一、转化生长因子β1在糖尿病中的异常及临床意义（论文文献综述）
李晓文[1]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制》文中提出研究背景糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖状态下出现的以心脏结构和功能异常为主要特征的病理改变,是糖尿病相关心脏并发症之一。糖心平胶囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治疗和改善糖尿病心脏病的中药制剂,但其机制仍不十分明确。本研究基于北京市科委课题“十病十药研发-治疗糖尿病合并冠心病新药糖心平胶囊成药性研究”,整合网络药理学和动物实验验证的研究方法,挖掘和验证TXPC药效及机制。研究目的通过网络药理学分析结合动物实验验证的研究方法挖掘并评价TXPC对DCM的治疗作用及机制探究。研究方法1、方法一:本研究通过TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中药材化学信息数据库挖掘TXPC组方中的活性成分化合物;通过Pubchem及Swiss Target Prediction平台预测筛选出组方作用靶点;通过Cytoscape软件构建TXPC药物-成分-靶点网络,利用Network Analyze插件分析筛选出TXPC组方中的核心成分;通过OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶点数据库构建DCM靶点合集;通过R Studio软件映射出TXPC靶点及DCM靶点交集;利用String在线蛋白功能分析网站构建TXPC-DCM-靶点网络,并导入Cytoscape软件进行可视化,构建PPI网络,通过Network Analyze分析筛选出PPI网络的核心靶点;通过MCODE插件对PPI网络进行模块分析;最后通过Matescape在线富集分析平台对PPI网络进行GO及KEGG分析,得到核心靶点的生物过程（BP）、分子功能（MF）、细胞组成（CC）及富集通路分析结果。2、方法二:本实验采用高脂饮食喂养联合小剂量STZ腹腔注射的方法制备DCM大鼠模型。在高脂饮食喂养4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用随机数字法将高脂喂养大鼠分为模型组（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低剂量（TXPD）组及二甲双胍组（Met）,正常饮食组为正常对照组（Control）。分组后连续给药6周,正常对照组和模型对照组采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高剂量组分别使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC药粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲双胍组采用每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液1ml/100g灌胃。给药时于第2、4、6周测大鼠空腹血糖;给药结束后,生化测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,计算HOMA-IR 值;ELISA 检测大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通过心脏病理切片观察心肌组织损伤情况,以明确TXPC对DCM的治疗作用;通过心脏超声检查评估心脏功能,利用舌下注射垂体后叶加压素制备大鼠急性心肌缺血模型,观察TXPC治疗后大鼠心电图ST-T段位移;进一步组织学检测DCM大鼠心肌组织 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印迹法检测大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA转录水平,以探究TXPC药效机制。研究结果1、方法一结果:糖心平组方中活性有效成分共107个;核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到对应靶点192个,关键靶点主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通过模块分析共聚类出4个功能模块,其中模块1和模块2所包含靶点数目较多,对糖心平胶囊对糖尿病心肌病的整体治疗效果具有较强的代表性;共富集到生物过程961个;分子功能75个;细胞组成60个;信号通路218条,能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、内分泌抵抗等途径发挥对DCM的治疗作用。2、方法二结果:①TXPC能够改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平,减轻心肌组织中的脂质沉积,发挥调节糖脂代谢得作用;②TXPC能够降低心肌损伤指标CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纤维断裂、损伤等,可能通过降低炎症水平,发挥心肌保护效应;③TXPC能够降低血清ET-I及TXB2,同时升高6-KPG水平,调节血管内皮细胞功能,预防心肌微血管病变;④TXPC能够降低血清MDA水平,缓解氧化应激损伤;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,维持心脏结构及形态的稳定,从而发挥心肌保护的作用;⑥TXPC能抵抗加压素所引起的ST-T抬高,提高心肌对急性心肌缺血的抵抗能力,从而发挥心脏保护的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促进GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA转录水平的表达,通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路,调节DCM大鼠能量代谢;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同时降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表达及NF-κBmRNA转录,通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路,发挥抑制炎症的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表达水平,同时降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号途径抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA转录表达,发挥抗心肌细胞损伤的作用;TXPC能促进PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表达,同时能促进PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的转录水平的提高,提示TXPC对DCM治疗效应的发挥,与PI3K/AKT通路有关。研究结论1、网络药理学分析结果显示,TXPC能通过PI3K/AKT信号通路,发挥对DCM的治疗作用;2、TXPC能调节糖脂代谢,改善炎症,降低氧化应激水平,发挥血管内皮细胞保护的作用;保护心功能、抗心肌缺血,具有心脏保护的作用;3、TXPC药效的发挥与PI3K/AKT信号通路有关,通过激活PI3K/AKT信号通路,从PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途径发挥对DCM的治疗作用。
鲁齐林[2]（2020）在《高糖伴腰椎管狭窄黄韧带肥厚的炎性机制及姜黄素的干预效应研究》文中研究表明背景整体观是祖国医学基本哲学观,整体观哲学强调人是有机的整体,机体整体与局部在生理与病理中都存在相互联系及影响。近年来2型糖尿病与退行性腰椎管狭窄症之间的关系研究成为了现代医学的热门领域。祖国医学在早期亦介绍此全身影响性疾病消渴对局部腰痹病存在影响,并提示两者的媒介因素可能是血瘀。现代炎症反应概念是祖国医学血瘀内涵的重要部分之一,其也是结缔组织纤维化的重要环节。本课题在中医整体观理论指导下,通过现代实验技术探究全身性代谢性疾病2型糖尿病（属于消渴范畴）对脊柱局部常见的退行性腰椎管狭窄（属于腰痹病范畴）黄韧带肥厚的具体作用机制及中药在其防治方面的潜在价值研究。目的在中医整体观指导下,通过回顾性分析,探究全身性代谢性疾病2型糖尿病（属于消渴范畴）对局部退行性腰椎管狭窄（属于腰痹病范畴）患者中椎管内黄韧带等重要参数的影响;通过人体黄韧带组织检测及病理分析、体外实验研究,探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及其相关的促纤维化炎症介质在黄韧带中含量、对应黄韧带病理学改变以及MIF对黄韧带效应细胞的促炎性机理,阐明血瘀理论概念下的炎症反应在两者之间的关系;根据“从瘀而治”理论,探讨活血化瘀中药姜黄有效成分姜黄素对MIF作用于成纤维细胞的干预效应。方法第一部分:在中医整体观指导下,回顾性分析中国人民解放军中部战区总医院3年来（2016年1月1日-2019年1月1日）诊断为退变性腰椎管狭窄症住院病人。在双盲前提下测量并对比合并2型糖尿病（DM+）与非合并2型糖尿病（DM-）两组人群之间在黄韧带厚度、下关节突间距、椎管有效腔隙矢状径方面的情况,研究两组人群之间是否存在差异性。第二部分:前瞻性设计:在2018年8月27日-2019年5月29日,结合诊断、纳入、排除标准,录入湖北六七二中西医结合骨科医院所有脊柱外科40例退行性腰椎管狭窄症手术患者。根据合并2型糖尿病与否分为DM+组和DM-组。40例患者中合并2型糖尿病20例（DM+组）,其中男性8例,女性12例,平均年龄61.55±2.41岁,BMI:25.62±0.785,该组黄韧带来源L4/L5水平14例,L5/S1水平4例,L3/L4水平2例;非糖尿病患者20例（DM-组）,其中男性11例,女性9例,平均年龄58.85±3.78岁,BMI:23.60±0.643,该组黄韧带来源L4/L5水平15例,L5/S1水平3例,L3/L4水平2例。术前根据Jong-Beom Park黄韧带测量方法在腰椎MRI水平面上测量手术节段黄韧带厚度。术中40例黄韧带样本完整取出后按左右侧分为a、b两份（a份干冰盒收集后冻存、b份予以甲醛固定）,a份采用ELISA技术检测MIF及相关促纤维化炎症介质（TGF-β1、IL-1β、IL-6、TNF-αMMP-13）含量;b份采用Masson染色及IHC染色后Image-Pro Plus 6.0软件对图片进行量化。运用影像、生化、统计方法来对比两组样本之间的差异。第三部分:采用NIH3T3细胞进行常规方法复苏、培养、传代（实验用3-5代）进行体外细胞实验。1.正常（5mM葡萄糖）与高糖（25mM葡萄糖）浓度刺激NIH3T3细胞48小时,Western Blot检测MIF的表达差异及镜下观察细胞增殖情况。2.引入外源性MIF（重组鼠巨噬细胞移动抑制因子,rmMIF）,按浓度设置为N正常浓度对照组（2 ng/ml）、L低浓度组（4 ng/ml）、M中浓度组（10ng/ml）、H高浓度组（50 ng/ml）刺激NIH3T3细胞进行研究:（1）48h时间点光镜下观察比较不同浓度rmMIF对NIH3T3细胞增殖生长形态的影响;（2）分别在0、24、48、72h时间点予以CCK-8法检测对比四组之间A450值（酶标仪下450nm处的吸光度值）;（3）48h流式细胞术检测比较成纤维细胞增殖S期情况。