并且发现,sBD-1在雌性生殖道的各个器官内的表达量不同。其中在子宫颈的表达量最高,子宫和输卵管内的表达量次之,阴道内的表达量最少。2将蒙古绵羊输卵管组织sBD-1的RT-PCR产物回收、地高辛探针标记,应用原位杂交技术,检测sBD-1 mRNA在输卵管组织中的定位。结果显示:sBD-1 mRNA在蒙古绵羊输卵管粘膜层上皮细胞游离面的胞质内表达。sBD-1在固有层、肌层、结缔组织中无表达。符合β-防御素主要表达于黏膜表面细胞的规律。3用0.25%胰蛋白酶消化方法,成功获得了原代培养、传代培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞。经形态学、免疫组化方法鉴定,证实所培养细胞为上皮细胞。传三代细胞经染色体核型分析表明,传代培养细胞健康正常。可以作为研究输卵管上皮细胞sBD-1表达与激素关系的研究模型细胞。4为了探讨蒙古绵羊雌性生殖道sBD-1的表达量是否与雌激素、孕激素有关,本实验对培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞进行激素添加实验。传代细胞培养4d,更换无血清培养液10h,添加激素培养,运用荧光定量RT-PCR方法检测sBD-1的表达情况。结果显示:（1）添加10-8 M,10-9 M ,10-10 M 17-β-雌二醇组均与对照组有极显着差异,而10-11 M17-β-雌二醇组与对照组无显着性差异。添加17-β-雌二醇情况下,不同培养时间对sBD-1的表达量无显着性影响。一定浓度的17-β-雌二醇对sBD-1表达有促进作用。（2）添加10-6 M,10-7 M孕酮组与对照组有显着性差异,10-8 M,10-9 M孕酮组与对照组差异极显着,10-11 M孕酮组与对照组无显着性差异。一定浓度的孕酮对培养的输卵管上皮细胞sBD-1的表达有促进作用。（3）模拟发情期激素浓度组（添加10-8 M 17-β-雌二醇,10-9 M孕酮）与对照组有极显着差异,模拟妊娠期激素浓度组（添加10-10 M 17-β-雌二醇, 10-7 M孕酮）与对照组有显着差异。17-β-雌二醇和孕酮混合添加对sBD-1表达也有促进作用;因此雌性生殖道防御素的表达与雌性动物的生理周期有关。由此说明,雌激素和孕激素是防御素表达的促进因素之一,但是不是防御素表达的必需因素。5为了进一步探讨雌激素、孕激素对雌性生殖道β-防御素表达的促进作用机理,培养的输卵管上皮细胞在添加雌激素拮抗剂他莫昔芬和孕激素拮抗剂米非司酮处理后,继续添加相应浓度的雌激素、孕激素,运用荧光定量RT-PCR方法检测sBD-1表达情况。结果显示,添加10-6 M他莫昔芬作用一定时间之后,再添加10-8 M 17-β-雌二醇对sBD-1表达没有促进作用;而添加10-6 M米非司酮一定时间之后,再添加10-8 M孕酮对sBD-1表达也不产生影响。雌激素、孕激素对β-防御素表达的促进作用是通过与相应的雌激素受体和孕激素受体结合实现的。
张锦霞[4]（2006）在《抗菌肽在动物乳腺中的表达及对乳房炎主要病原菌的抑制效应研究》文中提出抗菌肽作为一种新型的抗微生物制剂,除了具有广谱抗菌活性外,还有消炎、免疫调节等多种生物学功能,通过乳腺表达抗菌肽预防奶牛乳房炎不仅具有理论意义而且具有广阔的应用前景。本研究通过重叠延伸PCR法合成了天蚕素B、天蚕素A-蛙皮素杂合肽、牛乳铁蛋白肽和牛气管抗菌肽四个全长的抗菌肽基因;利用山羊β-酪蛋白调控序列和真核基因表达质粒构建了乳腺特异性表达载体,乳腺表达检测结果显示,表达载体能够指导抗菌肽在乳腺中的瞬时表达,表达的重组蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有明显的抑制作用。为了达到利用抗菌肽长期有效预防乳房炎的目的,进一步构建了上述不同抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体,并通过转染包装细胞获得了整合有抗菌肽基因的重组逆转录病毒,该病毒悬液注射妊娠期奶牛乳腺组织后,实现了抗菌肽在产犊后奶牛乳腺中稳定地通过乳汁分泌表达,并证明了其对临床分离的乳房炎主要病原菌具有明显的抗菌活性。本研究为通过乳腺表达抗菌肽预防奶牛乳房炎奠定了基础。
