一、高效液相色谱法定量测定玉米中腐马素毒素(Fumonisins)（论文文献综述）
卞燕南[1]（2016）在《基于单分子技术的伏马菌素均相免疫分析方法研究》文中研究表明伏马菌素（Fumonisin）是一种主要由串珠镰刀菌产生的霉菌毒素,广泛存在于世界各地的玉米和玉米为原料的产品中。目前已发现的伏马菌素有11种,其中伏马菌素B1（Fumonisin B1,FB1）是其主要组分,占伏马菌素总量的70%-80%。FB1是伏马菌素中毒性最强的,也是造成伏马菌素毒性作用的主要原因。它对人、动物的健康具有很大的危害,属于2B类致癌物质。因此,有必要发展灵敏、快速的伏马菌素检测方法。由于酶联免疫分析具有高灵敏度高选择性的特点,它被广泛用于食品中伏马菌素的监测。然而,它是一种非均相免疫分析,比较费时费力。与非均相免疫分析相比,均相免疫分析能够在均一的反应混合物中直接测定待分析物。由于这样的方法分析时间短,近年来得到了快速的发展。本文将单分子检测方法与均相免疫分析方法相结合,建立了玉米中FB1的快速检测方法。本论文的研究工作主要包括:1.采用均相免疫分析模型,以荧光染料标记伏马菌素作为探针,基于荧光相关光谱（Fluorescence correlation spectroscopy,FCS）方法,建立了一种灵敏的FB1单分子检测方法。荧光探针和其免疫复合物的粒径大小不同,它们在检测微区内的特征扩散时间不同。通过荧光相关光谱方法可以得到检测微区内结合到抗体的上的探针比例Y,最终获得FB1浓度与结合到抗体的上的探针比例Y之间的相关性。我们采用Alexa 488标记伏马菌素B1来合成探针,优化了免疫分析的实验条件。在优化的实验条件下,伏马菌素B1的线性范围为1.0μg/L到25.0μg/L,检测限为1.0μg/L。该方法成功地检测了加标玉米样品和天然玉米样品中的FB1,得到的结果与ELISA法的实验结果相当。2.将基于金纳米粒子的共振光散射相关光谱（Resonance light scattering correlation spectroscopy,RLSCS）方法和均相免疫分析方法结合,构建了RLSCS法用于检测FB1。鉴于金纳米粒子具有很强的散射信号,以金纳米粒子标记FB1作为探针。当溶液中的抗体与探针发生免疫反应而结合到探针表面时,金纳米粒子的粒径变大,导致溶液中金纳米粒子的特征扩散时间变长,能够被共振光散射相关光谱方法灵敏地检测到。我们首先将FB1通过共价键的形式连接到金纳米粒子的表面,形成金纳米粒子探针。然后系统地优化了实验条件。在优化的条件下,FB1的线性范围为10.0μg/L到200.0μg/L,检测下限为10.0μg/L。该方法成功地检测了加标玉米样品中的FB1,得到的结果与ELISA法的实验结果吻合。实验结果表明我们发展用于伏马菌素B1定量的荧光相关光谱和共振光散射相关光谱方法具有简单、快速和高灵敏的特点,该方法能够用于监测食品中有害化学物质。
李岩松[2]（2011）在《玉米中伏马菌素免疫学快速筛检方法研究》文中研究说明伏马菌素（Fumonisins）主要是由串珠镰刀菌、多育镰刀菌等产生的一类真菌毒素,至今已经发现的伏马菌素及其衍生物已达20余种,其中最为主要的是B族伏马菌素中的伏马菌素B1（FB1）、伏马菌素B2（FB2）和伏马菌素B3（FB3）。FB1主要污染的食品（或饲料）是玉米及其制品,且广泛发生于世界各地。伏马菌素属于2B类致癌物质,很多动物实验已经证明其具有致癌性,有调查显示伏马菌素与人类的食管癌具有相关性。由于伏马菌素对人和动物健康的严重危害性,其在食品卫生领域中越来越受到人们的重视。目前,伏马菌素的检测方法主要有液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、免疫学检测法等。由于仪器分析方法样品处理相对复杂、成本高,限制了应用的推广。而免疫学方法具有灵敏度高、特异性好、样品处理简单、成本较低等优点,尤其适合大量样品的快速筛检。本实验在制备伏马菌素完全抗原及单克隆抗体的基础上,建立了玉米样品中伏马菌素的间接竞争ELISA（ic-ELISA）、胶体金免疫层析（GICA）和间接竞争化学发光酶免疫测定（ic-CLEIA）快速免疫学筛检方法,以期为进一步研究伏马菌素快速检测试剂产品奠定基础,满足实际检测的需求。本文采用戊二醛法将小分子半抗原FB1分别与卵清蛋白（OVA）、牛血清蛋白（BSA）偶联制备检测抗原和免疫抗原,SDS-PAGE电泳及紫外扫描法鉴定偶联成功。常规免疫和快速免疫两种方式免疫BALB/c鼠,常规方法融合并筛选杂交瘤细胞。获得3株稳定分泌伏马菌素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并优选了其中的4B3细胞株,小鼠腹水诱生法制备单克隆抗体。