3.设置正常浓度rmMIF（2ng/ml）、高rmMIF浓度（50ng/ml）、高rmMIF浓度+Rho激酶特异性抑制剂Y27632三组刺激NIH3T3细胞48 h后运用RT-PCR及Western Blot法检测对比三组之间细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的m RNA与蛋白表达差异。第四部分:NIH3T3细胞体外实验,分组设计:A组（无处理组）、B组（刺激组）加rm MIF（50ng/ml）、C组（抑制剂组）加rm MIF（50ng/ml）+ISO-1（20μM）、D组（姜黄素组）加rm MIF（50ng/ml）+姜黄素（20μM）与DMEM培养液一并置37℃、5%CO2孵箱培养48 h,分别采用:（1）CCK-8检测法在48h对无处理组、刺激组、姜黄素组三组用酶标仪测450 nm处的吸光度值（A450值）;（2）运用RT-PCR及Western Blot方法检测比较各组之间炎症介质（TGF-β1、MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α）及胶原蛋白（COL-1、COL-3）的m RNA与蛋白表达差异。结果第一部分:通过测量与对比研究发现,合并2型糖尿病组（DM+）与非合并2型糖尿病组（DM-）黄韧带厚度为（5.23±0.71）mm vs（4.42±0.60）mm;下关节突间距为（11.32±1.23）mm vs（12.09±1.57）mm;椎管有效腔隙矢状径为（7.57±1.87）mm vs（8.24±1.74）mm;两组在此三种参数中存在统计学差异（P<0.05）。第二部分:DM+组vs DM-组:黄韧带厚度为（5.567±1.090）vs（4.828±0.552）mm;MIF含量为（312.105±80.820）vs（210.363±62.182）pg/mg protein;TGF-β1含量为（2728.121±890.373）vs（2170.131±689.459）pg/mg protein;MMP-13含量为（564.167±189.391）vs（379.841±101.363）pg/mg protein;IL-1β含量为（15.585±5.797）vs（10.785±2.787）pg/mg protein;IL 6含量为（17.238±4.449）vs（12.523±2.842）pg/mg protein;TNF-α含量为（13.947±4.688）vs（9.829±2.616）pg/mg protein;Masson染色后的胶原纤维胶原容积分数为（50.354±9.762）vs（41.803±5.873）;IHC中MIF阳性染色IOD为（2808.882±699.779）vs（1615.892±408.609）以上指标在两组之间差异有统计学意义（P<0.05）;IHC中MIF阳性染色棕色颗粒分布于黄韧带成纤维细胞细胞核、胞质内以及基质中,而且此病理现象在DM+组内更加明显。相关性分析显示:黄韧带内的MIF浓度与厚度呈正相关（r=0.768,P=0.000）。第三部分:1.相比于正常糖浓度,体外高糖浓度下培养的NIH3T3细胞对MIF蛋白的表达水平更高且48h时间点高糖浓度组NIH3T3细胞增殖明显。2.（1）光镜下可见同一时间点（48h）不同rm MIF浓度组间NIH3T3细胞生长呈现差异,rm MIF刺激浓度越高细胞密度越大;（2）CCK-8检测显示:正常、低、中、高rm MIF浓度组间A450值（48h）组间总体均数差异有统计学意义（P<0.05）,与正常浓度对照组相比,低、中、高rm MIF浓度组增殖活性高且差异有统计学意义（P<0.05）;（3）流式细胞术检测显示随rm MIF浓度增加各组内S期的细胞占比增多。3.rm MIF刺激NIH3T3细胞48 h后细胞Cyclin-D1的m RNA和蛋白表达增加,经Rho途径抑制剂阻滞后Cyclin-D1的m RNA和蛋白表达降低。第四部分:CCK-8检测显示:刺激组较无处理组A450值高（P<0.05）,姜黄素组较刺激组A450值降低（P<0.05）,姜黄素组与无处理组A450值无统计学差异（P>0.05）;RT-PCR及Western Blot检测显示:B刺激组较A无处理组各因子胶原m RNA及蛋白表达更高（P<0.05）;D姜黄素组较B刺激组的表达降低（P<0.05）;D姜黄素组与C抑制剂组间表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.合并2型糖尿病的腰椎管狭窄症患者人群中,黄韧带肥厚等3种参数退变程度明显高于非糖尿病患者,证实了2型糖尿病是腰椎管狭窄,尤其是黄韧带肥厚的易感因素。揭示全身代谢性因素可对腰椎局部产生影响,符合中医整体观理论;2.在2型糖尿病合并腰椎管狭窄患者的黄韧带内发现MIF及其相关的促纤维化炎症介质（TGF-β1、IL-1β、IL-6、TNF-αMMP-13）含量更高,其中MIF含量与黄韧带厚度呈正相关。在合并2型糖尿病组内黄韧带样本内存在更明显的弹力纤维降解及胶原纤维增生现象,而且该组人群MIF的含量高且在黄韧带中的分布更加广泛。3.高糖环境刺激成纤维细胞高表达的MIF可促进成纤维细胞增殖及炎性介质表达,MIF参与的炎症反应可能在介导合并2型糖尿病的腰椎管狭窄黄韧带肥厚病理过程中占主导地位,其中,MIF促进的成纤维细胞增殖及胶原纤维增生可能是黄韧带瘢痕修复致其肥厚的重要部分。炎症反应包括炎性损伤及修复两重要部分,其是中医血瘀理论的主要内涵之一;4.活血化瘀中药姜黄的有效成分姜黄素可有效地阻断MIF对成纤维细胞的相关炎性及促增殖效应,这表明姜黄可能是防治2型糖尿病合并腰椎管狭窄黄韧带肥厚的有效药物之一,值得进一步研究。以上研究进一步说明了中医整体观在分析合并2型糖尿病的腰椎管狭窄黄韧带肥厚机理中的重要指导作用,同时也有力地证明了血瘀是消渴影响腰痹病的重要媒介因素且活血化瘀药遵循中医“从瘀而治”理论可能是此类全身性慢性疾病并发腰椎黄韧带肥厚寻找有效干预方法的重要指导依据之一。
张静[3]（2019）在《DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮和神经再生的作用和机制研究》文中指出目的:中国是世界上糖尿病患病人数最多的国家。最新数据显示我国20～79岁的糖尿病人口已达1.14亿。47%～64%的糖尿病患者会发生原发性角膜病变,临床表现为角膜上皮愈合延迟、角膜知觉减退、神经营养性角膜溃疡等。糖尿病患者伤口迁延不愈一直是临床棘手的治疗难题,而白内障和眼底手术都会给糖尿病患者带来角膜损伤的机会。中性粒细胞是在伤口愈合早期起主要作用的炎症细胞。它在糖尿病个体损伤后浸润延迟,且发生被称为NETosis的细胞死亡,释出细胞核内的组蛋白和DNA至细胞外,形成中性粒细胞外陷阱（neutrophil extracellular traps,NETs）,捕获细菌抵抗感染的同时造成组织损伤。PAD4酶是催化NETosis的关键酶,细胞外DNA（extracellular DNA,e DNA）和组蛋白是NETs的关键组分,在宿主中诱导强烈的免疫反应,导致组织损伤。靶向NETs治疗可以显着促进糖尿病皮肤愈合。清除e DNA的DNase Ⅰ和抑制NETs形成的PAD4抑制剂是两种最主要的靶向NETs的治疗方式。但目前尚无研究涉及NETs在糖尿病角膜上皮再生过程中的作用及机制,NETs与神经再生的关系更是当前研究的空白。本研究首先观察比较了DNase Ⅰ和PAD4抑制剂促进糖尿病小鼠角膜上皮和神经再生的作用,并对NETs在糖尿病角膜上皮和角膜神经再生过程中的作用机制进行了探讨。方法:1.抗NETs治疗角膜上皮损伤的效果观察及DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮再生的机制研究选择C57BL/6J雄性小鼠,使用STZ（链脲佐菌素）小剂量多次腹腔注射诱导的1型糖尿病小鼠模型,并在此基础上建立角膜上皮机械损伤模型。通过预实验确定抗NETs治疗（DNase Ⅰ和PAD4抑制剂）治疗1型糖尿病小鼠角膜上皮损伤的给药方法。通过小鼠角膜荧光素钠染色法观察抗NETs治疗（DNase Ⅰ点眼和腹腔注射PAD4抑制剂）对正常和糖尿病小鼠角膜上皮再生的影响。通过免疫荧光和Western Blot检测1mg/ml的DNase Ⅰ点眼对糖尿病小鼠角膜上皮再生相关信号通路（pAkt、IGF-1R和Sirt1）、角膜上皮氧化应激相关信号通路（ROS、NOX2和NOX4）、角膜缺氧诱导因子HIF-1α表达水平的影响。2.DNase Ⅰ对糖尿病小鼠角膜上皮再生过程中炎症反应的影响通过免疫荧光和Western Blot检测正常和糖尿病小鼠角膜上皮损伤后不同时间点的NETs标志物H3Cit和中性粒细胞标志物Ly6G的表达部位及表达水平。通过免疫荧光和Western Blot检测DNase Ⅰ治疗对糖尿病小鼠损伤的角膜中H3Cit和Ly6G表达水平的影响。通过Elisa检测DNase Ⅰ治疗对糖尿病小鼠损伤的角膜中NETs标志物:NE（中性粒细胞弹性蛋白酶）和MPO（髓过氧化物酶）表达水平的影响。通过免疫荧光和Western Blot检测DNase Ⅰ对糖尿病小鼠损伤的角膜中巨噬细胞标记物F4/80和M2型巨噬细胞标记物CD206表达的影响。通过q PCR检测DNase Ⅰ对糖尿病小鼠损伤的角膜中与巨噬细胞分型相关的mRNA表达水平的影响。3.DNase Ⅰ对糖尿病小鼠角膜神经再生的影响通过角膜神经染色和角膜敏感度测量观察比较DNase Ⅰ对糖尿病小鼠角膜神经纤维再生的影响。结果:1.抗NETs治疗促进正常和糖尿病小鼠的角膜上皮再生1mg/ml的DNase Ⅰ点眼可促进正常小鼠角膜上皮再生（P<0.01）,并促进糖尿病小鼠角膜上皮再生（P<0.01）,且在24h时即表现出治疗效果。全身应用Cl-amidine（PAD4抑制剂,10mg/kg,腹腔注射）在24h时对糖尿病小鼠角膜上皮再生无明显影响（P>0.05）,但在48h时表现出促进糖尿病小鼠角膜上皮再生的作用（P<0.01）。DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮再生的机制有:（1）DNase Ⅰ活化糖尿病小鼠角膜上皮再生相关信号通路pAkt、IGF-1R和Sirt1主要表达于小鼠的角膜上皮层。角膜上皮损伤后48h时,糖尿病小鼠角膜中pAkt、IGF-1R和Sirt1的表达量低于正常小鼠（P<0.01）,DNase Ⅰ治疗增加了pAkt、IGF-1R和Sirt1在糖尿病小鼠角膜中的表达水平（P<0.01）。（2）DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜氧化应激相关信号通路ROS主要表达于小鼠的角膜上皮层。糖尿病小鼠ROS的免疫荧光强度高于正常小鼠（P<0.01）,DNase Ⅰ治疗可减少糖尿病小鼠角膜上皮层ROS的表达水平（P<0.01）。NOX2和NOX4主要表达于小鼠角膜上皮层。糖尿病小鼠角膜中NOX2和NOX4的蛋白表达水平高于正常小鼠（P<0.01）,DNase Ⅰ治疗可减少糖尿病小鼠角膜中NOX2和NOX4的表达水平（P<0.05）。（3）DNase Ⅰ调节糖尿病小鼠角膜中HIF-1α的表达HIF-1α的表达主要位于小鼠的角膜上皮层。糖尿病小鼠角膜中HIF-1α的蛋白表达水平高于正常小鼠（P<0.01）,DNase Ⅰ治疗可减少糖尿病小鼠角膜中HIF-1α的表达水平（P<0.01）。