马懿[5]（2006）在《兔中性粒细胞防御素对A549细胞IL-8基因表达的影响》文中指出【背景】脊椎动物防御素（defensins）是小分子的阳离子抗菌多肽，它们广泛分布于上皮细胞和吞噬细胞中。人和兔中性粒细胞的总蛋白中5％以上为防御素，它们除了具有直接的抗菌功能外还能作为免疫活性分子作用于上皮细胞和免疫细胞，参与天然免疫和获得性免疫的调节。另外它们还可作为信号分子调节细胞信号转导过程，促进细胞的增殖、分化等。探索防御素的非抗菌功能是目前防御素研究的重点方向之一，本研究从mRNA和蛋白水平初步探讨了兔中性粒细胞防御素（rabbits neutrophils antimicrobial peptides，NPs）对人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549 IL-8表达的影响及其作用机制。 【方法与结果】向家兔腹腔注射1％酪蛋白350ml，构建兔腹腔无菌性炎症动物模型。收集腹腔炎性渗出液，离心后弃上清，用双蒸水破红细胞，离心后超声破碎白细胞，再次离心收集上清。上清经Bio-Gel P-10低压色谱凝胶层析柱分离纯化后，用RP-HPLC法经C18柱进一步纯化，
侯松萍[6]（2006）在《卡介苗多糖核酸或卡介苗吸入对呼吸道Toll样受体、β-防御素的mRNA表达的影响》文中研究说明TLR是近年来新发现的一种同源于果蝇Toll的蛋白分子,在宿主天然免疫中具有重要作用。Toll样受体是一类负责信号传递的跨膜受体。可以识别病原微生物细胞壁成分,并启动细胞自身的抗感染免疫。呼吸道上皮细胞分泌抗菌肽在天然免疫防御微生物入侵方面起重要的作用,尤其β-防御素,体外实验显示其有很强的抗细菌、真菌、病毒作用,并且不产生获得性耐药性,在体内则参与抵抗微生物的早期宿主防御反应。本文首次通过卡介苗多糖核酸或卡介苗雾化吸入,研究对呼吸道炎症时大鼠活体内肺组织TLR2、TLR4、RBD-1、RBD-2的mRNA表达的影响,发现卡介苗多糖核酸或卡介苗雾化吸入能增强机体表达内源性TLR2、RBD-2的mRNA,协助治疗呼吸道感染,此结果为呼吸道炎症时用免疫调节剂提高机体表达内源性TLR2、RBD-2的mRNA,开辟抗感染治疗的新途径提供了理论基础。
张舒[7]（2006）在《人β-防御素-2转基因小鼠的建立及抗菌功能研究》文中研究表明目的：为开展人β-防御素-2（HBD-2）在整体动物水平上的功能研究，建立人β-防御素-2转基因小鼠，并探讨转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌作用。方法：用分子克隆方法构建了带CMV启动子的HBD-2全长cDNA真核重组表达质粒pCDNA3.1-HBD2，用显微注射技术将PCR扩增的带CMV启动子和BGH polyA尾的HBD-2基因片段导入小鼠雄原核中，PCR法检测外源基因在小鼠的整合，RT-PCR和免疫组化法检测HBD-2在小鼠组织的表达。常规组织切片，光镜观察转基因小鼠组织形态。并用金黄色葡萄球菌腹腔攻击转基因阳性小鼠观测全身情况和死亡数，并对转基因小鼠和野生小鼠组织匀浆液进行菌落计数。结果：DNA序列测定证明重组质粒插入HBD-2cDNA片段无误，PCR显示小鼠基因组中已整合人β-防御素-2基因，RT-PCR和免疫组化显示人β-防御素-2基因在转基因小鼠肝、肺、肾、肠道、睾丸、小脑等组织广泛表达。转基因小鼠未见明显组织病理损伤。腹腔攻击实验显示7只转基因小鼠4只存活，而野生小鼠10只全部死亡。金黄色葡萄球菌腹腔攻击转基因小鼠组织匀浆液菌落计数明显少于野生型小鼠。结论：人β-防御素-2基因已整合到小鼠基因组中，并广泛表达。此种转基因小鼠抗金色葡萄球菌感染能力显着增强。
朱玲[8]（2005）在《异鼠李素体内外抗肿瘤作用及其机制的研究》文中进行了进一步梳理目的: 癌症化疗是临床治疗癌症的重要方法,但大多数西药抗肿瘤药物对癌细胞和人体正常细胞的选择性差别不大,因而在应用过程中的不良反应广泛而且严重,加之各种肿瘤对药物的敏感性不同和抗肿瘤药易产生耐药性等,使癌症化疗的效应受到了很大的限制。近年来,植物来源的抗肿瘤药重新引起重视。植物来源的化合物不只对发现新药有巨大潜力,还可为设计更理想的新药提供独特的新的化学结构,后者更可被用为创制新药的先导化合物。异鼠李素（isorhamnetin,Iso）是一种已知的黄酮类化合物,在沙棘中含量较高,是沙棘中的主要单体之一,通常也作为标准品用于测定黄酮含量。异鼠李素和槲皮素同属黄酮类化合物,近年研究发现其有较好的抗心肌缺氧、缺血,缓解心绞痛,抗心律失常,抗氧自由基,降低血清胆固醇等多种心血管效应。不少研究组报道槲皮素具有良好抗肿瘤效应; 异鼠李素与槲皮素结构相似,但作为单体对肿瘤的抑制作用还未见国内外其他研究组的报道,因此本研究旨在进行体外试验探讨中药单体异鼠李素抗肿瘤作用、抗瘤谱,了解异鼠李素的适用范围。并对体外证明有效的瘤株,有针对性的进行体内试验,确证药物的体内抗瘤效应。针对异鼠李素抗瘤作用强的细胞株进一步研究其抗肿瘤机制,了解其对信号传导通路的影响等。本研究建立在植物来源的异鼠李素及黄酮抗肿瘤前期研究的基础上,并力图在基础理论上丰富和发展中药抗肿瘤的研究,也为异鼠李素的应用提供新的理论基础。为此