该单克隆抗体为IgG1亚类,辛酸-硫酸铵法纯化后单克隆抗体浓度为2.19 mg/mL,纯度为85.95%。抗体亲和常数为5.21×109 L/mol、效价为1:2.56×106。4B3抗体与FB2、FB3的交叉反应率分别为198%和59%;与脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T2毒素、桔青霉素、赭曲霉素A、黄曲霉素B1的交叉反应率均小于10%。利用该单克隆抗体建立了伏马菌素间接竞争ELISA检测方法,优化后的检测条件为:抗原包被浓度为0.5μg/mL,包被条件为37℃2 h;抗体工作浓度为1:30 000; 37℃竞争反应45 min;酶标二抗工作浓度1:5 000,作用时间37℃60 min;底物作用时间37℃避光25 min;间接竞争ELISA方法的线性回归方程为:y = -41.499x + 89.715,相关系数（R2）为0.981,线性范围为1.56 ng/mL～50 ng/mL,最低检出限为1.30 ng/mL;玉米加标回收实验结果表明,该方法总的平均回收率为（94.73±4.54）%、批内变异系数为8.31%、批间变异系数为8.54%;对14个玉米实际样品进行了检测,5个样品未检出FB1、6个样品中FB1的含量小于1 mg/kg、3个样品中FB1的含量在1 mg/kg～2 mg/kg之间。柠檬酸三钠还原法制备20 nm的胶体金溶液,与伏马菌素单克隆抗体合成金标探针,组装了简易胶体金免疫层析试纸条,优化了试纸条各项参数,试纸条裸眼可视检出限为2.5 ng/mL、最佳判定浓度为30 ng/mL,试纸条稳定性可达6个月以上。加标样品测定结果显示,甲醇:水（70:30,v/v）提取的玉米样品,可直接稀释5倍后上样检测,检测结果与标准品曲线相符。14个玉米样品测定结果显示,3个样品中伏马菌素浓度不低于0.75 mg/kg;10个样品中伏马菌素含量小于0.25 mg/kg;1个样品中伏马菌素浓度在0.25 mg/kg～0.75 mg/kg之间。利用该单克隆抗体建立了伏马菌素间接竞争化学发光酶免疫检测法,优化后的检测条件为:包被抗原25 ng/mL,4℃过夜;抗体使用浓度为1:100 000,37℃45 min;酶标二抗工作浓度1:10 000,37℃60 min;现配化学发光底物溶液,室温避光10 min。标准曲线方程为:logit （y） = 1.079 5 - 2.299 8 log （x）,相关系数（r）为-0.998 2,线性范围为0.32 ng/mL～25 ng/mL,最低检出限为0.32 ng/mL。玉米加标回收实验表明,该方法总的平均回收率为（100.15±9.55）%、批内变异系数为7.90%、批间变异系数为8.12%。对14个玉米实际样品进行了检测,其中5个样品未检出FB1、6个样品中FB1的含量小于1 mg/kg、3个样品中FB1的含量在1 mg/kg～2 mg/kg之间。利用LC-MS/MS检测方法,乙腈/水提取、伏马菌素TC-F120专用净化柱净化处理样品,对玉米样品中的伏马菌素进行了测定并与前述建立的免疫学方法进行了比较分析。LC-MS/MS方法验证结果表明,免疫学检测方法分析结果与LC-MS/MS分析结果相符。所建立的胶体金免疫层析法、间接竞争ELISA检测方法和化学发光酶免疫检测法可以用于玉米样品中伏马菌素的快速筛检。
赵辉[3]（2007）在《番茄和苹果中14种有机氯和拟除虫菊酯类农药残留量的毛细管气相色谱检测》文中研究说明为了快速准确地检测水果和蔬菜中的农药残留情况,采用气相色谱分析技术,研究了能同时测定番茄、苹果中氯硝胺、六氯苯、百菌清、三唑酮、丁草胺、狄氏剂、OP′-DDT、异狄氏剂、乙酯杀螨醇、胺菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等14种有机氯和拟除虫菊酯类农药的多残留分析方法。结果表明,供试的14种农药在番茄和苹果中的分离状况良好,能在30min内出峰完毕,其添加回收率在70%￣113%之间,变异系数在0.3%￣13%之间,最小检出限在0.0011￣0.0085mg·kg-1之间。
赵辉,闫实[4]（2005）在《黄瓜番茄中氨基甲酸酯类农药残留量的高效液相色谱测定》文中指出研究了采用高效液相色谱（配荧光检测器和柱后衍生系统）同时测定黄瓜、番茄中三羟基克百威、速灭威、残杀威、克百威、甲奈威、异丙威、抗蚜威、仲丁威等8种氨基甲酸酯类农药的多残留分析方法,对每种农药均做3种不同浓度0.05、0.1、0.5 mg.kg-1的添加回收率试验。结果表明,该方法对于8种农药的回收率为70%105%,变异系数在10%之内,最小检出限为0.001 00.007 5 mg.kg-1。