在角膜上皮损伤后48h,糖尿病小鼠角膜中HIF-1α的表达水平低于正常小鼠（P<0.01）,DNase Ⅰ治疗可增加角膜上皮再生过程中糖尿病小鼠角膜中HIF-1α的表达水平（P<0.01）。2.DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜的炎症反应（1）糖尿病小鼠角膜上皮损伤后中性粒细胞浸润和NETs形成增加刮除角膜上皮后24h时,正常小鼠的中性粒细胞标志物Ly6G出现在角膜基质浅层;48h时,Ly6G的表达减少。NETs标志物H3Cit的表达始终位于中性粒细胞浸润处的角膜基质中,且24h时的免疫荧光强度高于48h。刮除角膜上皮后24h时,糖尿病小鼠角膜中Ly6G的免疫荧光强度弱于正常小鼠;48h时显着增多,免疫荧光强度强于正常小鼠。H3Cit的表达始终位于中性粒细胞浸润处的角膜基质中,且48h时的免疫荧光强度高于24h。正常小鼠在角膜上皮损伤后所有时间点,角膜中H3Cit/H3的表达水平没有显着变化（P>0.05）;糖尿病小鼠在刮除角膜上皮后48h时角膜中H3Cit/H3的表达水平升高,且高于正常小鼠（P<0.01）。（2）DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜上皮再生过程中中性粒细胞的炎症反应角膜上皮刮除后48h时,糖尿病小鼠角膜中H3Cit/H3和Ly6G的表达水平均较正常小鼠增高（P<0.01）;经DNase Ⅰ治疗后,H3Cit/H3和Ly6G的表达下降至正常小鼠水平（P>0.05）。Elisa检测结果显示糖尿病小鼠角膜中MPO和NE的表达水平高于正常小鼠（P<0.01）;经DNase Ⅰ治疗后,糖尿病小鼠角膜中MPO和NE的表达均较糖尿病小鼠下降（P<0.05）。（3）DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜上皮再生过程中巨噬细胞的炎症反应角膜上皮损伤后48h时,糖尿病小鼠角膜中巨噬细胞表面标志物F4/80的免疫荧光强度高于正常小鼠;经DNase Ⅰ治疗后,不仅角膜基质中F4/80的免疫荧光强度明显降低,而且M2型巨噬细胞表面标志物CD206的免疫荧光强度也有所增强。q PCR结果显示:糖尿病小鼠角膜中与M1型巨噬细胞相关的i NOS、CD86、TNF-α、MCP-1、IL-12的mRNA表达水平高于正常小鼠（P<0.001）,与M2型巨噬细胞相关的IL-10、Arg-1、CD206的mRNA表达水平低于正常小鼠（P<0.01）;经DNase Ⅰ治疗后,糖尿病小鼠角膜中与M1型巨噬细胞相关的mRNA表达水平下降（P<0.05）,与M2型巨噬细胞相关的mRNA表达水平升高（P<0.01）。3.DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜神经再生（1）DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮下神经丛的神经纤维再生角膜上皮损伤后第21天,在角膜中央区,正常小鼠、糖尿病小鼠和DNase Ⅰ治疗的糖尿病小鼠角膜上皮下神经丛神经纤维密度依次为18.3±2.7%、5.3±1.9%、8.7±3.7%;其中糖尿病小鼠的神经纤维密度低于正常小鼠（P<0.001）,经DNase Ⅰ治疗后增加（P<0.05）。在角膜周边区,正常小鼠、糖尿病小鼠和DNase Ⅰ治疗的糖尿病小鼠角膜上皮下神经丛神经纤维密度依次为14.6±2.7%、5.0±2.1%、8.0±2.8%;其中糖尿病小鼠的神经纤维密度低于正常小鼠（P<0.05）,经DNase Ⅰ治疗后增加（P<0.05）。（2）DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜敏感度恢复刮除角膜上皮后,小鼠的角膜敏感度显着下降。在角膜上皮损伤后的第7天,正常小鼠的角膜敏感度恢复到接近受伤前的水平。糖尿病小鼠的角膜敏感度恢复缓慢。在角膜上皮损伤后的第3、7、14、21天,糖尿病小鼠的角膜敏感度均低于正常小鼠（P<0.01）,DNase Ⅰ治疗后升高（P<0.05）,且从第3天开始就使糖尿病小鼠的角膜敏感度恢复到接近正常小鼠的恢复水平（P>0.05）。结论:1.抗NETs治疗可同时促进正常小鼠和糖尿病小鼠的角膜上皮再生,清除e DNA的DNase Ⅰ的治疗效果优于抑制NETs形成的PAD4抑制剂。DNase Ⅰ通过活化角膜上皮再生相关信号通路、抑制角膜氧化应激相关信号通路、调节HIF-1α活化水平,促进糖尿病小鼠角膜上皮再生。2.DNase Ⅰ通过抑制糖尿病小鼠角膜损伤后中性粒细胞和巨噬细胞引起的炎症反应,促进糖尿病小鼠角膜上皮再生,提示e DNA是糖尿病角膜损伤后过度炎症的重要原因。3.DNase Ⅰ可促进糖尿病小鼠角膜上皮下神经丛神经纤维再生,促进角膜敏感度的恢复,提示e DNA产生增多和清除延迟是延缓糖尿病角膜神经再生的重要原因。创新及意义:本研究首次证实了抗NETs治疗可以促进糖尿病角膜上皮和角膜神经再生,同时在对DNase Ⅰ和PAD4抑制剂的治疗效果进行比较后,发现清除e DNA的DNase Ⅰ治疗糖尿病角膜损伤的效果优于抑制NETs形成的PAD4抑制剂。本研究提供了DNase Ⅰ治疗糖尿病角膜损伤的作用机制不仅涉及抑制角膜炎症反应,还涉及活化角膜上皮再生相关信号通路、抑制角膜氧化应激反应相关信号通路、调节HIF-1α活性,同时首次报道了清除eDNA可以促进角膜神经纤维再生。由于DNase Ⅰ治疗糖尿病角膜损伤的作用涉及多方面机制,且经济易得,使其具有良好的临床应用前景。
宋立果[4]（2019）在《姜黄素对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤和纤维化的作用及机制》文中研究指明目的研究姜黄素对高糖诱导下的视网膜色素上皮细胞发生氧化损伤的保护作用及发生纤维化的抑制作用并探讨其发生机制。方法取人视网膜色素上皮细胞株（hRPE）进行细胞培养,分组方式为:（1）正常培养组（完全培养基）;（2）高糖培养组（完全培养基+葡萄糖25mmol/L）;（3）-（6）为高糖加药组,在高糖培养的基础上加入姜黄素,其浓度分别设置为5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml。1、应用MTT试验,检测细胞的增殖情况。2、活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）试剂盒,检测各组细胞ROS的表达量。3、应用免疫荧光法,检测细胞内核转录因子-κB-p65（Nuclear Factor-kappa B-p65,NF-κB-p65）的表达位置和表达含量。4、酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒,检测肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor–alpha,TNF-α）和白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）的表达量。5、细胞划痕实验,检测细胞的形态和迁移改变。6、Western-blot技术,检测细胞核转录因子-κB-p65（Nuclear Factor-kappa B-p65,NF-κB-p65）,细胞间黏附因子-1（Intercellular Cell Adhesion Molecule,ICAM-1）,血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）,转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor-beta 1,TGF-β1）,α-平滑肌肌动蛋白（alpha-Smooth Muscle Actin,α-SMA）和基质金属蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2）的表达。结果1、与正常细胞组相比,高糖组细胞的增殖活性下降,各高糖加药组细胞的增殖活性随姜黄素浓度的增加而逐渐增加,其差异具有统计学意义（F=25.468,P<0.05）。2、高糖组细胞中ROS的表达含量明显多于正常组;各高糖加药组细胞中ROS的生成量随着姜黄素浓度的增加而明显减少。3、正常组细胞的NF-κB少量表达于胞核中,而高糖组细胞核中的NF-κB大量表达;在各高糖加药组细胞中,随着姜黄素浓度的增加,细胞核中的NF-κB的含量逐渐降低。4、正常细胞的上清液中仅表达少量的TNF-α和IL-1β,高糖组细胞上清液中TNF-α和IL-1β的含量明显增加,其差异具有统计学意义（P<0.05）;各高糖加药组细胞上清液中,TNF-α和IL-1β的含量随着姜黄素浓度的增加而下降,且其差异均具有统计学意义（TNF-α,F=28.143,P<0.05;IL-1β,F=17.585,P<0.05）。5、高糖可使视网膜色素上皮细胞发生纤维化,增强细胞的迁移能力;而随着姜黄素浓度的增加,细胞的纤维化和迁移能力逐渐受到抑制。6、Western-blot实验结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中NF-κB-p65、ICAM-1、VEGF、TGF-β1、α-SMA、MMP-2的蛋白相对表达含量均增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;高糖加药组随着姜黄素浓度的不断增加,细胞中各种蛋白的相对表达含量均降低,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1、高糖可以诱导视网膜色素上皮细胞发生氧化损伤。2、高糖可以诱导视网膜色素上皮细胞发生纤维化。3、姜黄素可以通过抑制NF-κB过度活化,抑制高糖诱导下的视网膜色素上皮细胞发生氧化损伤和纤维化,且其作用具有剂量依赖性。
滕小梅[5]（2018）在《内皮细胞calpain在促进糖尿病心肌病中的作用及机制研究》文中提出世界卫生组织2016年的报告指出全世界有4.22亿人患有糖尿病,且主要分布于发展中国家。近三十年,中国的糖尿病患病率增加了17%。如果不实施任何干预措施,中国将成为糖尿病患者数量最高的国家。糖尿病患者并发心血管疾病的风险将显着增加,而80%糖尿病患者死于心血管相关类疾病。I型和II型糖尿病可直接影响心脏的结构和功能,这一病理改变独立于冠心病和高血压因素,这种情况被称为糖尿病心肌病。糖尿病心肌病缺乏特异性的诊断指标,其确诊只能通过心脏功能相关的检测,主要的特征表现为早期的心脏舒张功能不全,后期的收缩功能障碍和心力衰竭。目前其发病机制尚不完全清楚,有效的治疗方法也有限。因此,着眼于糖尿病心肌病的发病机理研究,从分子机制中探索有效治疗糖尿病心血管并发症的新靶点极其迫切、并具有重要的潜在临床意义。Calpain属于钙依赖性半胱氨酸蛋白酶家族。15个家族成员中,仅calpain-1及calpain-2在内皮细胞中表达。Calpain-1及calpain-2是由不同的催化亚基,即大亚基CAPN1或CAPN2和一个共同的小分子量的调节亚基CAPNS1组成。调节亚基是calpain-1及calpain-2稳定性和活性必不可少的部分。因此,敲除capns1将破坏calpain-1及calpain-2的生物学功能。Calpastatin是calpain-1及calpain-2的内源性蛋白酶抑制剂。Calpain/calpastatin系统在细胞生物中发挥着重要作用。我们最近的研究发现,心肌细胞特异性敲除capns1后,可减轻糖尿病前期和I型糖尿病模型小鼠的心室重构和改善心功能,提示心肌细胞calpain在糖尿病心肌病中起关键作用。