王轶[9]（2005）在《甘蓝型油菜“蜀杂九号”防御素基因全长cDNA的克隆与原核表达》文中提出植物防御素是一类广泛分布于植物种子的阳离子、低分子量的短肽。其能强烈抑制病原微生物的入侵,是植物先天性非特异免疫的重要组成部分。尤其是被认为能通过真菌细胞膜上特异受体而强烈抑制丝状真菌的生长。研究表明,其保守的含有8个Cys,而形成4个二硫键。因其与动物防御素同源而得名。 本实验根据GenBank数据库中登记的十字花科植物防御素基因序列,运用Primer5.0软件设计了两个引物5’-GCGGAATTCATGGCTAAGTTTGCTTCC-‘3和5’-CGCTCTAGATTAACATGGGAAATAACAGATAC-‘3,并为后插入到改造自Pharmacia公司的pGEX—2T克隆表达载体GTK中而加入了EcoRⅠ和XbaⅠ的酶切位点（粗体部分）。从正在萌发的甘蓝型油菜“蜀杂九号”的种子提取总RNA,反转录为cDNA。并以此为模板进行PCR扩增,成功地从甘蓝型油菜中克隆出长243bp编码80个氨基酸的防御素基因的cDNA序列。 将所得甘蓝型油菜防御素基因的cDNA片段插入到pGEX—2T表达载体GTK的EcoRⅠ和XbaⅠ多克隆位点之间。将重组原核表达质粒转化到E.coli BL21的感受态细胞中,获得了表达甘蓝型油菜防御素基因的重组子。在2×YTA培养基中,通过0.1mM的IPTG诱导,18℃培养2h,经SDS-PAGE分析,获得了与理论值相符合的34KD的融合蛋白。而且经Western-blot进一步检测,证明了融合蛋白的表达。 在融合蛋白的初步纯化中发现:不论是改变IPTG浓度还是降低培养温度,融合蛋白均以不溶性的包涵体形式存在。所以选择对细胞毒副作用小的0.1mM
王国兴[10]（2005）在《双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制》文中研究说明消化道中定植有大量菌群,消化道上皮细胞与这些菌群直接接触,是肠道粘膜免疫的第一道防线,其分泌的抗菌肽分子在维持肠道微生态平衡、抵抗病原菌感染中占有重要地位。人β-防御素-2（hBD-2）是一重要的抗菌肽分子,广泛表达于皮肤、呼吸道、消化道、泌尿生殖道等粘膜上皮细胞中,具有重要的抗感染功能。hBD-2具有诱导表达的特点,通常情况下肠道上皮细胞不表达hBD-2,但在受到致病因子刺激时,hBD-2的表达量迅速提高,进而发挥粘膜保护功能。 以往的研究显示病原菌如肠炎性沙门氏菌,侵袭性大肠杆菌等能够诱导人肠道上皮细胞hBD-2表达,但是益生菌与抗菌肽之间的关系还没有相关研究,而且hBD-2诱导表达的调控及其信号转导机制十分复杂,目前尚不完全清楚。双歧杆菌作为人体主要益生菌之一,参与了宿主的消化、营养、代谢、吸收、免疫及抗感染过程。因此通过探讨双歧杆菌与hBD-2表达之间的关系,寻找诱导hBD-2基因表达的有效刺激因子,不仅能够通过提高粘膜局部hBD-2浓度而达到杀灭病原菌的目的,而且有助于在分子水平上揭示机体抗感染免疫防御机制。 本项研究目的是检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分,进一步探讨其受体及其胞内信号传导通路。 首先,我们研究了双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分。厌氧培养长双歧杆菌,采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取方法获得双歧杆菌胞壁蛋白质成份,分别利用活菌,热灭活全菌,全
二、Enhancement of FALL-39 mRNA expression and antibacterial activity of human pulmonary gland epithelial cells induced by BCG（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Enhancement of FALL-39 mRNA expression and antibacterial activity of human pulmonary gland epithelial cells induced by BCG（论文提纲范文）
（2）中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ原核表达及其多克隆抗体的制备（论文提纲范文）
| 提要 |
| 前言 |
| 第一篇：文献综述 |
| 综述一 抗菌肽基因工程研究进展 |
| 综述二 鲎抗菌肽研究进展 |
| 第二篇：研究内容 |