白清云,廖楠,沈跃,张克强[5]（2002）在《高效液相色谱法定量测定玉米中腐马素毒素（Fumonisins）》文中指出本研究介绍了一种简单、快速分析测定玉米中腐马素毒素（fumonisins）残留的方法。样品用甲醇+水混合液提取,对提取液用小型强酸型阴离子固相萃取柱（SAX）纯化。纯化后的样品经化学衍生处理后,用反相高效液相色谱分离,并以荧光分光光度检测器定量测定。该方法对于添加已知量、添加水平在0.3—2mg·kg-1腐马素的玉米样的测定证实:其平均回收率在80%以上,而该方法对于腐马素三种同系物的最低检出限分别为0.1—0.05mg·kg-1。此外,本方法也对有限数目的大米、大麦、小米、高粱样中存在腐马素毒素污染的可能性进行了验证,结论是否定的。
二、高效液相色谱法定量测定玉米中腐马素毒素(Fumonisins)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高效液相色谱法定量测定玉米中腐马素毒素(Fumonisins)（论文提纲范文）
（1）基于单分子技术的伏马菌素均相免疫分析方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 伏马菌素 |
| 1.1.1 伏马菌素概述 |
| 1.1.2 伏马菌素的结构与性质 |
| 1.1.3 伏马菌素的危害 |
| 1.1.4 伏马菌素的限量标准 |
| 1.1.5 样品的前处理 |
| 1.1.6 伏马菌素的检测方法 |
| 1.2 免疫分析 |
| 1.2.1 免疫分析概述 |
| 1.2.2 免疫分析的分类 |
| 1.2.3 免疫分析的发展与应用 |
| 1.3 单分子检测技术 |
| 1.3.1 荧光相关光谱 |
| 1.3.2 共振光散射相关光谱 |
| 1.4 本文的选题思路与研究内容 |
| 第二章 基于荧光相关光谱的伏马菌素均相免疫分析方法研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 |
| 2.2.2 荧光相关光谱装置 |
| 2.2.3 探针的合成、纯化与表征 |
| 2.2.4 样品的制备 |
| 2.2.5 荧光相关光谱法测定均相免疫反应 |
| 2.2.6 酶联免疫吸附法检测伏马菌素 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 基于荧光相关光谱的均相免疫分析原理 |
| 2.3.2 探针的合成、纯化与表征 |
| 2.3.3 免疫分析条件的优化 |
| 2.3.4 工作曲线的绘制及优化 |
| 2.3.5 玉米中伏马菌素的定量测定 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 基于共振光散射相关光谱的伏马菌素均相免疫分析方法研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂及仪器 |
| 3.2.2 共振光散射相关光谱装置 |
| 3.2.3 金纳米粒子的制备 |
| 3.2.4 抗原抗体修饰金纳米粒子的制备 |
| 3.2.5 样品的制备 |
| 3.2.6 共振光散射相关光谱法测定均相免疫反应 |
| 3.2.7 酶联免疫吸附法检测伏马菌素 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 基于共振光散射相关光谱的均相免疫分析原理 |
| 3.3.2 金纳米粒子的合成、修饰与表征 |
| 3.3.3 免疫反应时间与免疫复合物的稳定性 |
| 3.3.4 免疫分析条件优化 |
| 3.3.5 工作曲线的绘制 |
| 3.3.6 玉米样品中伏马菌素含量的测定 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 全文总结与展望 |
| 4.1 全文主要内容和结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 符号与标记 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
（2）玉米中伏马菌素免疫学快速筛检方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 伏马菌素与食品安全 |
| 1.1 伏马菌素的结构与性质 |
| 1.2 伏马菌素的产生条件 |