心肌细胞功能障碍在糖尿病心肌病中起着核心作用,但心脏中的非心肌细胞如内皮细胞在维持冠状动脉血管功能、心室稳态和适当的心功能方面也起着重要作用。事实上calpain的激活参与了血管内皮功能障碍和糖尿病的炎症反应。综上所述,我们提出假设,内皮细胞calpain可能介导糖尿病心脏的微血管病变,成为糖尿病心肌病的一个重要致病因素。【目的】1、通过建立内皮细胞特异性calpain敲除转基因小鼠,明确内皮细胞calpain在糖尿病心肌病中的作用;2、通过研究calpain在损伤心肌微血管和促进纤维化中的作用,阐明内皮细胞calpain在糖尿病心肌病发生中的分子机制。【研究方法】1、构建血管内皮细胞特异性capns1敲除转基因小鼠,分别诱导建立糖尿病前期、I型和II型糖尿病模型。通过超声心动图观察比较capns1基因敲除小鼠和野生型小鼠的心功能;通过免疫组化检测心肌细胞和纤维化程度以及微血管损伤情况;通过离体的主动脉环出芽实验观察内皮的血管新生功能。2、在心脏微血管内皮细胞中,分别利用calpastatin腺病毒、calpain抑制剂、β-catenin质粒以及crispr/cas9 KO质粒干预细胞,观察棕榈酸模拟的代谢应激下,calpain对血管内皮细胞功能（主要包括血管成环、损伤-修复、细胞凋亡）的影响,并阐明calpain通过β-catenin介导血管内皮细胞损伤。3、观察糖尿病前期和代谢应激下内皮细胞中的TGF-β1和IL-6的表达情况。在心脏微血管内皮细胞中,抑制calpain活性后,检测TGF-β1和IL-6的表达。利用重组IL-6蛋白诱导内皮向间质细胞转分化。检测IκB并阐明calpain通过NF-κB通路介导IL-6的表达。【研究结果】1、内皮细胞capns1敲除后破坏了calpain-1及calpain-2的蛋白在内皮细胞中的表达,但是内皮细胞capns1敲除没有影响小鼠的正常生理功能。2、在三种糖尿病小鼠模型中,内皮细胞capns1敲除减少心肌纤维化和肥大、减轻心肌功能障碍;其保护作用与心肌组织毛细血管密度和冠脉血流储备增加有关。3、内皮细胞capns1基因敲除显着增加离体糖尿病小鼠主动脉环的新生管样结构形成。4、在培养的心脏微血管内皮细胞中,calpain抑制可改善血管生成,阻止代谢应激下的细胞凋亡。具体机制是,在内皮细胞capns1基因敲除小鼠和特异性敲低calpain-2的细胞中,β-catenin的蛋白水平升高;内皮细胞中β-catenin的高表达可促进血管生成,抑制细胞凋亡;而β-catenin的敲除抵消了代谢应激下calpain抑制剂的保护作用。5、IL-6在糖尿病前期模型小鼠心肌组织和代谢应激下的心脏微血管内皮细胞中表达水平明显增加;capns1敲除、calpastatin过表达或者calpain抑制剂均可降低IL-6的增加,而TGF-β1表达并未改变。IL-6在体外可直接诱导内皮细胞表达间质细胞标志分子α-SMA,诱导内皮向间质细胞转化（Endo MT）,从而促进心肌纤维化。具体机制是,代谢应激下细胞中calpain活性增加,降解IκB,激活NF-κB通路,增加IL-6的表达,从而促进内皮向间质细胞的转分化。【结论】1、血管内皮细胞calpain能够促进糖尿病心肌病的发生和发展。2、内皮细胞calpain一方面通过抑制β-catenin诱导心肌内皮细胞损伤和损害新生血管形成;另一方面通过降解IκB提高IL-6的表达,促进内皮间质化程序,导致心脏纤维化。因此,calpain可能是预防糖尿病心肌病的有效治疗靶点。
刘利飞[6]（2018）在《化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Notch和Hh信号通路表达的干预作用》文中研究表明目的:研究化瘀通络中药对糖尿病肾脏病（diabetic kidney disease,DKD）大鼠肾脏损伤的干预作用,并探讨其作用机制是否与调控肾组织Notch和Hedgehog（Hh）通路的激活有关。方法:60只健康雄性SD大鼠,随机选取10只作为正常组（C组）,50只为造模组。造模组大鼠给予高糖高脂饲料喂养联合小剂量（35 mg/kg）链脲佐菌素（streptozotion,STZ）腹腔注射以建立糖尿病大鼠模型。成模大鼠随机分为模型组（M组）、化瘀通络中药组（Q组）和厄贝沙坦组（I组）。Q组和I组分别给予相应药物灌胃,C组和M组予相应体积的纯净水灌胃,连续灌胃16周。期间定期监测血糖、饮水量、进食量、尿量、24h尿蛋白定量;于第16周末大鼠称重,麻醉后留取血、尿标本,取右肾称重,留取肾组织标本,采用光镜、电镜进行病理学观察;采用免疫组织化学（immunohistochemistry technique,IHC）、实时定量PCR（Real-time PCR）和蛋白印迹法（Western Blot）对Notch和Hh信号通路中相关蛋白及m RNA表达进行检测。结果:1化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠“瘀血阻络证”的干预作用1.1大鼠一般状况C组大鼠一般状况良好,糖尿病（diabetes mellitus,DM）造模成功后,M、Q、I组大鼠出现不同程度的毛色晦暗、反应迟钝、舌色爪色紫暗等症状,于第12周部分大鼠出现脓疮等并发症。于第12周开始,各治疗组大鼠与模型组相比,上述症状有不同程度减轻。1.2随机血糖和血脂水平与C组相比,各造模组大鼠甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和极低密度脂蛋白胆固醇水平明显升高（P<0.01）。而与M组相比,化瘀通络中药组大鼠甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和极低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低（P<0.01）。各造模组大鼠的随机血糖值,组间比较未见统计学差异（P>0.05）。1.3 24小时尿蛋白定量检测结果从干预第4周末开始,与C组对比,各造模组大鼠24小时尿蛋白定量均明显上升（P<0.01）;但于第12周和16周末,与M组对比,Q组和I组大鼠的24小时尿蛋白定量均明显降低（P<0.01）;于第16周末,Q组较I组明显降低（P<0.01）。1.4血凝指标检测结果与C组比较,各造模组大鼠血浆凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）、凝血酶时间（thrombin time,TT）均明显缩短（P<0.05或P<0.01）,国际标准化比值（international standardization ratio,INR）明显减小（P<0.01）,血浆纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）水平明显升高（P<0.01）。与M组比较,Q组大鼠PT、INR和APTT均明显增大（P<0.05或P<0.01）,I组无明显差异（P>0.05）。在TT和FIB方面,各造模组之间无统计学差异（P>0.05）。2化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾脏损伤的干预作用2.1肾脏肥大指数比较与C组对比,各造模组大鼠肾脏肥大指数明显升高（P<0.01）;而与M组对比,Q组DKD大鼠的肾脏肥大指数明显降低（P<0.01）。2.2光镜及透射电镜观察结果光镜观察可见各造模组大鼠出现不同程度的肾小球体积增大,肾小囊腔隙狭窄,肾小球基底膜增厚,系膜基质增多,肾小管上皮细胞肿胀;电镜可见基底膜不规则性增厚,足突部分融合;而各治疗组病理改变较模型组有不同程度减轻。2.3肾功能检测与C组对比,各造模组大鼠血肌酐、尿素氮及尿酸水平均显着升高（P<0.01）;与M组对比,Q组大鼠的血肌酐和血尿酸水平显着降低（P<0.01）。3化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Notch通路表达的干预作用3.1 Real-time PCR检测肾组织Notch1、Jagged1、HES1和Hey1 m RNA表达与C组对比,各造模组大鼠肾皮质Notch1、Jagged1、HES1和Hey1m RNA表达量明显升高（P<0.01）;与M组对比,Q组和I组大鼠Notch1、Jagged1、HES1和Hey1 m RNA表达量均明显减少（P<0.01）;与I组对比,Q组大鼠HES1 m RNA表达量明显减少（P<0.01）。3.2免疫组化法检测肾组织Notch1、Jagged1、HES1和Hey1蛋白表达Notch1蛋白阳性信号主要定位于肾小球固有细胞、肾小管上皮细胞的胞浆,呈黄色或棕黄色颗粒状;Hey1蛋白阳性信号主要定位于肾小球固有细胞、肾小管上皮细胞的细胞核和/或胞浆;HES1蛋白阳性信号主要定位于肾小球固有细胞、肾小管上皮细胞的细胞核;Jagged1蛋白阳性信号主要定位于肾小管上皮细胞的胞浆。Notch1、HES1、Hey1和Jagged1蛋白于C组大鼠有少量表达,M组表达明显增多,Q组和I组较M组有所减少。3.3 Western Blot检测肾皮质中Notch1、Jagged1、HES1和Hey1蛋白表达与C组对比,各造模组大鼠Notch1、Hey1、HES1和Jagged1蛋白的表达量均明显增多（P<0.01）;与M组对比,Q组和I组大鼠Notch1、Hey1、HES1和Jagged1蛋白的表达量均明显减少（P<0.01）;与I组对比,Q组Hey1和HES1两种蛋白表达量明显减少（P<0.01）4化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Hh通路表达的干预作用4.1免疫组化检测各组大鼠肾组织GLI1、SHH、FSP1、LN蛋白结果GLI1、SHH、FSP1和LN蛋白的阳性信号均定位于肾小管上皮细胞的胞浆,呈黄色或棕黄色颗粒状。C组大鼠GLI1、SHH、FSP1、LN蛋白表达微弱,M组大鼠表达明显增多,Q组和I组表达量较M组有所减少。4.2 Real-time PCR检测肾组织GLI1、SHH、FSP1 m RNA表达与C组比较,各造模组大鼠GLI1、SHH、FSP1 m RNA表达均明显增多（P<0.01）;在SHH m RNA表达方面,与M组比较,Q组和I组表达量均降低（P<0.05）,Q组和I组之间无统计学差异（P>0.05）。在GLI1和FSP1 m RNA表达方面,与M组比较,Q组和I组表达量均降低（P<0.01）;与Q组比较,I组表达量增加（P<0.05或P<0.01）。4.3 Western Blot检测各组大鼠肾组织GLI1、SHH、FSP1蛋白结果与C组对比,各造模组大鼠GLI1、SHH、FSP1蛋白的表达量均明显增多（P<0.01）;与M组对比,Q组和I组大鼠GLI1、SHH、FSP1蛋白的表达量均明显减少（P<0.01）;与I组对比Q组GLI1、SHH、FSP1蛋白表达量明显降低（P<0.01）。结论:1.模型大鼠血糖升高后逐渐出现蛋白尿及DKD肾脏病理改变,提示DKD模型复制成功。且模型大鼠存在糖脂代谢紊乱,血液处于高凝状态,出现典型的血瘀症状,符合中医瘀血阻络证改变。2.化瘀通络中药能明显改善DKD大鼠瘀血阻络状态,降低大鼠尿蛋白,减轻肾脏病理损伤,对大鼠肾脏有明显的保护作用。3.化瘀通络中药能够抑制Notch通路Notch1、Jagged1、HES1和Hey1蛋白的高表达,这可能是其减少尿蛋白排泄,减轻肾脏损伤的作用机制之一。4.化瘀通络中药能明显抑制Hh通路的部分活化,从而减少FSP1和LN的表达,这可能是其减轻肾小管损伤和肾间质纤维化的重要途径之一。