| 实验一 中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ原核表达载体的构建及表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ原核表达产物的纯化及抑菌活性 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验三 中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ多克隆抗体的制备及其鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师及作者简介 |
| CURRICULLUM |
（3）蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 防御素的研究进展 |
| 1.1.1 防御素分子家族的发现简况 |
| 1.1.2 防御素的分类 |
| 1.1.3 防御素的生物合成 |
| 1.1.4 防御素的分子特征 |
| 1.1.5 防御素的分布 |
| 1.1.6 防御素的基因结构及表达调节 |
| 1.1.7 防御素的生物学活性 |
| 1.1.8 防御素的应用前景 |
| 1.1.9 今后防御素的研究方向 |
| 1.2 雌激素、孕激素及其受体和受体抑制剂 |
| 1.2.1 雌激素、孕激素来源 |
| 1.2.2 雌激素和孕激素的生理作用 |
| 1.2.3 雌激素受体 |
| 1.2.4 孕激素受体 |
| 1.2.5 雌激素和孕激素的抑制剂及抑制剂机理 |
| 1.3 本研究的目的、意义 |
| 2 实验一 蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）的组织表达 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物及组织 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.1.3 PCR 引物的设计及合成 |
| 2.1.4 蒙古绵羊雌性生殖道各组织总 RNA 的提取及检测 |
| 2.1.5 RT-PCR 反应 |
| 2.1.6 sBD-1 基因cDNA 的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 |
| 2.1.7 RT-PCR 产物cDNA 的序列测定 |
| 2.1.8 序列分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 蒙古绵羊雌性生殖道各组织总 RNA 的检测结果 |
| 2.2.2 蒙古绵羊雌性生殖道各组织 RT-PCR 扩增结果 |
| 2.2.3 蒙古绵羊输卵管组织PCR 产物的克隆、筛选及鉴定 |
| 2.2.4 蒙古绵羊输卵管组织PCR 产物的序列分析结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 β-防御素的分布范围 |
| 2.3.2 蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素的表达情况 |
| 2.4 小结 |
| 3 实验二 蒙古绵羊输卵管β-防御素（sBD-1）的表达定位 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物及其组织 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 |
| 3.1.3 输卵管sBD-1 RT-PCR 产物的合成、回收与核酸探针的合成 |
| 3.1.4 原位杂交 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 输卵管sBD-1 RT-PCR 产物的回收 |
| 3.2.2 输卵管原位杂交检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 β–防御素的定位 |
| 3.3.2 原位杂交方法 |
| 3.4 小结 |
| 4 实验三 蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养及特征鉴定 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 仪器设备 |
| 4.1.3 实验药品 |
| 4.1.4 输卵管上皮细胞培养方法的建立 |
| 4.1.5 细胞形态学鉴定 |
| 4.1.6 培养细胞的染色体核型分析 |
| 4.1.7 细胞免疫组化法鉴定 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 细胞培养结果 |