| 1.3 伏马菌素的毒性及危害 |
| 1.4 伏马菌素的代谢 |
| 1.5 伏马菌素的污染状况 |
| 1.6 伏马菌素的管理 |
| 1.7 伏马菌素的防控 |
| 1.8 展望 |
| 第2章 伏马菌素检测研究进展 |
| 2.1 薄层色谱法 |
| 2.2 气相色谱法及气相色谱-质谱联用法 |
| 2.3 高效液相色谱法 |
| 2.4 液相色谱-质谱联用法 |
| 2.5 毛细管区带电泳法 |
| 2.6 免疫学方法 |
| 2.7 样品的前处理 |
| 第3章 真菌毒素免疫检测研究进展 |
| 3.1 酶联免疫吸附检测 |
| 3.2 化学发光酶免疫分析 |
| 3.3 胶体金免疫层析 |
| 3.4 电化学免疫分析 |
| 3.5 生物传感器 |
| 3.6 荧光偏振免疫分析 |
| 3.7 生物芯片 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 伏马菌素单克隆抗体的制备 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 伏马菌素间接竞争ELISA 检测方法的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 伏马菌素胶体金免疫层析试纸条的制备 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 伏马菌素化学发光酶免疫检测方法的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 伏马菌素液相色谱-质谱串联检测方法的验证分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介及作者简介 |
| 在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）番茄和苹果中14种有机氯和拟除虫菊酯类农药残留量的毛细管气相色谱检测（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试剂与材料 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 材料 |
| 1.3 农药标准品 |
| 1.4 气相色谱测定条件 |
| 1.5 分析方法 |
| 1.5.1 样品制备 |
| 1.5.2 样品提取 |
| 1.5.3 样品净化 |
| 1.5.4 色谱分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 色谱条件的选择 |
| 2.2 待测组分的分离情况 |
| 2.3 添加回收率 |
| 2.4 最小检出限 |
| 3 结论 |
（4）黄瓜番茄中氨基甲酸酯类农药残留量的高效液相色谱测定（论文提纲范文）
| 1 试验部分 |
| 1.1 仪器与试验装置 |
| 1.1.1 高效液相色谱仪组合 |
| 1.1.2 其他试验装置 |
| 1.2 主要试剂与材料 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 材料 |
| 1.3 柱后衍生试剂及配制 |
| 1.3.1 柱后衍生试剂 |
| 1.3.2 衍生液的配置 |
| 1.4 标准物质 |
| 1.5 液相色谱测定条件 |
| 2 分析方法 |
| 2.1 样品制备 |
| 2.2 样品提取 |
| 2.3 样品净化 |
| 2.4 色谱分析 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 色谱条件的选择 |
| 3.2 所测组分的分离情况 |
| 3.3 添加回收率试验 |
| 3.4 最小检出限 |
| 4 结论 |
四、高效液相色谱法定量测定玉米中腐马素毒素(Fumonisins)（论文参考文献）
- [1]基于单分子技术的伏马菌素均相免疫分析方法研究[D]. 卞燕南. 上海交通大学, 2016(03)
- [2]玉米中伏马菌素免疫学快速筛检方法研究[D]. 李岩松. 吉林大学, 2011(05)
- [3]番茄和苹果中14种有机氯和拟除虫菊酯类农药残留量的毛细管气相色谱检测[J]. 赵辉. 农业环境科学学报, 2007(02)
- [4]黄瓜番茄中氨基甲酸酯类农药残留量的高效液相色谱测定[J]. 赵辉,闫实. 农业环境科学学报, 2005(S1)
- [5]高效液相色谱法定量测定玉米中腐马素毒素（Fumonisins）[J]. 白清云,廖楠,沈跃,张克强. 农业环境科学学报, 2002(06)