王志强[7]（2018）在《2型糖尿病LncRNAs差异表达谱的筛选及功能研究》文中研究说明目的:（1）本研究利用基因芯片及生物信息学技术,筛选出2型糖尿病中差异表达的lncRNAs和mRNAs,初步探索差异表达的lncRNAs在2型糖尿病中的分子机制。（2）筛选出差异倍数FC（abs）在2.0倍以上并且P≤0.01的lncRNAs,最终在查阅文献的基础上选取MEG3、MALAT1和MIAT基因。在2型糖尿病患者及对照组外周血中检测其表达水平,分析其表达水平与2型糖尿病患者相关危险因素的关系,探讨MEG3、MALAT1和MIAT基因在2型糖尿病诊断中潜在的意义。（3）深度了解内皮细胞的lncRNAs,对于糖尿病并发症可能提供了全新的生物标记物和治疗靶点。理解糖尿病诱导的内皮细胞功能障碍和确定全新的治疗靶点对于预防和减少糖尿病并发症非常重要。目前,MEG3在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）功能障碍中发挥作用的潜在分子机制还未见报道。因此,本研究的目的是探讨MEG3是否可以作为高糖诱导内皮细胞功能障碍的潜在调控者和分子生物标记物。方法:（1）选择2型糖尿病患者及非2型糖尿病患者各5例,抽取各自血液样本,分别提取RNA后,利用基因芯片对lncRNAs和mRNAs进行表达分析。应用生物信息学方法,包括Pathway、Disease和基因本体论（gene ontology,GO）分析,分析2型糖尿病外周血中lncRNAs及mRNAs的表达谱。同时,进一步分析差异基因可能调控的相关通路,进而发现与2型糖尿病发生发展过程相关的lncRNAs,构建lncRNAs和mRNAs的共表达网络,预测差异表达的1ncRNAs可能参与的生物功能。（2）选取200例2型糖尿病患者及200例非2型糖尿病患者,采用实时荧光定量PCR方法检测2型糖尿病组和对照组中MEG3、MALAT1和MIAT的表达水平,采用ROC曲线探讨外周血中MEG3、MALAT1和MIAT的表达水平在2型糖尿病中诊断的价值。（3）运用MEG3的特异性小干扰RNA（siRNA）和scrambled siRNA的慢病毒载体感染HUVECs,运用实时荧光定量PCR检测炎症细胞因子、TGFβ信号通路和Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用MTT实验检测细胞增殖,应用western blot检测凋亡相关蛋白、TGFβ信号通路和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果:（1）2型糖尿病患者外周血中差异表达的lncRNAs有68条,其中上调的有44条,下调的有24条;差异表达的mRNAs有74条,其中上调的有56条,下调的有18条。（2）表达差异的mRNAs显着富集的信号通路包括突触小泡周期通路、卵巢类固醇生成通路、癌症的micro RNA通路、细胞色素P450介导的异生素代谢通路和化学致癌作用通路等。显着富集的疾病包括Keutel综合征、遗传性混合性息肉病综合征、其他体液免疫缺陷疾病、脑脓肿黄瘤症和色素性视网膜炎（RP）等。（3）在生物过程中,显着富集的Gene Ontology功能包括可见光的检测、检测光的刺激、骨矿化的调节、生物矿物组织发育的调节和解剖结构排列等。在细胞组件中,显着富集的Gene Ontology功能包括内吞囊泡膜、细胞质小泡膜、囊泡膜、神经元投影和神经元的一部分等。在分子功能中,显着富集的Gene Ontology功能包括脂蛋白转运蛋白活性、胆固醇羟化酶活性、胆甾烷三醇单加氧酶活性、微管蛋白-谷氨酸连接酶活性和骨的结构成分等。（4）与对照组MEG3基因的表达量相比,2型糖尿病组MEG3基因的表达量与对照组相比明显降低,差异具有统计学意义（P<0.001）。与对照组MALAT1基因的表达量相比,2型糖尿病组MALAT1基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.001）。与对照组MIAT基因的表达量相比,2型糖尿病组MIAT基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.001）。（5）在2型糖尿病组全体人群和男性中,MEG3高表达组血糖水平低于MEG3低表达组血糖水平,差异具有统计学意义（P<0.05）;在对照组女性中,MEG3高表达组血糖水平低于MEG3低表达组血糖水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。在2型糖尿病组全体人群、男性和女性中,MALAT1高表达组血糖水平高于MALAT1低表达组血糖水平,差异具有统计学意义（P<0.05）;在对照组全体人群和女性中,MALAT1高表达组血糖水平高于MALAT1低表达组血糖水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。在2型糖尿病组全体人群、男性和女性中,MIAT高表达组血糖水平高于MIAT低表达组血糖水平,差异具有统计学意义（P<0.05）;在2型糖尿病组男性中,MIAT高表达组舒张压水平低于MIAT低表达组舒张压水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。在对照组女性中,MIAT高表达组血糖水平高于MIAT低表达组血糖水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）在2型糖尿病组全体人群和男性中,MEG3基因的表达量与血糖水平呈负相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;在2型糖尿病组女性中,MEG3基因的表达量与低密度脂蛋白水平呈正相关,差异具有统计学意义（P<0.05）。在2型糖尿病组全体人群和女性中,MALAT1基因的表达量与血糖、总胆固醇和低密度脂蛋白水平呈正相关,差异均具有统计学意义（P<0.05）;在2型糖尿病组男性中,MALAT1基因的表达量与血糖水平呈正相关,差异具有统计学意义（P<0.05）。在对照组全体人群中,MALAT1基因的表达量与血糖水平呈正相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;在对照组女性中,MALAT1基因的表达量与血糖和收缩压水平呈正相关,差异均具有统计学意义（P<0.05）。在2型糖尿病组全体人群、男性和女性中,MIAT基因的表达量与血糖水平呈正相关,差异具有统计学意义（P<0.05）。在对照组全体人群和男性中,MIAT基因的表达量与收缩压水平呈正相关,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）MEG3表达量的ROC曲线下的面积AUC=0.818（95%CI:0.777-0.859,P<0.001）,灵敏度为94.9%,特异度为94.4%;MALAT1表达量的ROC曲线下的面积AUC=0.838（95%CI:0.723-0.954,P<0.001）,灵敏度为95.5%,特异度为95.2%;MIAT表达量的ROC曲线下的面积AUC=0.805（95%CI:0.666-0.944,P=0.001）,灵敏度为95.0%,特异度为95.0%。（8）分别与48、72、96小时正常糖（Control,5 mM D-glucose）培养的人脐静脉内皮细胞相比,高糖（HG,30 mM D-glucose）刺激48、72、96小时后,MEG3的表达水平以时间依赖方式表达下降。（9）与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组MEG3基因的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组MEG3基因的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组α-SMA、VEGF、TNF-α和IL-6基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组α-SMA、VEGF、TNF-α和IL-6基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。（10）与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组TGFβ1、SMAD2和SMAD7基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组TGFβ1、SMAD2和SMAD7基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。（11）与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组β-catenin和Cyclin D1基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组β-catenin和Cyclin D1基因的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与control组TCF7L2基因的表达量相比,HG组和HG+MEG3siRNA组TCF7L2基因的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组TCF7L2基因的表达量相比,HG+MEG3siRNA组TCF7L2基因的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（12）在48、72和96小时,与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组的细胞OD值明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组的细胞OD值明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。（13）与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组的细胞凋亡率明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组的细胞凋亡率明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（14）与control组相比,HG组Bax、Caspase 3和P53蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组Bax、Caspase 3和P53蛋白的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。与control组相比,HG组Bcl-2蛋白的表达量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组Bcl-2蛋白的表达量相比,HG+MEG3siRNA组Bcl-2蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。（15）与control组相比,HG组和HG+MEG3siRNA组SMAD2和β-catenin蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与HG组相比,HG+MEG3siRNA组SMAD2和β-catenin蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）在2型糖尿病中,lnc RNAs和mRNAs有大量的差异表达,提示这些差异表达的lncRNAs参与了2型糖尿病发生发展过程,有可能成为临床诊断与治疗2型糖尿病的新靶点。通过进一步的生物功能信息探索,差异表达的lncRNAs涉及多条信号通路、多种疾病和多项生物功能,为后续2型糖尿病研究提供理论依据。（2）2型糖尿病患者外周血中MEG3表达水平降低、MALAT1和MIAT表达水平增加,ROC曲线分析表明MEG3、MALAT1和MIAT可以作为诊断2型糖尿病的潜在生物标记物。（3）本研究证明了MEG3参与高糖诱导的内皮细胞功能障碍,MEG3在高糖血症的内皮细胞模型中表达下调。此外,MEG3基因敲除能够加剧内皮细胞的炎症损伤。有趣的是,MEG3基因敲除会通过上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax、Caspase-3和P53蛋白的表达诱导细胞的增殖和抑制细胞的凋亡。值得注意的是,MEG3基因敲除通过上调TGFβ1、SMAD2和SMAD7基因和SMAD2蛋白的表达激活TGFβ信号通路,MEG3基因敲除通过上调β-catenin和Cyclin D1基因和β-catenin蛋白的表达以及下调TCF7L2基因的表达激活Wnt/β-catenin信号通路。我们的研究结果表明,对于高糖诱导的内皮细胞功能障碍,MEG3可以作为全新的治疗靶点和分子生物标记物。