| 4.2.2 传代输卵管上皮细胞吉姆萨染色形态 |
| 4.2.3 染色体核型分析结果 |
| 4.2.4 免疫组化结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 上皮细胞的培养 |
| 4.3.2 上皮细胞的鉴定 |
| 4.4 小结 |
| 5 实验四 17-β-雌二醇和孕酮对培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的影响 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 实验材料处理同本论文4.1.1 |
| 5.1.2 实验材料 |
| 5.1.3 仪器及试剂 |
| 5.1.4 PCR 引物的设计及合成 |
| 5.1.5 实验设计 |
| 5.1.6 细胞总 RNA 的提取 |
| 5.1.7 荧光定量RT-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的定量方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 荧光定量RT-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达定量方法的确定 |
| 5.2.2 添加17-β-雌二醇对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 5.2.3 添加孕酮对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 5.2.4 模拟妊娠期、发情期处理结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 生理状态下雌激素、孕激素浓度的变化和实验中17-β-雌二醇、孕酮的浓度确定 |
| 5.3.2 17-β-雌二醇对sBD-1 表达的影响 |
| 5.3.3 孕酮对sBD-1 表达的影响 |
| 5.3.4 孕酮和17-β-雌二醇综合添加对防御素表达的影响 |
| 5.4 小结 |
| 6 实验五 17-β-雌二醇、孕酮二者拮抗剂对培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的影响 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 实验材料处理同本论文4.1.1 |
| 6.1.2 实验材料实验材料为蒙古绵羊输卵管上皮细胞的第一代传代细胞。处理方法同本论文4.1.4 |
| 6.1.3 仪器及试剂实验仪器及试剂同本论文5.1.3 |
| 6.1.4 PCR 引物的设计及合成 |
| 6.1.5 实验设计 |
| 6.1.6 细胞总RNA 的提取同本论文5.1.6 |
| 6.1.7 荧光定量RT-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的定量方法 |
| 6.1.8 荧光定量RT-PCR 同本论文5.1.7.2 和5.1.7.3 |
| 6.1.9 实验数据处理 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 添加17-β雌二醇拮抗剂他莫昔芬对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 6.2.2 添加孕酮拮抗剂米非司酮对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 雌激素受体、孕激素受体、他莫昔芬和米非司酮在本研究中的意义 |
| 6.3.2 添加17-β雌二醇拮抗剂他莫昔芬与防御素表达相关性 |
| 6.3.3 添加孕酮拮抗剂米非司酮与防御素表达相关性 |
| 6.4 小结 |
| 7 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（4）抗菌肽在动物乳腺中的表达及对乳房炎主要病原菌的抑制效应研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 奶牛乳房炎研究进展 |
| 第二章 抗菌肽的研究进展及其应用前景 |
| 第三章 基因治疗中的逆转录病毒载体 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 牛乳铁蛋白肽、天蚕素 A-蛙皮素杂合肽、天蚕素B 和牛气管抗菌肽基因的设计、拼接和克隆 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 天蚕素B 基因的合成与序列测定 |
| 2.2 牛气管抗菌肽基因的合成与序列测定 |
| 2.3 天蚕素A-蛙皮素杂合肽基因的合成与序列测定 |
| 2.4 牛乳铁蛋白肽基因的合成与序列测定 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 抗菌肽乳腺特异性表达载体的构建及其在动物乳腺中的瞬时表达 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同抗菌肽乳腺特异性表达载体的构建与鉴定 |
| 2.2 不同抗菌肽基因在山羊乳腺中的表达与活性检测 |
| 2.3 羊奶中表达产物抑菌活性比较 |
| 2.4 部分抗菌肽基因在奶牛乳腺中的表达与活性检测 |
| 2.5 抗菌肽在羊奶和牛奶中抑菌活性比较 |
| 2.6 表达产物的Tricine-SDS-PAGE 电泳检测 |
| 2.7 部分表达产物的RP-HPLC检测 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 抗菌肽逆转录病毒载体的构建、重组逆转录病毒的包装及其在奶牛乳腺中的稳定表达 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 逆转录病毒载体pLN-bCP-LfcinB-CE-MA(R)的构建与鉴定 |
| 2.2 逆转录病毒载体pLN-bCP-cecB-bTAP(R)的构建与鉴定 |
| 2.3 G418 对PA317 细胞最小致死剂量的测定 |
| 2.4 转染重组质粒阳性的PA317 细胞克隆的形成 |
| 2.5 PCR 检测细胞克隆株基因组中重组载体的整合 |
| 2.6 重组病毒感染滴度测定 |
| 2.7 重组病毒感染奶牛乳腺后表达产物抑菌活性检测结果 |
| 2.8 重组病毒感染奶牛乳腺后表达产物的Tricine-SDS-PAGE 检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 临床型乳房炎主要病原菌的分离、鉴定及重组抗菌肽对其抑菌活性观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 细菌分离鉴定结果 |
| 2.2 病原菌的敏感性 |
| 2.3 重组抗菌肽对乳房炎主要病原菌的抑菌试验 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的主要论文 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师及作者简介 |
| CURRICULUM VITAE |
（5）兔中性粒细胞防御素对A549细胞IL-8基因表达的影响（论文提纲范文）
| 一：兔中性粒细胞防御素的纯化鉴定 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 二：兔中性粒细胞防御素对A549细胞IL-8基因表达的影响及作用机制探讨 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）卡介苗多糖核酸或卡介苗吸入对呼吸道Toll样受体、β-防御素的mRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一部分 制作大鼠支气管肺炎模型 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 大鼠支气管肺炎模型的制作方法 |
| 1.4.2 支气管肺泡灌洗(BAL)方法 |
| 1.4.3 统计方法 |
| 1.5 结果 |
| 1.5.1 LPS 对大鼠临床表现的影响 |
| 1.5.2 LPS 对大鼠外周血白细胞计数及分类的影响 |
| 1.5.3 LPS 对大鼠BALF 白细胞计数及分类的影响 |
| 1.5.4 LPS 对大鼠支气管及肺组织病理表现的影响 |
| 1.6 讨论 |
| 第二部分 卡介苗多糖核酸样受体MRNA 表达的影响 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 方法 |
| 2.4.1 卡介苗多糖核酸、卡介苗雾化吸入的分组、吸入方法和标本留取 |
| 2.4.2 大鼠肺组织TLR2、TLR4 mRNA 水平的测定 |
| 2.4.3 统计方法 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 吸入卡介苗多糖核酸、卡介苗对肺炎大鼠肺组织的TLR2表达的影响 |