杨红[8]（2014）在《运动及综合干预对糖尿病大鼠心血管代谢与收缩功能因子的影响》文中进行了进一步梳理目的代谢功能紊乱是导致糖尿病心血管病变最重要的原因之一。已知心脏是人体能量需求最大的器官,心肌发生代谢紊乱,提示心肌供能不足,影响心肌泵血能力。糖尿病引起的高糖高脂会导致心肌血管结构和功能的改变,其中血管收缩增强,减少血管血流量,会引发心肌缺血。所以,糖尿病心血管病发生代谢紊乱的同时,还伴随着收缩功能的异常。本研究从糖尿病心血管代谢相关因子过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）、肉碱棕榈酰转移酶1（CPT-1）、胰岛素样生长因子（IGF-1）和收缩功能相关因子内皮素1（ET-1）、尾加压素Ⅱ（UⅡ）的研究着手,研究糖尿病心血管代谢紊乱和收缩功能异常的机制,探讨运动干预及其药物联合干预是否能改善糖尿病心血管代谢紊乱和收缩功能异常等问题,从而起到治疗糖尿病心血管病的作用。方法1.健康SD雄性大鼠,将其随机分为四组:正常对照组（A组）,安静糖尿病组（B组）,运动糖尿病组（C组）,运动加药糖尿病组（D组）。糖尿病模型建立成功后,C组D组进行8周运动干预,D组给予罗格列酮。2.大鼠尾静脉采血检测血糖变化,进行口服糖耐量试验,干预结束后大鼠腹主动脉采血,检测大鼠糖化血清蛋白、血脂三项的结果。3.心肌和血管组织石蜡包埋,进行HE染色,观察细胞形态。4.荧光定量PCR检测心肌和血管中代谢因子（PPARα、CPT-1、IGF-1）和收缩功能因子（ET-1、UⅡ）的基因水平,蛋白质印迹法（Western Blot）检测蛋白表达的变化。5.统计学处理:所有数据用SPSS11.1软件处理,剂量资料以均数±标准差表示,组间比较采用多因素方差分析统计处理。结果1.实验大鼠出现三高一低症状:安静糖尿病组体重明显降低（p＜0.01）,运动糖尿病组和运动加药组体重增加;糖尿病组心脏重量降低,运动糖尿病组和运动加药组升高;糖尿病组心重/体重指数增大,运动糖尿病组心重/体重指数降低;糖尿病大鼠糖耐量试验阳性。2.实验大鼠生理生化指标的变化:糖尿病组血糖明显升高（p＜0.01）,运动糖尿病组和运动加药组血糖明显降低（p＜0.01）,且运动加药组降低幅度更明显;糖尿病组糖化血清蛋白升高（p＜0.01）,运动组和运动加药组含量降低,且运动加药组作用有显着性差异（p＜0.01）;糖尿病组甘油三酯、胆固醇和低密度脂蛋白含量都升高,且总胆固醇升高有显着性差异（p＜0.01）,运动组和运动加药物组降低总胆固醇和低密度脂蛋白含量,且综合干预后总胆固醇降低有显着性差异（p＜0.01）;运动加药物组降低甘油三酯含量。3.心肌和血管组织形态变化:糖尿病大鼠心肌组织排列紊乱,细胞肥大扭曲,细胞间隙增大,运动组和运动加药组心肌排列尚整齐,肥大心肌减少,细胞间隙变小;糖尿病大鼠血管内膜增厚病灶,病灶表面内皮细胞肿胀、肥胖,局部平滑肌细胞排列紊乱,运动组和运动加药组内膜较为平坦,细胞平行排列,破坏较轻。4.实验大鼠心肌血管代谢收缩因子基因表达的变化:安静糖尿病组心肌中PPARα、IGF-I、ET-1表达降低和CPT-1、UⅡ升高,且ET-1、UⅡ变化有显着性差异（p＜0.01）,血管中PPARα、CPT-1、IGF、ET-1、UⅡ降低,且CPT-1、IGF-I降低有显着性差异（p＜0.05）;运动糖尿病组心肌PPARα、CPT-1、ET-1、UⅡ降低和IGF-I升高,血管PPARα、CPT-1、IGF-I、ET-1、UⅡ降低;运动加药组心肌中PPARα、CPT-1、IGF-I、ET-1、UⅡ降低,且UⅡ降低有显着性差异（p＜0.05）,血管中PPARα、IGF-I、ET-1、UⅡ升高和CPT-1降低,且PPARα升高有显着性差异（p＜0.05）。5.实验大鼠心肌血管代谢收缩因子蛋白水平的变化:安静糖尿病组心肌血管中PPARα、CPT-1、IGF-I降低和ET-1、UⅡ升高,且心肌PPARα（p＜0.01）和血管CPT-1（p＜0.05）降低有显着性差异;运动糖尿病组心肌血管中PPARα、IGF-I升高和ET-1、UⅡ降低,血管CPT-1升高,且血管IGF-I升高有显着性差异（p＜0.05）;运动加药组心肌血管PPARα、IGF-I升高和UⅡ降低,血管CPT-1升高和ET-1降低,且血管IGF-I升高有显着性差异（p＜0.01）。结论:1.糖尿病大鼠出现明显代谢紊乱,血糖、血脂升高。同时,心肌血管代谢和收缩因子发生改变,尤其心肌和血管代谢因子PPARα、CPT-1、IGF-I显着降低,收缩因子ET-1和UⅡ显着升高,势必造成糖尿病大鼠心血管细胞摄取糖、脂类物质受限,能量代谢障碍,且血管过度收缩,心肌供血量不足,最终影响心血管舒缩功能。2.运动干预对糖尿病大鼠心肌血管糖、脂代谢紊乱和收缩功能异常有一定的改善作用。尤其在改善心血管细胞摄取糖、脂类物质受限和能量代谢障碍方面有一定效果。同时,还可改善血管收缩异常,增加心肌供血量。此外,运动干预对血管代谢和收缩功能的作用比心肌更明显。3.运动联合药物干预对糖尿病大鼠心血管代谢紊乱的改善更为明显,提示运动联合药物干预是改善心血管代谢的有效方法。
蔡永红,张莲,赵津,赵克中,刘建峰[9]（2012）在《糖尿病肾小管病变研究进展》文中进行了进一步梳理糖尿病肾脏病是糖尿病主要的慢性并发症之一,是导致终末期肾病的主要原因。过去的研究认为其病变主要是肾小球硬化。但近来研究已证实糖尿病肾损伤同时也发生在肾小管。血压及尿白蛋白正常的糖尿病患者12%有肾小管性蛋白尿,说明肾小管
杨敏[10]（2007）在《黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠肾脏内皮细胞损伤的干预研究》文中研究表明糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）是糖尿病（diabetesmellitus,DM）重要的微血管并发症之一,也是导致慢性肾功能不全的主要原因。目前DN的发病机制尚不清楚,亦缺乏有效的治疗手段。因此,积极地寻找有效方法治疗DN对于延长患者寿命,提高生活质量具有重大意义。本论文从文献综述、理论和实验研究三方面加以探讨,实验研究方面选用了体现益气行血、消症化积治法的黄芪卫矛合剂,重点观察其对单侧肾切除合并注射链脲佐菌素DN大鼠模型肾脏内皮细胞损伤的干预作用。1文献研究:就近年来现代医学对于DN的发病机理、治疗用药、研究方法;中医药防治DN作用机制进展;内皮细胞和DN关系;实验性DN动物模型的建立及研究方法等方面研究动态进行了较为系统的总结和综述。2理论研究:在中医理论指导下,结合现代研究成果,对消渴病肾病的病名、病机理论进行了阐述,认为消渴病肾病是以肾元亏虚、气阴两伤为本,气血瘀滞、痰湿内停为标,久病入络、肾生症瘕为发病关键;初步阐明了微型症瘕假说与肾脏内皮细胞损伤机制的相关性,确立了“益气行血、消症散结”为DN基本治法,为消渴病肾病的研究思路及治法提供了理论依据。3实验研究:目的:观察黄芪卫矛合剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾脏内皮细胞损伤的干预作用及机制。方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素（STZ）尾静脉注射建立糖尿病肾病动物模型,随机分为模型组（M）、黄芪卫矛合剂治疗组（H）、科素亚治疗组（K）,另设假手术组为空白对照组（F）。0、4、8、12周动态观察大鼠一般状态、体重、尿量、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血脂、24小时尿蛋白定量、肾功能的变化,光镜观察肾小球及肾小管间质形态学和肾小管周围血管（PCT）网改变;采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清层粘连蛋白（LN）和Ⅳ型胶原（typeⅣcollagen）含量,硝酸还原酶法检测肾组织一氧化氮（NO）含量;放射免疫法检测内皮素-1（ET-1）的含量;采用Western-blot的方法测定肾组织中肝细胞生长因子（HGF）和转化生长因子β1（TGF-β1）的蛋白表达。结果:①黄芪卫矛合剂能显着降低DN大鼠空腹血糖和糖化血红蛋白,并具有降低血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）而调节脂代谢的作用,与模型组比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;能够降低DN大鼠升高的血清BUN和Scr,与模型组比较有显着差异（P<0.05）;降低实验性DN大鼠24小时尿蛋白排泄量,与模型组比较有极显着差异（P<0.01）。提示黄芪卫矛合剂对实验性DN大鼠具有良好的调节糖、脂代谢作用,并具有减少尿蛋白排出、保护肾功能的作用。尤其在降糖、调脂、改善肾功能方面疗效优于科素亚组。其降低24小时尿蛋白的作用不如科素亚,但差异无统计学意义（P>0.05）。病理形态观察显示:模型组光镜下可见肾小球基底膜增厚,系膜区弥漫性增宽,细胞外基质（ECM）增多,肾小管纤维化。经黄芪卫矛合剂治疗后,上述病理改变有显着减轻,提示其对DN大鼠肾脏具有保护作用。科素亚对肾小球也有一定保护作用。②ELISA结果表明:糖尿病肾病大鼠血清LN和Ⅳ型胶原的合成和分泌明显增多,揭示了DN大鼠肾脏受到一定程度损害。在抑制肾小球合成和分泌LN和Ⅳ型胶原方面,黄芪卫矛合剂和科素亚皆能明显降低造模后LN和Ⅳ型胶原（与模型组相比P<0.05）,在降低Ⅳ型胶原方面黄芪卫矛合剂优于科素亚组,但在降低LN方面两组之间差异不显着（P>0.05）。表明黄芪卫矛合剂能减少肾小球合成和分泌LN和Ⅳ型胶原,是其防治DN的作用机制之一。③硝酸还原酶法检测表明糖尿病肾病模型组NO含量显着降低,放射免疫法检测显示其ET-1水平比假手术组显着升高,提示DN大鼠NO与ET-1的平衡失调,内皮功能紊乱,揭示了DN大鼠肾脏损害进一步发展。中药黄芪卫矛合剂和科素亚能明显提高NO含量,降低ET-1水平,与模型组比较差异均有显着性统计学意义（P<0.05,P<0.01）,两组之间比较差异不显着。提示黄芪卫矛合剂能显着改善糖尿病肾病模型所造成的NO表达减少和ET-1释放增多,从而发挥对肾脏内皮细胞的保护作用。表明黄芪卫矛合剂能显着改善糖尿病肾病大鼠模型所致NO的降低和ET-1增高,一定程度恢复二者的平衡紊乱、改善肾脏内皮功能,在此方面与科素亚比较作用相接近。④采用Westernblot蛋白印迹方法检测各组大鼠肾组织HGF和TGF-β1蛋白表达,研究结果显示:模型组大鼠肾组织中TGF-β1蛋白表达较假手术组明显升高（P<0.05）,而HGF蛋白表达较假手术组明显降低（P<0.05）,黄芪卫矛合剂和科素亚治疗后可明显下调TGF-β1蛋白表达,上调HGF蛋白表达,以调节HGF和TGF-β1的动态平衡,进一步抑制肾脏内皮细胞损伤,促进肾组织修复。结论:本课题中黄芪卫矛合剂采用“益气行血、消症散结”之法,针对DN“微型症瘕”病机设立,可有效防治糖尿病肾病,其作用机理可能是通过降糖、调脂、降低DN模型大鼠尿蛋白,减轻肾组织病理损伤,抑制细胞外基质主要成分LN和Ⅳ型胶原的合成,调节内皮细胞相关细胞因子NO和ET-1,HGF和TGF-β1的动态平衡发挥作用。其中,部分检测结果显示黄芪卫矛合剂优于科素亚,可能与中药多环节、多靶点治疗作用有一定关系。