| 2.5.2 吸入卡介苗多糖核酸、卡介苗对肺炎大鼠肺组织的TLR4表达的影响 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 LPS 对肺组织TLR2 /4 m RNA 表达的调节作用 |
| 2.6.2 卡介苗或卡介苗多糖核酸对肺组织TLR2用 |
| 第三部分卡介苗多糖核酸-2 的MRNA 表达的影响 |
| 3.1 实验动物:同第二部分 |
| 3.2 主要仪器:同第二部分 |
| 3.3 主要试剂:同第二部分 |
| 3.4 方法 |
| 3.4.1 卡介苗多糖核酸、卡介苗雾化吸入的分组、吸入方法和标本留取 |
| 3.4.2 大鼠肺组织RBD-1、RBD-2mRNA 水平的测定 |
| 3.4.3 统计方法 |
| 3.5 结果 |
| 3.5.1 肺组织的RBD-1、RBD-2mRNA 表达的变化 |
| 3.5.2 模型组大鼠吸入卡介苗多糖核酸、卡介苗、生理盐水对临床表现的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 3.6.1 吸入卡介苗、卡介苗多糖核酸对肺炎大鼠肺组织β-防御素-1、β防御素-2 的mRNA 表达的影响 |
| 3.6.2 吸入卡介苗、卡介苗多糖核酸对肺炎大鼠临床表现的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:人Β-防御素与下呼吸道粘膜免疫 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
（7）人β-防御素-2转基因小鼠的建立及抗菌功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人β-防御素-2重组质粒构建及转基因片段制备 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 人-β防御素-2转基因小鼠的建立及鉴定 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 人-β防御素-2转基因小鼠抗菌功能研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述之一 |
| 文献综述之二 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）异鼠李素体内外抗肿瘤作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 异鼠李素体外抗肿瘤作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 异鼠李素体内抗肿瘤作用的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 异鼠李素抗肿瘤作用机制的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 异鼠李素对于细胞因子IL-6 的作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述一:Bcl-2 家族蛋白与细胞凋亡、肿瘤之间的关系 |
| 综述二:中药对肿瘤细胞凋亡的研究进展 |
| 学习期间的研究工作情况 |
| 致谢 |
| 声明 |
（9）甘蓝型油菜“蜀杂九号”防御素基因全长cDNA的克隆与原核表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文献综述抗菌肽基因的表达调控研究 |
| 1 哺乳动物抗菌肽基因的表达调控 |
| 1.1 哺乳动物的 Toll通路 |
| 1.2 TNFR通路 |
| 1.3 人体抗菌肽基因的表达调控 |
| 1.3.1 α防御素的基因表达调控 |
| 1.3.2 β防御素(hBD)的基因表达调控 |
| 1.3.2.1 hBD-1 |
| 1.3.2.2 hBD-2 |
| 1.3.3 小结 |
| 1.3.4 LL-37的表达调控 |
| 1.4 其他动物抗菌肽基因的表达调控 |
| 2 昆虫抗菌肽基因的表达调控 |
| 2.1 Toll信号途径调控机理 |
| 2.2 Imd信号途径调控机理 |
| 2.3 果蝇与哺乳动物先天兔疫应答信号途径比较 |
| 3 植物抗菌肽基因的表达调控 |
| 4 结束语 |
| 前言 |
| 试验部分 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂配置 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 蜀杂9号油菜种子总 RNA的提取 |
| 1.3.2 总 RNA质量检测 |
| 1.3.3 第一链cDNA的合成 |
| 1.3.4 甘蓝型油菜防御素基因的扩增 |
| 1.3.5 PCR产物的回收 |
| 1.3.6 PCR产物的克隆(表达载体的构建) |
| 1.3.7 DNA片段分析 |
| 1.3.8 融合蛋白的诱导表达 |
| 1.3.9 Western-blot检测 |
| 1.3.10 融合蛋白的纯化 |
| 2 结果 |
| 2.1 种子总RNA的提取 |
| 2.2 甘蓝型油菜防御素基因的扩增 |
| 2.3 PCR产物的克隆(表达载体的构建) |
| 2.4 甘蓝型油菜防御素基因全长cDNA的序列及推导蛋白质序列 |
| 2.5 甘蓝型油菜防御素基因全长cDNA的核酸序列分析 |
| 2.6 甘蓝型油菜防御素基因cDNA的推导蛋白质序列与结构分析 |
| 2.6.1 序列分析 |
| 2.6.2 信号肽序列分析 |
| 2.6.3 二硫键预测 |
| 2.6.4 蛋白质二级结构分析 |
| 2.6.5 防御素三级结构预测 |
| 2.7 融合蛋白的 SDS-PAGE检测 |
| 2.8 Westem-blot鉴定 |
| 2.9 融合蛋白纯化 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 在读硕士期间发表论文情况 |
| 声明 |
| 致谢 |
（10）双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞hBD-2基因表达 |
| 一 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第二部分 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞hBD-2基因表达调控及其信号转导机制研究 |
| 一 材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第三部分 TLR-2受体信号通路在双歧杆菌胞壁蛋白诱导肠腺上皮细胞hBD-2表达中的作用 |
| 一 材料及方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第四部分 人抗菌肽hBD-2大肠杆菌原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 |
| 一 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一：胃肠道抗菌肽研究进展 |
| 文献综述二：Toll样受体及其信号转导 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
| 声明 |
四、Enhancement of FALL-39 mRNA expression and antibacterial activity of human pulmonary gland epithelial cells induced by BCG（论文参考文献）
- [1]CpG ODN通过活化p38 MAPK上调A549细胞β防御素-2的表达[J]. 李明,陈伟强,李岩,罗少洪,简玲敏. 广东药学院学报, 2010(02)
- [2]中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ原核表达及其多克隆抗体的制备[D]. 韩艳. 吉林大学, 2007(03)
- [3]蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）表达的研究[D]. 唐博. 内蒙古农业大学, 2007(03)
- [4]抗菌肽在动物乳腺中的表达及对乳房炎主要病原菌的抑制效应研究[D]. 张锦霞. 吉林大学, 2006(10)
- [5]兔中性粒细胞防御素对A549细胞IL-8基因表达的影响[D]. 马懿. 四川大学, 2006(03)
- [6]卡介苗多糖核酸或卡介苗吸入对呼吸道Toll样受体、β-防御素的mRNA表达的影响[D]. 侯松萍. 吉林大学, 2006(10)
- [7]人β-防御素-2转基因小鼠的建立及抗菌功能研究[D]. 张舒. 四川大学, 2006(03)
- [8]异鼠李素体内外抗肿瘤作用及其机制的研究[D]. 朱玲. 四川大学, 2005(06)
- [9]甘蓝型油菜“蜀杂九号”防御素基因全长cDNA的克隆与原核表达[D]. 王轶. 四川大学, 2005(02)
- [10]双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制[D]. 王国兴. 四川大学, 2005(01)