二、转化生长因子β1在糖尿病中的异常及临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、转化生长因子β1在糖尿病中的异常及临床意义（论文提纲范文）
（1）基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 糖尿病心肌病的中医认识 |
| 1 糖尿病心肌病中医病名 |
| 2 糖尿病心肌病中医病因 |
| 3 糖尿病心肌病中医病机 |
| 4 糖尿病心肌病治则 |
| 5 糖尿病心肌病论治 |
| 6 小结与展望 |
| 综述二 糖尿病心肌病现代研究进展 |
| 1 糖尿病心肌病流行现状 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理机制 |
| 4 糖尿病心肌病诊断策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干预策略 |
| 6 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖心平胶囊网络药理学研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 糖心平胶囊对DCM的保护作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 糖心平干预后大鼠心功能及对抗急性心肌缺血能力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 基于PI3K/AKT信号通路糖心平胶囊药效机制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（2）高糖伴腰椎管狭窄黄韧带肥厚的炎性机制及姜黄素的干预效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表(ABBREVIATION) |
| 前言 |
| 1 祖国医学对退行性腰椎管狭窄症的认识 |
| 2 现代医学对退行性腰椎管狭窄症的认识 |
| 3 祖国医学对2型糖尿病及合并腰椎管狭窄症的认识 |
| 4 现代医学对2型糖尿病及合并腰椎管狭窄症的认识 |
| 5 基于中医基本哲学整体观辩证认识两者之间的关系 |
| 6 巨噬细胞移动抑制因子与2型糖尿病并退行性腰椎管狭窄的联系 |
| 7 姜黄与阻断MIF对成纤维细胞效应作用的联系 |
| 8 本课题研究目的及方法 |
| 参考文献 |
| 第一章 2型糖尿病对退变性腰椎管狭窄症患者椎管内结构参数的影响 |
| 1 对象及研究方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 根据是否合并2型糖尿病分组 |
| 2.2 测量对比腰椎节段的确定 |
| 2.3 椎管内各参数对比结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中医基本哲学整体观认识消渴症及腰痹病之间的关系 |
| 3.2 退变性腰椎管狭窄症与2型糖尿病特征 |
| 3.3 退变性腰椎管狭窄症患者纳入标准及影像学测量点选择依据 |
| 3.4 合并2型糖尿病的退变性腰椎管狭窄症患者中各项参数特征 |
| 3.5 2型糖尿病对腰椎管中骨性结构参数的影响及分析 |
| 3.6 2型糖尿病对腰椎管中纤维性软组织结构参数的影响及分析 |
| 3.7 黄韧带肥厚及与2型糖尿病潜在关系分析 |
| 4 结论、不足及展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 退行性腰椎管狭窄症合并2型糖尿病患者黄韧带中MIF定量分析及其效应研究 |
| 1 研究对象及黄韧带获取与初步处理 |
| 1.1 对象及伦理内容 |
| 1.2 黄韧带获取及初步处理 |
| 2 方法 |
| 2.1 黄韧带厚度测量 |
| 2.2 主要试剂及仪器表(表2-2,表2-3) |
| 2.3 黄韧带内的蛋白提取、浓度测量及相关炎症介质ELISA测定 |
| 2.4 黄韧带弹力、胶原纤维Masson染色及定量分析 |
| 2.5 黄韧带内MIF免疫组织化学(IHC)研究及定量分析 |
| 2.6 黄韧带厚度与MIF含量相关性分析 |
| 2.7 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 黄韧带厚度对比 |
| 3.2 黄韧带内MIF、TGF-β1、MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白定量 |
| 3.3 黄韧带弹力、胶原纤维Masson染色及定量分析 |
| 3.4 黄韧带内MIF免疫组织化学(IHC)研究及定量分析 |
| 3.5 黄韧带厚度与MIF含量相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 血瘀为消渴及腰痹病的共同致病因素 |
| 4.2 腰椎黄韧带的正常及病理学表现 |
| 4.3 腰椎黄韧带肥厚的基本影响因素 |
| 4.4 源自2型糖尿病的代谢因素对腰椎黄韧带肥厚影响 |
| 4.5 MIF特性及在2 型糖尿病人肥厚黄韧带内含量的差异 |
| 4.6 MIF促进结缔组织纤维化作用 |
| 4.7 转化生长因子-β1 特性及组间含量差异 |
| 4.8 基质金属蛋白酶13 特性及组间含量差异 |
| 4.9 白细胞介素1特性及组间含量差异 |
| 4.10 白细胞介素-6 特性及组间含量差异 |
| 4.11 肿瘤坏死因子α特性及组间含量差异 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 MIF在糖浓度差异下的表达及其对成纤维细胞的促增殖效应与机制研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 主要试剂与仪器(表3-1 表3-2) |
| 1.2 不同浓度糖对NIH3T3 细胞MIF蛋白表达及增殖影响 |
| 1.3 不同浓度外源性MIF(rmMIF)对NIH3T3 细胞增殖的影响 |
| 1.4 MIF促进NIH3T3 细胞增殖机制研究 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 NIH3T3细胞在不同糖浓度环境下MIF的表达及细胞增殖情况 |
| 2.2 不同浓度外源性MIF(rmMIF)对NIH3T3 细胞增殖的影响 |
| 2.3 MIF促进NIH3T3 细胞增殖机制研究 |
| 3 讨论 |
| 3.1 整体观指导下分析消渴与腰痹病的联系 |
| 3.2 黄韧带主要的效应细胞在纤维化过程中的作用 |
| 3.3 MIF与组织纤维化的联系 |
| 3.4 高糖环境促进成纤维细胞对MIF的表达 |
| 3.5 MIF呈浓度耐性促进成纤维细胞增殖 |
| 3.6 MIF促进成纤维细胞增殖机制探究 |
| 3.7 MIF促进成纤维细胞增殖的机制总结 |
| 3.8 MIF与 TGF-β1 促成纤维细胞增殖协同效应分析 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 姜黄素对MIF诱导成纤维细胞炎性介质表达及促增殖效应的干预作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 主要试剂与仪器 |
| 1.2 主要溶液的配制 |
| 1.3 姜黄素对MIF促成纤维细胞增殖干预效应 |
| 1.4 姜黄素抑制MIF促成纤维细胞炎性介质及Ⅰ Ⅲ型胶原表达 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 姜黄素对MIF促成纤维细胞增殖干预效应 |
| 2.2 姜黄素抑制MIF促成纤维细胞炎性介质及Ⅰ Ⅲ型胶原表达 |
| 3 讨论 |
| 3.1 血瘀因素贯穿整体哲学观对消渴并发腰痹病 |
| 3.2 对MIF相关效应研究分析 |
| 3.3 实验用细胞的选择 |
| 3.4 促纤维化炎症介质对成纤维细胞的作用 |
| 3.5 促纤维化炎症介质对成纤维细胞作用存在网状效应 |
| 3.6 MIF促成纤维细胞炎症介质的表达分析 |
| 3.7 MIF促进诸项炎症介质表达机制总结 |
| 3.8 祖国医学对姜黄的药物特性认识及运用 |
| 3.9 现代医学对姜黄的药物特性研究及运用 |
| 3.10 姜黄有效成分的细胞毒性及实验剂量选择 |
| 3.11 姜黄素对MIF促成纤维细胞增殖干预效应 |
| 3.12 姜黄素抑制MIF促成纤维细胞炎性介质表达分析 |
| 4 结论 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文及科研情况 |
| 致谢 |
（3）DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮和神经再生的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮再生 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料与试剂 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.DNase Ⅰ促进正常和糖尿病小鼠角膜上皮再生 |
| 2.DNase Ⅰ活化角膜上皮再生相关信号通路 |
| 3.DNase Ⅰ抑制角膜上皮氧化应激相关信号通路 |
| 4.DNase Ⅰ对角膜上皮HIF-1α表达的调节 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜炎症反应 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料与试剂 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.糖尿病小鼠角膜上皮损伤后中性粒细胞浸润和NETs形成增加 |
| 2.DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜再生过程中中性粒细胞的炎症反应 |
| 3.DNase Ⅰ抑制糖尿病小鼠角膜再生过程中巨噬细胞的炎症反应 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜神经再生 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料与试剂 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 1.DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮下神经丛再生 |
| 2.DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤后角膜敏感度的恢复 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表(附录) |
| 致谢 |
（4）姜黄素对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤和纤维化的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）内皮细胞calpain在促进糖尿病心肌病中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一部分 :内皮细胞calpain敲除减轻糖尿病心肌病的损伤 |
| 1、前言 |
| 2、实验材料与方法 |
| 3、结果 |
| 4、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 内皮细胞calpain通过抑制血管再生加重糖尿病心肌血管损伤 |
| 1、前言 |
| 2、实验方法 |
| 3、结果 |
| 4、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 内皮细胞calpain通过介导EndoMT促进糖尿病心脏纤维化损伤 |
| 1、前言 |
| 2、实验方法 |
| 3、结果 |
| 4、讨论 |
| 不足之处 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 结论 |
| 综述一 糖尿病心肌病中诊断与治疗的机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 Calpain在心室重构和心力衰竭中的作用 |
| 参考文献 |
| 研究成果 |
| 缩略语表 |
| 致谢 |
（6）化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Notch和Hh信号通路表达的干预作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠“瘀血阻络证”的干预作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾脏损伤的干预作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Notch通路表达的干预作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Hh通路表达的干预作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 中医药对糖尿病肾脏病治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）2型糖尿病LncRNAs差异表达谱的筛选及功能研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 ：2型糖尿病LncRNAs差异表达谱的筛选 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂及实验设备 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 ：长链非编码RNAMEG3、MALAT1和MIAT在2型糖尿病患者外周血中的表达及临床意义 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 主要试剂及实验设备 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 质量控制 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 ：MEG3对高糖诱导的内皮细胞功能障碍的影响及作用机制 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究材料 |
| 1.2 主要试剂及实验设备 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 长链非编码RNA(lncRNA)在糖尿病及其并发症中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（8）运动及综合干预对糖尿病大鼠心血管代谢与收缩功能因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩写词表 |
| 前言 |
| 综述 |
| 1 糖尿病的研究现状 |
| 2 糖尿病心肌病的研究现状 |
| 3 糖尿病心血管代谢收缩因子的研究现状 |
| 4 运动对糖尿病心肌病作用的研究现状 |
| 5 药物对糖尿病心肌病作用的研究现状 |
| 1 仪器和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 糖尿病大鼠模型建立 |
| 1.3 分组和运动干预、运动加药干预 |
| 1.4 一般生理生化指标检测 |
| 1.5 心肌和血管形态学观察 |
| 1.6 心血管代谢和功能因子的基因蛋白检测 |
| 1.7 统计学 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 实验大鼠的一般生理变化 |
| 2.1.1 实验大鼠体重变化 |
| 2.1.2 实验大鼠体重的变化 |
| 2.1.3 实验大鼠的心脏相对重量和心脏/体重指数 |
| 2.2 实验大鼠一般生理化指标 |
| 2.2.1 实验大鼠血糖的变化 |
| 2.2.2 实验大鼠糖化血清蛋白的变化 |
| 2.2.3 各组大鼠口服糖耐量试验的结果 |
| 2.2.4 各组大鼠血脂三项的变化 |
| 2.3 实验大鼠心肌和血管组织形态的改变 |
| 2.4 实验大鼠心肌代谢因子的变化 |
| 2.5 实验大鼠血管代谢因子的变化 |
| 2.6 实验大鼠心肌收缩功能因子的变化 |
| 2.7 实验大鼠血管收缩功能因子的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 糖尿病大鼠模型建立 |
| 3.2 运动干预对糖尿病大鼠心血管的影响 |
| 3.2.1 运动干预对糖尿病大鼠生理的影响 |
| 3.2.2 运动干预对糖尿病大鼠心肌血管代谢因子的影响 |
| 3.2.3 运动干预对糖尿病大鼠心肌血管收缩因子的影响 |
| 3.3 运动联合药物干预对糖尿病大鼠心血管的影响 |
| 3.3.1 运动联合药物干预对糖尿病大鼠生理的影响 |
| 3.3.2 运动联合药物干预对糖尿病大鼠心肌血管代谢因子的影响 |
| 3.3.3 运动联合药物干预对糖尿病大鼠心肌血管收缩因子的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）糖尿病肾小管病变研究进展（论文提纲范文）
| 1 在进展的肾脏病中近曲小管的重要性 |
| 2 在糖尿病肾脏病中近曲小管上皮细胞的作用 |
| 3 在糖尿病肾小管病中致炎因子的作用 |
| 3.1 转化生长因子-β参与了细胞外基质堆积及细胞肥大的各环节 |
| 3.2 结缔组织生长因子 |
| 3.3 血小板衍化生长因子 (PDGF) |
| 3.4 单核细胞趋化因子-1 |
| 3.5 肝细胞生长因子 |
| 3.6 骨桥蛋白 |
| 4 在糖尿病肾小管病中糖基化终末产物的作用 |
| 4.1 对细胞外基质的作用 |
| 4.2 对血管内皮细胞的作用 |
| 4.3 对血管壁的作用 |
| 4.4 糖基化终末产物及受体 |
| 5 在糖尿病肾小管病中高血糖的作用 |
（10）黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠肾脏内皮细胞损伤的干预研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 糖尿病肾病的现代医学研究进展 |
| 第二章 糖尿病肾病的中医药研究进展 |
| 第三章 内皮细胞与糖尿病肾病 |
| 第四章 糖尿病性肾病的动物模型研究进展 |
| 第二篇 理论探讨 |
| 1 糖尿病肾病中医病名 |
| 2 糖尿病肾病中医病机探析 |
| 3 糖尿病肾病“益气行血、消症散结”治法的确立 |
| 4 黄芪卫矛合剂防治消渴病肾病的组方思路 |
| 第三篇 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 黄芪卫矛合剂对实验性糖尿病肾病大鼠糖、脂代谢及肾功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠Ⅳ型胶原及层粘连蛋白的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠肾组织NO 和ET-1 的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 黄芪卫矛合剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾脏HGF和TGF-β_1蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录照片 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、转化生长因子β1在糖尿病中的异常及临床意义（论文参考文献）
- [1]基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制[D]. 李晓文. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]高糖伴腰椎管狭窄黄韧带肥厚的炎性机制及姜黄素的干预效应研究[D]. 鲁齐林. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [3]DNase Ⅰ促进糖尿病小鼠角膜上皮和神经再生的作用和机制研究[D]. 张静. 青岛大学, 2019(07)
- [4]姜黄素对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤和纤维化的作用及机制[D]. 宋立果. 锦州医科大学, 2019(02)
- [5]内皮细胞calpain在促进糖尿病心肌病中的作用及机制研究[D]. 滕小梅. 苏州大学, 2018(05)
- [6]化瘀通络中药对糖尿病肾脏病大鼠肾组织Notch和Hh信号通路表达的干预作用[D]. 刘利飞. 河北医科大学, 2018(12)
- [7]2型糖尿病LncRNAs差异表达谱的筛选及功能研究[D]. 王志强. 新疆医科大学, 2018(12)
- [8]运动及综合干预对糖尿病大鼠心血管代谢与收缩功能因子的影响[D]. 杨红. 国家体育总局体育科学研究所, 2014(02)
- [9]糖尿病肾小管病变研究进展[J]. 蔡永红,张莲,赵津,赵克中,刘建峰. 临床荟萃, 2012(09)
- [10]黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠肾脏内皮细胞损伤的干预研究[D]. 杨敏. 北京中医药大学, 2007(02)
标签：糖尿病论文; 内皮细胞论文; 转化生长因子-β论文; 细胞生长因子论文; 心肌损伤论文;